p38信號(hào)通路對(duì)角膜緣干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞體外培養(yǎng)過(guò)程中增殖與分化的影響.pdf

1、目的:探討p38信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞增殖及分化的影響。
　　 方法:小鼠角膜緣干細(xì)胞系TKE2用KSFM培養(yǎng)基培養(yǎng)，人的皮膚上皮干細(xì)胞以3T3作滋養(yǎng)層用SHEM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。人角膜緣和皮膚組織用OCT包埋并冰凍切片后進(jìn)行免疫染色。通過(guò)慢病毒誘導(dǎo)的方法，活化或抑制TKE2細(xì)胞和人皮膚上皮干細(xì)胞中p38信號(hào)通路的活性，并通過(guò)免疫印跡分析、免疫熒光染色，結(jié)合結(jié)晶紫染色和MTT檢測(cè)等方法，檢測(cè)p38信號(hào)通路

2、的活性及干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果:在正常人的皮膚及角膜組織中，p38信號(hào)通路在人皮膚和角膜緣上皮表層部位活性較強(qiáng)。干細(xì)胞標(biāo)記物p63、增值性指標(biāo)Ki67及增殖相關(guān)角蛋白K14、K16主要表達(dá)于皮膚及角膜緣上皮組織基底層，終末分化標(biāo)志蛋白K10和K12分別表達(dá)于皮膚和角膜上皮的表層細(xì)胞中。Notch信號(hào)通路的下游基因Hesl，在皮膚和角膜上皮的基底層表達(dá)較強(qiáng)，表層細(xì)胞中表達(dá)減弱。抑制角膜緣和皮膚上皮干細(xì)胞中的p3

3、8信號(hào)通路，可顯著提高其克隆形成率和形成面積，且克隆細(xì)胞中p63、K14、K16表達(dá)量增加，同時(shí)Notch信號(hào)通路受體Notchl和下游基因Hesl表達(dá)量也有所增加。
　　 結(jié)論:p38信號(hào)通路可影響角膜緣干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞的增殖能力，導(dǎo)致其分化加速。對(duì)p38信號(hào)通路的抑制，可以更好的維持角膜緣干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)的增殖能力。同時(shí)，抑制p38信號(hào)通路的活性后，可以引起Notch信號(hào)通路的活性上調(diào)，并共同作用于上