MTB PPS對MTB耐藥性產(chǎn)生的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：檢測分析新疆地區(qū)流行的各組不同耐藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株（以下簡稱為MTB）Pup-蛋白酶體系統(tǒng)(PPS)在不同抗生素壓力下Pup基因、Dop基因、Mpa基因和PafA基因的表達(dá)差異，探討研究各組耐藥MTB Pup-蛋白酶體系統(tǒng)（PPS）的基因表達(dá)水平是否與新疆地區(qū)流行的耐藥MTB臨床分離株耐藥性呈一定相關(guān)性，以及MTB Pup-蛋白酶體系統(tǒng)（PPS）對MTB耐藥性產(chǎn)生的作用及其機(jī)制。
　　方法：將新疆地區(qū)流行的結(jié)核分枝桿菌

2、臨床分離株、單純耐異煙肼的MTB臨床分離株（INH-MTB）、單純耐鏈霉素的MTB臨床分離株（SM-MTB）、單純耐利福平的MTB臨床分離株（RFP-MTB）、單純耐乙胺丁醇的MTB臨床分離株(EB-MTB)、耐多藥的MTB臨床分離株(MDR)，分別在原始耐藥狀態(tài)、低濃度含藥培養(yǎng)基以及高濃度含藥培養(yǎng)基上（抗生素壓力環(huán)境）培養(yǎng)至對數(shù)生長期，分別提取各組耐藥MTB總RNA，并立即進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。采用SYBR Green I Real-time

3、PCR技術(shù)檢測不同環(huán)境下各組耐藥MTB Pup-蛋白酶體系統(tǒng)（PPS）的Pup基因、Dop基因、Mpa基因和PafA基因的表達(dá)水平，探討分析經(jīng)過不同濃度抗結(jié)核藥物（INH、RFP、SM、EB）的抗生素選擇壓力作用后，各組耐藥MTB PPS的Pup基因、Dop基因、Mpa基因和PafA基因的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：(1)與藥物敏感菌株組相比，耐藥性結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的Pup基因的mRNA表達(dá)水平在INH-MTB組、EB-MTB組、

4、MDR組中表達(dá)顯著下調(diào)；耐藥性結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的Dop基因的mRNA表達(dá)水平在INH-MTB組、SM-MTB組、EB-MTB組中表達(dá)顯著上調(diào)；耐藥性結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的PafA基因的mRNA表達(dá)水平在INH-MTB組、RFP-MTB組、SM-MTB組、EB-MTB組、MDR組中表達(dá)上調(diào)；耐藥性結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的Mpa基因的mRNA表達(dá)水平在INH-MTB組、MDR組中表達(dá)顯著下調(diào)，在SM-MTB組中表達(dá)顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；(2)與原始耐藥狀態(tài)下耐藥MTB臨床分離株相比較，經(jīng)低濃度抗結(jié)核藥物壓力作用培養(yǎng)后的各組MTB臨床分離株，Pup基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、MDR組中的表達(dá)分別下調(diào)；Dop基因、PafA基因和Mpa基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、MDR組中表達(dá)分別上調(diào)；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(3)與原始耐藥狀態(tài)下耐藥MTB臨床分離株相比較，經(jīng)高濃度抗結(jié)核藥物壓力作用培養(yǎng)后

6、的各組 MTB臨床分離株，Pup基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、MDR組中的表達(dá)分別下調(diào)；Dop基因、PafA基因、Mpa基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、MDR組中表達(dá)分別上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(4)在高濃度抗結(jié)核藥物條件下培養(yǎng)的各組耐藥MTB臨床分離株，與低濃度抗結(jié)核藥物條件下培養(yǎng)的各組耐藥MTB臨床分離株相比，MTB Pup-蛋白酶體系統(tǒng)（PPS）的Pup基因、Dop基因、P

7、afA基因和Mpa基因的表達(dá)水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；
　　結(jié)論：(1)在原始狀態(tài)下，MTB臨床分離藥物敏感菌株和四種單純耐藥（INH、RFP、SM、EB） MTB臨床分離株菌株以及耐多藥臨床分離菌株（MDR）中，Pup基因、Dop基因、PafA基因Mpa基因的表達(dá)存在一定差異；（2）在低濃度和高濃度的抗結(jié)核藥物（INH、RFP、SM、EB）選擇壓力作用下，Pup基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB