新型多房棘球蚴亞單位疫苗CTB-Emy162的研究.pdf

1、目的：構建融合基因 CTB-Emy162原核表達系統(tǒng)，純化得到融合蛋白。建立多房棘球蚴亞單位疫苗 CTB-Emy162的動物模型，觀察亞單位疫苗 CTB-Emy162免疫原性和抗原性。
　　方法：根據(jù)多房棘球蚴抗原Emy162在GenBank中的序列，用OptimumTM Codon軟件優(yōu)化Emy162，從而獲得適合大腸桿菌BL-21表達的Emy162基因序列。PCR擴增Emy162基因，利用分子生物學技術與免疫佐劑霍亂毒素B亞基

2、（CTB）相偶聯(lián)。設計出一個科學合理的亞單位疫苗 CTB-Emy162。構建 CTB和 Emy162雙基因原核表達質(zhì)粒pET-28a-CTB-Emy162，將該質(zhì)粒轉化于E.coli BL-21（DE3）中，經(jīng)IPTG誘導蛋白表達后，利用Ni-NTA柱親和層析結合離子交換色譜法純化后獲得的蛋白。在獲得蛋白 CTB-Emy162基礎上，建立實驗組及對照組的動物模型：將純化后的重組蛋白CTB-Emy162免疫SPF級BALB/c小鼠作為實驗

3、組，PBS免疫作為對照組。采用脾淋巴細胞增殖、ELISA等方法確證重組蛋白CTB-Emy162的免疫原性和特異性。
　　結果：成功構建重組蛋白 CTB-Emy162的原核表達載體，并獲得純化后的重組蛋白CTB-Emy162。經(jīng)脾淋巴細胞增殖實驗、ELISA等分子生物學和免疫學方法證實CTB-Emy162有良好的免疫原性和抗原活性。
　　結論：經(jīng)原核表達的多房棘球蚴亞單位疫苗 CTB-Emy162具有良好抗原性和免疫效果，有可