組蛋白去乙?；窰DAC1在胃癌中的表觀遺傳調(diào)控及其作用機制的研究.pdf

1、胃癌（Gastric Cancer，GC）是四大最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康。在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中及治療過程中有許多表觀遺傳學(xué)改變，可導(dǎo)致細(xì)胞生長、增殖、分化、凋亡等信號通路的異常以及影響對腫瘤的進(jìn)一步治療。組蛋白去乙?；窰DAC1在表觀遺傳調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中有重要作用，并且在多種惡性腫瘤中表達(dá)增高，但其在胃癌中怎樣影響細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞對化療藥物的反應(yīng)仍有待進(jìn)一步研究。
　　目的:
　　第一部分研究:已有研究表明阿霉素

2、與HDAC抑制劑聯(lián)用具有協(xié)同作用，但其相互作用的分子機制尚未明確。本實驗意在明確胃癌中HDAC1在阿霉素作用下受表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的分子機制以及HDAC1在阿霉素抗腫瘤過程中發(fā)揮生物學(xué)作用的分子機制。第二部分研究:已有研究表明在胃癌中HDAC1表達(dá)增高，但HDAC1在胃癌惡化過程中發(fā)揮作用的分子機制尚未明確。本實驗意在探索HDAC1作為表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)調(diào)控分子抑制胃癌細(xì)胞凋亡的分子機制以及HDAC抑制劑（HDACi）促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡的表觀遺傳

3、學(xué)機制。兩部分研究試圖分別從HDAC1對化療藥物作用下的胃癌細(xì)胞的影響及HDAC1對胃癌細(xì)胞自發(fā)凋亡的影響兩個方面綜合闡釋HDAC1促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展與耐藥的表觀遺傳學(xué)分子機制。
　　方法:
　　第一部分研究:首先通過western blot檢測了胃癌細(xì)胞在接受阿霉素處理后HDAC1蛋白表達(dá)量的變化。進(jìn)一步通過軟件篩選及RT-qPCR方法找出在阿霉素處理后影響HDAC1表達(dá)的microRNA，并從功能與結(jié)構(gòu)兩方面驗證該mic

4、roRNA對HDAC1的調(diào)控。MTS細(xì)胞存活實驗證實HDAC1對阿霉素敏感性的影響。最后用流式細(xì)胞術(shù)驗證HDAC1對阿霉素?fù)p傷DNA作用的影響。第二部分研究:首先通過western blot及流式細(xì)胞術(shù)檢測HDAC抑制劑曲古霉素A(TSA)處理后胃癌中caspase2凋亡信號通路的激活。RT-PCR及westem blot檢測TSA處理后CRADD的表達(dá)，進(jìn)一步用流式細(xì)胞術(shù)驗證CRADD在TSA誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞凋亡中的作用。免疫組化染色分

5、析胃癌中CRADD的表達(dá)。接下來運用克隆形成實驗等確認(rèn)CRADD對胃癌的生長抑制作用。最后應(yīng)用染色質(zhì)免疫共沉淀ChIP實驗等證明在胃癌中HDAC1可以直接調(diào)控CRADD的轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)果:
　　第一部分研究揭示了胃癌中HDAC1在阿霉素作用下的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制以及其在阿霉素抗腫瘤作用中的影響。我們發(fā)現(xiàn)阿霉素通過增高miR-520h的表達(dá)，miR-520h靶向HDAC13'UTR，繼而特異性地下調(diào)HDAC1蛋白的表達(dá)，進(jìn)而使

6、得染色質(zhì)疏松，促進(jìn)了阿霉素嵌入DNA結(jié)構(gòu)中，加劇了阿霉素誘導(dǎo)的DNA損傷作用，最終進(jìn)一步殺傷胃癌細(xì)胞。第二部分研究闡述了胃癌中HDAC1調(diào)控凋亡信號通路的表觀遺傳學(xué)機制及功能。我們發(fā)現(xiàn)在胃癌中HDAC1通過促進(jìn)CRADD的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，最終激活Caspase2并促進(jìn)Caspase2依賴的細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　本篇論文從多角度多方向闡釋了組蛋白去乙?；窰DAC1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制與功能，為HDAC抑制劑治