sPLA-,2--ⅡA對正常人單核誘導的巨噬細胞膽固醇外流的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化過程是大血管及中血管的一種慢性炎癥，大量研究表明，在心血管病患者血清中分泌型磷脂酶型A2的IIA亞型（sPLA2-IIA）水平會升高，而且升高的程度與疾病的嚴重程度相關(guān)。許多研究證實sPLA2-IIA不僅僅是動脈粥樣硬化的危險因子和發(fā)生冠狀動脈事件的預測因子，而且在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起著一定的作用。目前關(guān)于sPLA2-IIA的抑制劑（Varespladib）已經(jīng)進入Ⅱ期臨床研究，但是sPLA2-IIA在促進動脈粥樣硬

2、化的發(fā)展進程中機制尚未完全清楚。膽固醇的逆轉(zhuǎn)運是在動脈粥樣硬化的發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其初始環(huán)節(jié)為膽固醇外流。本研究旨在探討sPLA2-IIA對于膽固醇外流環(huán)節(jié)的影響。
　　 研究目的
　　 1.探討不同濃度sPLA2-IIA對正常人外周血單核巨噬細胞ABCA1、ABCG1、SRB1的mRNA及蛋白的表達情況的影響。
　　 2.通過以HDL和ApoA1為接受體，研究不同濃度sPLA2-IIA干預后正常人單核巨噬細胞的膽

3、固醇外流功能。
　　 方法
　　 1.選取正常人外周血經(jīng)過Ficoll密度梯度離心法分離人外周血單個核細胞（PBMC），貼壁法進行篩選，M-CSF刺激培養(yǎng)使單核細胞巨噬化。CD68免疫組化染色鑒定巨噬細胞。
　　 2.Real-Time PCR方法檢測不同濃度sPLA2-IIA對正常人單核巨噬細胞上干預24h后ABCA1、ABCG1、SRBI的mRNA表達的影響。
　　 3.Western Blot方法檢

4、測不同濃度sPLA2-IIA對正常人單核巨噬細胞干預24h的ABCA1、ABCG1、SRB1的蛋白表達。
　　 4.H3膽固醇標記巨噬細胞，經(jīng)過不同濃度sPLA2-IIA干預24h后分別以HDL為接受體，觀察經(jīng)ABCG1通路的膽固醇外流；以apoA1為接受體，觀察經(jīng)ABCA1通路的膽固醇外流。
　　 5.統(tǒng)計分析：采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以X±SD表示，組間比較以one-way ANOVA進行分析。

5、
　　 結(jié)果：
　　 1.1）Real-Time PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著sPLA2-IIA濃度的增加，ABCA1mRNA表達呈下降趨勢；當sPLA2-IIA為0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml刺激巨噬細胞后ABCA1mRNA較空白對照組下降（P<0.01），但3個濃度組間的ABCA1的表達無明顯差別；1μg/ml的sPLA2-IIA對ABCA1表達抑制最為明顯，相對于其他濃度組亦有明顯的抑制作用（P<

6、0.01）；2）sPLA2-IIA濃度為0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.5μg/ml時，對ABCG1mRNA呈抑制趨勢，但未達到統(tǒng)計學差異；隨著濃度增加，該差異逐漸明顯，當sPLA2-IIA濃度為1μg/ml可明顯抑制ABCG1的表達（p=0.033）；3）sPLA2-IIA為0.5μg/ml及1μg/ml時對SRB1mRNA有著較明顯的抑制作用，P值分別為0.011和0.007。
　　 2.Western Blot檢

7、測結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過各濃度sPLA2-IIA干預24小時ABCA1、ABCG1、SRB1的蛋白表達在各組之間無顯著差異。
　　 3.經(jīng)過各濃度sPLA2-IIA干預24小時后由HDL和ApoA1介導的膽固醇外流率均有下降趨勢，但尚未達到統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論
　　 1.經(jīng)過sPLA2-IIA不同濃度干預正常人單核細胞衍生的巨噬細胞24小時，本研究的各干預濃度均對ABCA1的基因表達水平起抑制作用；sP