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文檔簡介
1、多房棘球蚴病俗稱泡球蚴病是由多房棘球絳蟲的幼蟲(多房棘球蚴、泡球蚴)寄生于人或動物肝臟所引起的一種人獸共患寄生蟲病,它的成蟲主要寄生于狐貍、狼和犬的小腸內(nèi)。本病主要在北半球高緯度地區(qū)和凍土地帶流行,但隨著世界貿(mào)易和全球化進程的推進,該病有向南半球蔓延的趨勢。它不僅能嚴重危害人體的健康,而且還是一個嚴重的社會經(jīng)濟問題。目前,對于該病的治療主要是以手術切除為主,藥物治療為輔,但是由于泡球蚴呈腫瘤樣無限浸潤生長,手術切除后能發(fā)生轉(zhuǎn)移,因此對泡
2、球蚴病的預防成為流行區(qū)各級政府所優(yōu)先關心的問題。研究多房棘球絳蟲保護性抗原EM95的免疫保護作用對泡球蚴病疫苗研制與開發(fā)具有十分重要的意義。
本研究以NCBI數(shù)據(jù)庫Em95基因序列作為參考序列設計引物,以多房棘球蚴總RNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR擴增,獲得Em95基因完整ORF序列,并對該序列進行了相關的生物信息學分析。結(jié)果表明,EM95蛋白的編碼基因長471bp,與參考序列的相似性為100%,由156個氨基酸殘基組成,其上
3、有2個N-糖基化位點,N端有一長為16個氨基酸的信號肽序列,C端有由23個氨基酸組成的跨膜區(qū),屬于分泌型糖蛋白。B細胞抗原表位分析表明,EM95有6個潛在的抗原表位,比EG95預測的抗原表位少一個。將全長的Em95基因和截去編碼信號肽及跨膜區(qū)的Em95基因分別克隆到原核表達載體中并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Rosetta感受態(tài)細胞中,用IPTG誘導使其表達。結(jié)果表明,全長的Em95基因以包涵體形式表達,而截去信號肽及跨膜區(qū)的Em95基因(tEm95
4、)以可溶性蛋白形式表達。將純化后的tEM95重組蛋白免疫BALB/c小鼠(雌性,6周齡),小鼠分為免疫組(首免50μg,以后減半,40只)、佐劑組(40只)和對照組(40只),三次免疫兩周后腹腔接種多房棘球蚴原頭蚴(100個/只)進行攻擊感染,9周后對試驗小鼠進行剖檢,結(jié)果表明EM95重組蛋白對小鼠的保護率為27.58%,減蚴率為60.52%~67.38%。結(jié)論認為,EM95重組蛋白對繼發(fā)性多房棘球蚴病具有一定的保護作用,能明顯抑制多房
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