成年公兔生精細(xì)胞和支持細(xì)胞的純化及體外培養(yǎng).pdf

1、為了研究生精細(xì)胞和支持細(xì)胞在體外的生長特性、形態(tài)特征以及這兩種細(xì)胞之間的相互關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)以成年公兔的睪丸為實(shí)驗(yàn)材料，采用不同的酶處理方法對睪丸精細(xì)管進(jìn)行消化，然后利用低滲液進(jìn)行處理和選擇性貼壁培養(yǎng)，對支持細(xì)胞進(jìn)行純化，并且還對支持細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定；同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)還通過Percoll密度梯度離心和選擇性貼壁培養(yǎng)的方法，對生精細(xì)胞進(jìn)行純化；最后，將純化的生精細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)，同時(shí)還將純化的生精細(xì)胞與支持細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。結(jié)果如下： 1 采

2、用兩種消化方法，均能得到單細(xì)胞懸液，并且單個(gè)睪丸所獲細(xì)胞總數(shù)分別為5.68×10<'8>個(gè)和4.07×10<'8>個(gè)，二者之間差異不顯著(P>0.05)；所得細(xì)胞懸液中圓形細(xì)胞比率分別為86.66％和79.21％，兩者之間差異也不顯著(P>0.05)：就細(xì)胞存活率而言，兩者差異顯著(95.28％VS 82.91％，P<0.05)。 2 利用20 mM nis-HC1對細(xì)胞懸液進(jìn)行低滲處理后，支持細(xì)胞的比率升高，與處理前相比，差異

3、顯著(23.31％VS 16.01％，P<0.05)；但細(xì)胞的存活率降低，與處理前相比差異極顯著(80.98％VS 95.96％，P<0.01)。 3 將低滲處理后的支持細(xì)胞懸液和未經(jīng)處理的細(xì)胞懸液都進(jìn)行選擇性貼壁培養(yǎng)，結(jié)果表明，兩種細(xì)胞懸液中的支持細(xì)胞比率都顯著升高。經(jīng)低滲處理的細(xì)胞懸液培養(yǎng)后與培養(yǎng)前相比，支持細(xì)胞的比率二者間差異極顯著(76.01％VS 23.31％．P<0.01)，細(xì)胞存活率二者間差異顯著(88.02％VS

4、 80.89％，P<0.05)：未經(jīng)處理的細(xì)胞懸液培養(yǎng)后，支持細(xì)胞的比率也升高了，與培養(yǎng)前相比差異顯著(42.86％VS 16.01％，P<0.05)，而細(xì)胞存活率有所下降，但差異不顯著(90.48％VS 95.96％，P>0.05)。此外，將這兩種細(xì)胞懸液培養(yǎng)后的支持細(xì)胞比率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，二者間差異極顯著(76.01％VS 42.86％，P<0.01)。 4．消化得到的細(xì)胞懸液經(jīng)Percoll密度梯度離心后，檢測發(fā)現(xiàn)，生精細(xì)胞主要在2