天然免疫新分子ERIS的鑒定及相關(guān)抗病毒作用機(jī)制的研究.pdf

1、天然免疫是宿主抵抗病原微生物入侵的第一道防線(xiàn),是一種生物體長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的很保守的防御機(jī)制。近20年來(lái),研究人員發(fā)現(xiàn)天然免疫對(duì)于機(jī)體抵抗病毒入侵發(fā)揮重要作用。病毒感染宿主細(xì)胞后,主要由一類(lèi)模式識(shí)別受體識(shí)別(germline-encoded pattern recognition receptors, PRRs),這些受體介導(dǎo)I型干擾素及炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生,并受到多種嚴(yán)格的調(diào)控機(jī)制的調(diào)控。近年來(lái),人們對(duì)天然免疫信號(hào)通路的研究取得了很大

2、進(jìn)展,但是仍然有很多問(wèn)題沒(méi)有解決,尤其是胞內(nèi)識(shí)別病毒RNA和DNA的信號(hào)通路研究的還不完善,參與胞內(nèi)天然免疫通路的很多新基因尚未發(fā)現(xiàn)。
　　為了深入研究固有免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子機(jī)制,我們利用經(jīng)過(guò)VSV病毒、脂多糖LPS和單鏈RNA處理過(guò)的骨髓來(lái)源的巨噬細(xì)胞cDNA表達(dá)文庫(kù)大規(guī)模功能性篩選激活干擾素IFNβ,IFNα4,IFNα8啟動(dòng)子的固有免疫新基因。最后,我成功地篩選到一個(gè)天然免疫新分子并命名為 ERIS(an endoplasmi

3、c reticulum IFN stimulator,ERIS)。除了ERIS我還篩選到已知的激活I(lǐng)FNα4啟動(dòng)子的陽(yáng)性分子IRF1,表明此篩選系統(tǒng)是有效的。
　　ERIS在細(xì)胞抗病毒免疫過(guò)程中起重要作用,過(guò)量表達(dá)ERIS強(qiáng)烈地激活細(xì)胞內(nèi)抗病毒通路并誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的I型干擾素和I型干擾相關(guān)基因表達(dá)上調(diào),同時(shí)也激活炎癥相關(guān)因子從而抑制多種病毒的復(fù)制。Eris缺陷細(xì)胞完全喪失胞內(nèi)DNA誘導(dǎo)的I型干擾素產(chǎn)生的能力并且導(dǎo)致DNA病毒大量擴(kuò)增

4、,說(shuō)明ERIS主要參與細(xì)胞內(nèi) DNA誘導(dǎo)的天然免疫信號(hào)通路。ERIS是一跨膜蛋白,我們研究發(fā)現(xiàn)ERIS定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng),正確定位對(duì)其功能的行使至關(guān)重要,經(jīng)過(guò)DNA病毒感染后, ERIS發(fā)生很明顯的轉(zhuǎn)位變化?？缒^(qū)附近的RIR和RYR作為兩個(gè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列,對(duì)其定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及維持蛋白穩(wěn)定性是必需的。ERIS在細(xì)胞受到病毒感染等免疫刺激后發(fā)生包括泛素化、磷酸化、二聚化等多種修飾作用。Coumermycin誘導(dǎo)的ERIS天然二聚體可以快速?gòu)?qiáng)烈地誘

5、導(dǎo)下游 I型干擾素的上調(diào),闡明了ERIS通過(guò)形成同源二聚體活化抗病毒信號(hào)通路的反應(yīng)機(jī)制。
　　我們實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)一條由病毒感染誘導(dǎo)的STAT6活化,并最終特異調(diào)控一類(lèi)免疫細(xì)胞趨化因子(CCL2和CCL20)表達(dá)上調(diào)的新通路。Eris和Tbk1缺陷MEF細(xì)胞喪失了由SeV和HSV-1對(duì)STAT6-CCL2通路的活化;Mavs缺陷MEF細(xì)胞也失去SeV對(duì)STAT6-CCL2通路的活化,而不影響HSV-1的活化效應(yīng)。說(shuō)明ERIS、TBK1和