大鼠單次全腦照射早期皮層microRNA差異表達(dá)的研究.pdf

1、隨著醫(yī)學(xué)放射技術(shù)的發(fā)展，放射技術(shù)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)中的診斷和治療。在疾病診斷中，X射線檢查如X線射片、數(shù)字減影血管造影(DSA)、X射線計算機(jī)斷層掃描(CT)和CT血管成像等在醫(yī)學(xué)實踐中的應(yīng)用非常普遍;在疾病治療中，現(xiàn)代放射治療是治療惡性腫瘤的主要手段之一，有時是唯一的手段。然而隨著放射技術(shù)的不斷改進(jìn)及臨床中廣泛應(yīng)用，電離輻射潛在致癌風(fēng)險及放射性損傷備受關(guān)注，因此研究電離輻射致癌及放射性損傷的機(jī)理對放射學(xué)的發(fā)展有重要的意義。
　　研究

2、發(fā)現(xiàn)一類新的非編碼RNA—microRNA(miRNA)參與輻射誘導(dǎo)的生物學(xué)反應(yīng)過程，研究表明輻射能在不同的組織和細(xì)胞中誘導(dǎo)miRNA的表達(dá)改變;miRNA在大腦的發(fā)育和功能中有很重要的作用。因此研究miRNA如何參與電離輻射引起的生物效應(yīng)對揭示輻射的分子生物學(xué)機(jī)制及潛在的臨床應(yīng)用價值具有重要意義，miRNA有可能成為放射病診斷和治療的潛在新靶點。
　　本研究擬探索放射性腦損傷早期miRNA的差異表達(dá)，為進(jìn)一步研究提供依據(jù)。而腦組

3、織的放射性損傷主要特征之一是血腦屏障的破壞。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成細(xì)胞，因此本實驗選擇腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞模擬體外放射模型。
　　一、大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的實驗研究
　　目的：獲取miRNA芯片所需的大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(BMVECs)。
　　方法：采用兩次酶消化法、密度梯度離心法獲取BMVECs;應(yīng)用vWF和GFAP免疫熒光雙重標(biāo)記方法進(jìn)行BMVECs鑒定。
　　結(jié)果：成功在體外培養(yǎng)出BMVECs

4、，免疫熒光標(biāo)記為vWF標(biāo)記陽性、GFAP標(biāo)記陰性。
　　二、電離輻射后大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的miRNA表達(dá)譜變化的實驗研究
　　目的：觀察電離輻射后BMVECs中miRNA表達(dá)的差異。
　　方法：對融合的BMVECs采用6MV-X線照射，照射劑量為10Gy，用miRNA芯片分析照射組和對照組miRNA表達(dá)差異，選取目標(biāo)miRNA進(jìn)行RT-qPCR驗證。
　　結(jié)果：基因芯片結(jié)果中顯示總共有18個miRNA在照射后發(fā)

5、生差異表達(dá)，其中7個上調(diào)，11個下調(diào);miR-34a上調(diào)10.8倍，miR-347上調(diào)約17.9倍，miR-106b約下調(diào)3.6倍。RT-qPCR驗證顯示照射組BMVECs的miR-34a、miR-347和miR-106b表達(dá)譜改變和芯片結(jié)果相符合。
　　三、大鼠單次全腦照射后早期大腦皮層miRNA表達(dá)改變的實驗研究
　　目的：分別觀察在0、2、10和30Gy大鼠單次全腦照射后，1天和7天時大腦皮層目標(biāo)miRNA表達(dá)的改變。

6、
　　方法：建立0、2、10和30Gy照射劑量大鼠單次全腦照射模型，分別在1天和7天時取大腦皮層，使用RT-qPCR觀察miR-106b、miR-34a和miR-34表達(dá)譜改變。
　　結(jié)果：與0Gy照射組比較，照射后1天，2Gy組miR-106b表達(dá)無顯著差異、miR-34a約上調(diào)6.4倍、miR-347約上調(diào)2倍;10Gy組miR-106b約下調(diào)1.7倍、miR-34a約上調(diào)5.3倍、miR-347表達(dá)無顯著差異;30Gy

7、組miR-106b約下調(diào)2.5倍、miR-34a表達(dá)無顯著差異、miR-347約下調(diào)1.6倍。照射后1周，2Gy組miR-106b表達(dá)無顯著差異、miR-34a約上調(diào)1.4倍、miR-347約上調(diào)2.3倍;10Gy組miR-106b表達(dá)無顯著差異、miR-34a約上調(diào)2.6倍、miR-347約上調(diào)5.3倍;30Gy組miR-106b約下調(diào)1.4倍、miR-34a約上調(diào)1.8倍、miR-347約上調(diào)3.3倍。
　　結(jié)論：
　　

8、1.通過兩次酶消化法和密度梯度離心法可獲得較理想的BMVECs，經(jīng)vWF免疫熒光標(biāo)記陽性、GFAP標(biāo)記陰性。
　　2.照射后早期即發(fā)生miRNA表達(dá)譜的改變，miRNA芯片提示總共有18個miRNA在照射后發(fā)生差異表達(dá)，其中7個上調(diào)，11個下調(diào);應(yīng)用RT-qPCR對芯片結(jié)果進(jìn)行驗證，結(jié)果顯示照射組BMVECs的miR-34a、miR-106b和miR-347表達(dá)譜改變和芯片結(jié)果相符合。
　　3.使用RT-qPCR觀察大鼠大腦