RNA干擾抑制vimentin基因對頭頸鱗癌細胞的影響.pdf

1、前言
　　鱗狀細胞癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一，淋巴轉移和侵襲性生長是常見的致死原因，雖然近年來各種治療措施應用于臨床，但患者的5年生存率未有明顯改善，因此有必要對腫瘤的生物學行為進行基礎研究，以尋找更有效的治療方案。CCR7是一種趨化因子受體，與頭頸鱗癌的淋巴結轉移密切相關，CCR7下游的信號通路非常復雜，已經被證實其下游信號因子的包括PI3K、PLC及NF-kB，但其詳細的信號通路尚未完全清楚。Vimentin是一種Ⅲ型中間

2、絲蛋白，在上皮間質化中其重要作用，而上皮間質化是惡性腫瘤轉移過程中的關鍵環(huán)節(jié)。我們猜測CCR7有可能通過vimentin來調控細胞的侵襲和趨化等能力。因此，此實驗主要通過RNA干擾技術抑制vimentin基因表達后，檢測細胞的侵襲、遷移能力是否改變，進而研究vimentin在CCR7信號通路中的作用。
　　材料與方法
　　轉染后，利用RT-PCR和Westernblot證明vimentin和CCR7基因被沉默后，用Trans

3、well小室檢測細胞的遷移和侵襲能力。使用SPSS13.0進行統(tǒng)計學分析。以p＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　實驗結果
　　轉染后，Western-blot和RT-PCR提示CCR7和vimentin的表達均收到明顯抑制，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，提示轉染成功。
　　CCL19處理細胞后，vimentin的表達水平明顯升高，與空白組相比，差異具有顯著性(p＜0.05)，而使用CCR7positi

4、veshRNA抑制CCR7作用后，CCL19誘導的vimentin的蛋白表達水平恢復至空白對照組水平。說明CCR7活化后能夠調節(jié)vimentin的表達。
　　經過CCL19刺激后，PCI-37B細胞的遷移能力顯著增強，與空白組對比，具有顯著性差異(p＜0.05)。利用vimentinsiRNA預處理細胞后，結果表明CCL19誘導的PCI-37B細胞的遷移能力受到明顯抑制，與CCL19相比，差異具有顯著性(p＜0.05)。