腎素-血管緊張素系統(tǒng)對THP-1源巨噬細(xì)胞三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)的影響及其機(jī)制探討.pdf

1、背景：
　　 大量研究表明腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)（RAAS）在高血壓和心血管疾病（CVD）發(fā)生發(fā)展和病理生理過程中起著關(guān)鍵的作用。AngⅡ作為RAS系統(tǒng)的主要效應(yīng)肽，除了能引起血流動力學(xué)的改變外，還可以作為一種前炎癥因子誘導(dǎo)多種炎癥因子的表達(dá)，促進(jìn)氧化應(yīng)激水平，在AS的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用。而巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成是AS斑塊損傷形成、發(fā)展和崩解的關(guān)鍵。目前發(fā)現(xiàn)，AngⅡ能從多個環(huán)節(jié)上促進(jìn)巨噬細(xì)胞泡沫化，包括，促進(jìn)巨噬

2、細(xì)胞攝取ox-LDL，下調(diào)ABCA1的表達(dá)，上調(diào)ACAT1的表達(dá)，并且AT1受體阻斷劑（ARB）的應(yīng)用可以拮抗血管緊張素Ⅱ的致泡沫化作用。但其具體調(diào)節(jié)機(jī)制仍不甚清楚。
　　 ARB是目前臨床常用的高血壓一線治療藥物，除能有效降壓之外，同時還具有改善胰島素抵抗、減輕心臟重構(gòu)等降壓外益處，其主要作用機(jī)制為選擇性阻斷 AT1受體，阻斷血管緊張Ⅱ收縮血管、升高血壓、促進(jìn)醛固酮分泌、水鈉潴留、交感神經(jīng)興奮等作用，并使血管緊張素Ⅱ合成反饋性

3、增加，作用于AT2受體，產(chǎn)生擴(kuò)血管、抗細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡等作用。目前發(fā)現(xiàn)，ARB類藥物中的替米沙坦、厄貝沙坦，除了可選擇性阻斷AT1受體外，還具有PPARγ的選擇性激動作用，可能具有獨(dú)立于降壓作用以外的改善代謝的作用。而PPARγ/LXRα途徑作為ABCA1調(diào)控機(jī)制中核心的因素，對ABCA1的表達(dá)有顯著上調(diào)作用。那么具PPARγ激動作用的ARB與不具PPARγ激動作用的ARB，在逆轉(zhuǎn) AngⅡ致泡沫化作用中的機(jī)制方面是否亦有差別呢?

4、
　　 本實(shí)驗旨在探討AngⅡ抑制巨噬細(xì)胞 ABCA1表達(dá)的相關(guān)受體及信號通路，并以ABCA1為參照基因，在高水平AngⅡ作用下，探討不同血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）對 ABCA1表達(dá)的影響及其作用機(jī)制。
　　 研究目的：
　　 1.探討AngⅡ?qū)HP-1源巨噬細(xì)胞ABCG1表達(dá)的影響，同時驗證.AngⅡ?qū)HP-1源巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)的抑制作用，并探討其濃度和時間依賴關(guān)系。
　　 2.探討An

5、gⅡ抑制THP-1源巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)的相關(guān)受體及信號通路。
　　 3.在高水平 AngⅡ作用下，探討不同血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）對ABCA1表達(dá)的影響及其作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗選用THP-1單核細(xì)胞系。
　　 2.巨噬細(xì)胞由 THP-1單核細(xì)胞系經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化獲得，巨噬細(xì)胞由CD68免疫組化染色鑒定。
　　
　　 3.分別用AngⅡ不同濃度和不同作用時間

6、對THP-1源巨噬細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，Real-time PCR和Western Blot檢測ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 4.在AngⅡ干預(yù)的基礎(chǔ)上，分別用AT1受體阻斷劑纈沙坦、AT2受體阻斷劑PD123319和NF-kB阻斷劑TPCK預(yù)處理THP-1源巨噬細(xì)胞，Real-time PCR和Western Blot檢測ABCA1的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 5.在AngⅡ干預(yù)的基礎(chǔ)上，分別用替米沙坦、

7、纈沙坦、吡咯列酮預(yù)處理THP-1源巨噬細(xì)胞；此外還分別用PPARγ抑制劑GW9662進(jìn)行聯(lián)合干預(yù)，Real-timePCR和Western Blot檢測ABCA1的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　 6.統(tǒng)計分析：采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以X±SD表示，組間比較以one-way ANOVA進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.THP-1細(xì)胞系在PMA誘導(dǎo)下，成功分化為具有吞噬功能的多形性巨噬細(xì)胞，CD

8、68抗原免疫組化染色呈陽性反應(yīng)。
　　 2.AngⅡ0.01μM、0.1μM、1μM均能顯著抑制ABCA1 mRNA和蛋白的表達(dá)（p<0.01），且呈現(xiàn)出一定的濃度依賴性；而對ABCG1的mRNA和蛋白表達(dá)水平無影響（p>0.05）。將AngⅡ1μM分別干預(yù)24h、36h、48h，結(jié)果顯示AngⅡ自24h即開始對ABCA1表達(dá)有顯著抑制作用（p<0.01），并在48h達(dá)到最大，呈現(xiàn)出一定的時間依賴性；而對ABCG1的表達(dá)在各時間

9、點(diǎn)均無影響（p>0.05）。
　　 3.AT1R阻斷劑纈沙坦10μM能顯著逆轉(zhuǎn)AngⅡ1μM對ABCA1 mRNA和蛋白表達(dá)的抑制作用（p<0.05 VS.AngⅡ組），而AT2R阻斷劑PD12331910μM組與AngⅡ組相比ABCA1的表達(dá)并無顯著性差異（p>0.05）；AT1R與AT2R共同阻斷組同樣能顯著逆轉(zhuǎn)AngⅡ?qū)BCA1的抑制作用（p<0.05 VS.AngⅡ組），但與單純AT1R阻斷組相比并無顯著性差異（p>0

10、.05）。NF-kB阻斷劑TPCK同樣可以顯著逆轉(zhuǎn)AngⅡ?qū)BCA1 mRNA的抑制作用，但在蛋白水平，TPCK有逆轉(zhuǎn)AngⅡ抑制ABCA1蛋白表達(dá)的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義（p=0.088 VS。AngⅡ組）。
　　 4.替米沙坦（10μM）、纈沙坦（10μM）、吡咯列酮（10μM）均能顯著逆轉(zhuǎn)AngⅡ1μM對ABCA1表達(dá)的抑制作用（p<0.01 VS.AngⅡ組）；加入PPARγ阻斷劑GW9662聯(lián)合干預(yù)能顯著抑制吡咯列酮對

11、ABCA1表達(dá)的上調(diào)作用（p<0.01），而對替米沙坦10μM組與纈沙坦10μM組ABCA1的表達(dá)與各自相應(yīng)組別比較無顯著性差異（p>0.05）
　　 結(jié)論：
　　 1.AngⅡ可顯著抑制THP-1源巨噬細(xì)胞ABCA1 mRNA和蛋白的表達(dá)；且作用強(qiáng)度呈濃度和時間依賴性。
　　 2.AngⅡ主要通過與AT1受體結(jié)合發(fā)揮其對巨噬細(xì)胞ABCA1表達(dá)的抑制作用，并且該抑制作用與NF-kB信號通路的激活相關(guān)。