尿路上皮干細(xì)胞的鑒定.pdf

1、目的：建立小鼠尿路上皮“標(biāo)記滯留細(xì)胞”的動物模型，尋找小鼠尿路上皮干細(xì)胞的體內(nèi)定位。
　　 方法：將轉(zhuǎn)基因小鼠Krt5-rtTa-VP16與TRE-H2B-GFP雜交，獲得雙轉(zhuǎn)基因小鼠。Krt5，GFP等基因的表達(dá)用RT-PCR技術(shù)鑒定。待此小鼠長到4周后進(jìn)行脈沖追蹤（pulse-chase）實驗，喂予含強(qiáng)力霉素的食物，并注射環(huán)磷酰胺以刺激尿路上皮增殖，2周后獲得尿路上皮基底層細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白（GFP）的雙轉(zhuǎn)基因小鼠。Cha

2、se 期后制作組織連續(xù)切片和組織整標(biāo)本，用表面熒光顯微鏡，立式顯微鏡，三維反卷積顯微鏡和雙光子共聚焦顯微鏡觀察GFP 標(biāo)記滯留細(xì)胞在小鼠尿路系統(tǒng)中的分布。用Image J，Volocity等軟件對圖像及數(shù)據(jù)進(jìn)行重建和整合。
　　 結(jié)果：轉(zhuǎn)基因小鼠Krt5-rtTa-VP16與TRE-H2B-GFP雜交后獲得雙轉(zhuǎn)基因小鼠Krt5-rtTa/TRE-H2B-GFP。此小鼠進(jìn)食含強(qiáng)力霉素的食物后尿路上皮基底層表達(dá)綠色熒光蛋白。小鼠膀胱