慢病毒介導(dǎo)TGFβ3和TIMP1體外聯(lián)合感染人髓核細胞的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、目的：探討慢病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化生長因子β3（TGFβ3）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP1）聯(lián)合感染對體外培養(yǎng)人退變椎間盤髓核細胞的影響，從而最終實現(xiàn)延緩甚至逆轉(zhuǎn)椎間盤退變的目的。
　　方法：單層培養(yǎng)人退變椎間盤髓核細胞，采用綠色熒光蛋白標(biāo)記慢病毒（GV287-EGFP）評價其對髓核細胞的感染效率。應(yīng)用構(gòu)建的 TGFβ3-P2A-TIMP1慢病毒載體感染髓核細胞，在倒置纖維鏡下觀察細胞形態(tài)學(xué)變化，通過 Real-time qPC

2、R技術(shù)檢測感染后 TGFβ3、TIMP1、Ⅱ型膠原和蛋白多糖的 mRNA表達量，通過Western blot技術(shù)檢測感染后Ⅱ型膠原和蛋白多糖含量，最終評價應(yīng)用攜帶TGFβ3-P2A-TIMP1的慢病毒載體體外感染人退變椎間盤髓核細胞后對其細胞外基質(zhì)代謝的影響。
　　結(jié)果：感染復(fù)數(shù)（MOI）為60時可獲較滿意感染效率。Real-time qPCR示目的基因感染組的 TGFβ3、TIMP1、Ⅱ型膠原、蛋白多糖 mRNA表達量均明顯高于

3、空病毒感染組及空白對照組（F＝16.350～74.378，q=2.010～10.620，P<0.05），而空病毒感染組和空白對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異。Western blot示目的基因感染組的Ⅱ型膠原、蛋白多糖蛋白表達量均明顯高于空病毒感染組和空白對照組（F＝50.495～66.110，q=8.061～16.624，P<0.05），而空病毒感染組和空白對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：慢病毒載體介導(dǎo)的TGFβ3和TIMP1雙基因聯(lián)合感