豬瘟病毒疫苗株反向遺傳學改造并拯救及疫苗在病毒進化中的影響.pdf

1、豬瘟是由一種對家豬和野豬均有高致病性、高傳染性,該病的爆發(fā)會導致重大的經(jīng)濟損失,并損害國內(nèi)及國際間的豬產(chǎn)品貿(mào)易。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將此病列為 A類傳染病,其病原體豬瘟病毒也被《國際生物武器公約》列為重要動物生物恐怖病原體或動物生物戰(zhàn)劑,因此受到國際社會的高度重視。
　　豬瘟病毒屬于黃病毒科瘟病毒屬,它是直徑40~60nm,有包膜的單股正鏈RNA病毒,基因組大小為12.3kb,包括5′、3′非編碼區(qū)和一個開放閱讀框(ORF)

2、。該ORF編碼3898個氨基酸的多聚蛋白,然后由宿主細胞信號肽酶、豬瘟病毒的絲氨酸蛋白酶、Npro和NS2的自切割等共轉錄及轉錄后修飾作用,產(chǎn)生12個蛋白:4個結構蛋白(C、Erns、E1、E2),8個非結構蛋白(Npro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B),同時至少還有兩個前體蛋白 E2-p7和NS2-3存在(20-27)。其中E2在感染過程中作為主要的中和抗原誘導機體的免疫反應
　　本論文第一部分,

3、總結豬瘟病毒的分子生物學最新研究進展。
　　第二部分,通過生物信息分析并結合Van Rijn P的研究找到抗原性較強的E2部分序列,然后構建原核表達載體PET30a-c-E2,表達并純化E2蛋白,通過免疫小鼠得到E2蛋白抗血清。
　　第三部分,改造質粒PMC18C-CSFV,在CSFV cDNA后添加丁肝核酶和T7終止子,改造后的質粒命名為PMC18C-CSFV-rz-T7,并用于豬瘟病毒兔化弱毒株的體外拯救。質粒的改造使C

4、SFV兔化弱毒株cDNA能夠進行細胞內(nèi)轉錄,該反向遺傳改造,簡化了體外轉錄過程和避免體外 RNA易降解的缺點。隨后在PMC18C-CSFV-rz-T7質?；A上進行分段改造,構建兩個新質粒(PMC18C-CSFV-rz-T7(含 NS5B)、PMC18C-CSFV-rz-T7(不含 NS5B)),這是以探究單鏈的豬瘟病毒的基因組能否像流感病毒那樣以分段的形式存在,以區(qū)分野生毒株和疫苗株,為凈化豬瘟病毒奠定基礎。但是實驗結果表明, NS5