HDAC1和HDAC2在羅哌卡因緩解CCI大鼠慢性疼痛的機制中的應用.pdf

1、目的:
　　局麻藥目前已被廣泛用于手術麻醉和急性疼痛治療。最近的臨床和基礎研究發(fā)現鞘內注射局麻藥也可以緩解神經病理性疼痛，但是其具體機制不清。因為鈉通道阻滯被認為是局麻藥的主要的作用機制，而鞘內注射低于鈉通道阻滯的濃度的局麻藥即獲得緩解神經病理性的效果，而且局麻藥的鎮(zhèn)痛作用維持時間長于藥物半衰期。
　　越來越多的證據支持表觀遺傳學機制參與了神經病理性疼痛的形成過程。神經病理性疼痛的重要特征是神經元的可塑性改變，不可再生的神經

2、元細胞可塑性改變主要依賴于表觀遺傳學機制;而且，長期記憶和慢性疼痛的機制類似，長時程記憶中的表觀遺傳學改變可能同樣適用于慢性疼痛。
　　本實驗分兩部分，第一部分擬證實連續(xù)鞘內注射0.25％的羅哌卡因有緩解慢性疼痛作用建立了坐骨神經結扎模型，第二部分擬分子水平探索CCI手術后不同時間點神經病理性疼痛調節(jié)中樞—脊髓去乙酰化水平的變化及鞘內注射0.25％羅哌卡因對這種變化的影響。此外還初步探索了去乙?；缚赡艿淖饔玫奈稽cGDNF。

3、>　　方法:
　　1.鞘內置管成功5天后的成年雄性SD大鼠30只，隨機分為3組:Sham+NS組(n=10)，CCI+NS組(n=10)和CCI+Ropivacaine組(n=10)。Sham+NS和CCI+NS組術后第7～13天連續(xù)7天注射生理鹽水;CCI+Ropivacaine組手術后連續(xù)7天注射0.25％羅哌卡因;術前1，3天及術后3、7、10、14、15、16、17、21天分別對左右足掌“花環(huán)”中央的機械痛閾和熱痛閾進行評

4、價，第7、10天行為學于鞘內注射前測量。術后第14天處死大鼠，取腰膨大組織用于后續(xù)分子生物學研究。
　　2.體重200～250g的成年雄性SD大鼠35只，隨機分為3組:Na(i)ve組(n=5)，不做任何處理;Sham組(n=15)，僅暴露左側坐骨神經而不結扎;CCI組(n=15)，按Bennett和Xie的方法建立左側CCI模型。術前1，3天及術后3、7、10、14、21天分別對左右足掌“花環(huán)”中央的機械痛閾和熱痛閾進行評價。于

5、術后7，10，14天處死大鼠，取腰膨大組織，和前一部分用于Western blot的標本一起用于檢測I類組蛋白去乙?；?組蛋白去乙?；?(HDAC1)和組蛋白去乙?；?(HDAC2);以及膠質細胞源性生長因子GDNF在脊髓中的蛋白表達水平。于術后14天處死大鼠，灌注固定后行冰凍切片和前一部分用于免疫熒光的標本一起進行HDAC1，HDAC，GDNF的免疫熒光染色及HDAC1、HDAC2熒光雙標進行細胞定位。
　　結果:

6、　　1.三組大鼠術前痛閾無明顯區(qū)別(P＞0.05)。與Sham+NS組比較，CCI+NS組機械痛閾和熱痛閾降低(P＜0.05)。與CCI+NS比較，CCI+Ropi組在羅哌卡因注射后的CCI術后D14、D15天機械痛閾和D10天、D14、D15天熱痛閾有所增加，(p＜0.05)但此后D16，D17、D21天的痛閾差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與CCI+NS組比，D14天脊髓HDAC1 HDAC2的蛋白表達減少(P＜0.05)，而GD

7、NF蛋白表達則增加(P＜0.05)。CCI+Ropi組D14天脊髓背角HDAC1、HDAC2免疫熒光的陽性細胞數增加(P＜0.05);
　　2.三組大鼠術前機械痛和熱痛閾差異無統(tǒng)計學意義，Sham組和na(i)ve組熱痛閾和機械痛閾無明顯變化(P＞0.05)。與Sham組相比，CCI組第3天開始出現機械痛閾和熱痛閾的降低，第14天達峰，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);CCI組脊髓HDAC1，HDAC2蛋白表達量較Sham組增加，有統(tǒng)

8、計學意義(P＜0.05) GDNF蛋白表達量較Sham組減少(P＜0.05);CCI組第14天標本脊髓背角HDAC1，HDAC2免疫熒光陽性細胞數目較sham組增加(P＜0.05)，而GDNF免疫熒光陽性面積比Sham組減少(P＜0.05)
　　結論:
　　1.CCI大鼠術后逐漸出現明顯的痛覺敏感，脊髓腰膨大HDAC1、HDAC2蛋白表達量的變化與行為學變化基本一致，GDNF表達量與行為學變化相反。
　　2.鞘內連續(xù)注