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文檔簡介
1、小鼠的子宮珠蛋白結(jié)合蛋白(uteroglobin-binding protein,UGBP,也稱UG受體,uteroglobin receptor)可能與Clara細(xì)胞分泌蛋白(CCSP/UG)發(fā)揮其多功能的生物學(xué)活性有著密切的聯(lián)系,但是當(dāng)前對于UGBP在肺纖維化時的確切的表達(dá)模式特點(diǎn)及其生物學(xué)意義都還不明確,值得進(jìn)一步研究。同時我們知道,TGF-β1在小鼠肺纖維化的發(fā)生發(fā)展中起著核心作用。提示TGF-β1信號通路對UGBP的轉(zhuǎn)錄調(diào)控可
2、能與博萊霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化中UGBP的變化有關(guān)。
目的:通過觀察博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化時肺內(nèi)UGBP基因和蛋白表達(dá)時間和空間模式的改變明確肺纖維化時UGBP的動態(tài)表達(dá)規(guī)律,并在此基礎(chǔ)上觀察在體外組織培養(yǎng)模型中阻斷TGF-β1的作用時UGBP的變化初步探討UGBP的表達(dá)改變機(jī)制。為進(jìn)一步闡明肺纖維化發(fā)生發(fā)展過程中UGBP表達(dá)變化的分子機(jī)制和全面揭示UGBP轉(zhuǎn)錄調(diào)控原理的研究提供新的啟示。
方法:⑴UGBP
3、在腹腔注射BLM誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型肺組織中的表達(dá)。50只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為正常對照組(Con組)和肺纖維化模型組(D1、D6、D12、D18組),每組10只。除Con組外,其余各組采用腹腔注射BLM致小鼠肺纖維化模型,連續(xù)注射10天,此后分別于最后一次注射后的第1、6、12、18天處死各組小鼠,左肺上葉制成組織芯片行蘇木素-伊紅(HE),Masson膠原染色并運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色的方法觀察UGBP蛋白在小鼠肺組織的表達(dá),右肺及左肺
4、下葉測定羥脯氨酸(HYP)的含量,RT-PCR法半定量測定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型膠原mRNA在肺內(nèi)的表達(dá)。⑵20只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為正常小鼠組(Con組),正常小鼠+TGF-β1受體拮抗劑組(Con+R0158組),肺纖維化模型組(B組),肺纖維化模型+TGF-β1受體拮抗劑組(B+R0158組),每組5只。B組和B+R0158組采用腹腔注射BLM致小鼠肺纖維化模型,連續(xù)注射10天,于注射后第6天處死各組小鼠,分別將其肺切片至
5、于Transwell板上培養(yǎng),Con+R0158組和B+R0158組培基內(nèi)加入TGF-β1受體拮抗劑(R0158),培養(yǎng)4天后收集組織用RT-PCR法半定量測定UGBP、TGF-β1和前Ⅰ型膠原mRNA在肺內(nèi)的表達(dá)。
結(jié)果:①腹腔注射BLM肺纖維化模型成功,根據(jù)HE染色,膠原染色和羥脯氨酸的測定結(jié)果顯示注射后第1、6、12、18天小鼠肺纖維化程度逐漸加重。②免疫組織化學(xué)染色顯示不同時期UGBP蛋白表達(dá)情況不同。經(jīng)博萊霉素處
6、理后第1天和第6天UGBP在氣道上皮的表達(dá)有所增強(qiáng),但在肺泡間質(zhì)的表達(dá)仍較弱;第12天在氣道上皮的表達(dá)變化不明顯,但在纖維組織增生的部位有不均一的表達(dá);第18天在氣道上皮仍有強(qiáng)表達(dá),并且在膠原纖維沉積的部位的表達(dá)更為顯著。③RT-PCR檢測不同時期UGBP,TGF-β1,前Ⅰ型膠原,mRNA表達(dá)變化:TGF-β1的表達(dá)在博萊霉素處理后第6天開始顯著高于正常組(P<0.05),12天時持續(xù)高表達(dá),第18天表達(dá)最高(P<0.01)。前Ⅰ型膠
7、原的表達(dá)在博萊霉素處理后第12天開始顯著高于正常組(P<0.01),18天時持續(xù)高表達(dá)。正常對照組中UGBP僅為弱表達(dá),而纖維化模型組UGBPmRNA表達(dá)在第1天開始升高,但升高程度沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,第18天UGBP顯著升高(P<0.05)。④肺組織體外培養(yǎng)4天后RT-PCR檢測各組UGBP,TGF-β1,前Ⅰ型膠原mRNA表達(dá)變化:TGF-β1的表達(dá)在B組和B+R0158組顯著高于正常對照組(P<0.01),B組和B+R0158組,Co
8、n和Con+R0158組之間沒有顯著性差異。B組前Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)顯著高于正常對照組(P<0.01),B+R0158組前Ⅰ型膠原mRNA與B組相比顯著下降(P<0.01),但仍高于正常對照組(P<0.05)。B組UGBP mRNA的表達(dá)顯著高于正常對照組(P<0.01),B+R0158組UGBP mRNA與B組相比顯著下調(diào)(P<0.01),而和正常對照組之間相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)論:⑴腹腔注射BLM后小鼠肺組織纖維
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