鼓膜上皮干細(xì)胞的定位特征和培養(yǎng)研究.pdf

1、第一部分:不同類型大鼠鼓膜穿孔的自然修復(fù) 目的:研究大鼠鼓膜不同類型穿孔的自然修復(fù)過(guò)程,探討鼓膜穿孔的修復(fù)機(jī)制.方法:50只(100耳)大鼠鼓膜,隨機(jī)分5組,分別作①鼓膜緊張部中央2.5mm穿孔、②鼓膜緊張部中央1mm小穿孔、③緊張部后方邊緣性穿孔、④緊張部3/4切除后鉻酸燒灼錘骨柄、⑤松弛部中央1.5mm穿孔,第一組中8耳穿孔愈合后作第二次穿孔,光鏡下觀察鼓膜穿孔修復(fù)的組織改變.結(jié)論:鼓膜緊張部的穿孔修復(fù)依賴于上皮細(xì)胞的移行,細(xì)胞的增

2、殖中心位于鼓環(huán)和錘骨柄,中耳手術(shù)對(duì)鼓環(huán)和錘骨柄的保護(hù)有重要的意義.第二部分:鼓膜上皮干細(xì)胞的分布——鼓膜上皮角蛋白19和β<,1>整合素的表達(dá) 目的:觀察鼓膜上皮中表皮干細(xì)胞標(biāo)志角蛋白19和β<,1>整合素的分布,以確定上皮干細(xì)胞在鼓膜上的分布,鼓膜穿孔后干細(xì)胞的變化.材料和方法:4只剛斷奶大鼠和4只成年大鼠作正常鼓膜觀察,另28只成年大鼠作鼓膜緊張部中央2mm穿孔.于穿孔后5小時(shí)、第1、2、3、4和第6天,以及穿孔愈合后3天取鼓膜標(biāo)本

3、,固定脫鈣后,冰凍切片,層厚7um,進(jìn)行β<,1>整合素和角蛋白19免疫組化檢測(cè).β<,1>整合素免疫組化檢測(cè)用三步法(SABC),角蛋白19(cytokeratin 19)免疫組化檢測(cè)用兩步法(Envision).透射電鏡觀察正常鼓膜的鼓環(huán).結(jié)論:干細(xì)胞在鼓膜緊張部主要分布在鼓環(huán)和錘骨柄區(qū)域,在緊張部的中央沒(méi)有干細(xì)胞.穿孔的修復(fù)是通過(guò)干細(xì)胞的細(xì)胞分裂,增生的細(xì)胞向穿孔邊緣移行修復(fù)穿孔.中耳手術(shù)應(yīng)注意保護(hù)含有上皮干細(xì)胞的鼓環(huán)和錘骨柄區(qū)域

4、.第三部分:鼓膜上皮干細(xì)胞培養(yǎng) 目的:該實(shí)驗(yàn)觀察鼓膜上皮不同部位的生長(zhǎng)特點(diǎn),鼓膜上皮干細(xì)胞的生長(zhǎng)特征,建立鼓膜干細(xì)胞體外培養(yǎng)和增殖的方法.材料和方法:30個(gè)大鼠鼓膜,鼓室粘膜面用絲裂霉素C損傷粘膜細(xì)胞和部分纖維細(xì)胞.沿鼓環(huán)和錘骨柄一周將鼓膜緊張部中央切下,錘骨柄上皮與鼓環(huán)上皮放在一起,將組織分成鼓環(huán)和緊張部?jī)刹糠衷谝让钢欣湎?6小時(shí),用尼龍篩網(wǎng)過(guò)濾.在添加了高EGF和低鈣等營(yíng)養(yǎng)劑的Medium 154培養(yǎng)基中培養(yǎng).比較鼓環(huán)和緊張部?jī)商?/p>