MTB PPS缺失突變對MTB耐藥性產(chǎn)生的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過比較分析和探討研究結(jié)核桿菌泛素樣蛋白（Pup）-蛋白酶體系統(tǒng)（包括 Pup基因、Mpa基因、Dop基因、PafA基因）分別在新疆地區(qū)流行的結(jié)核桿菌藥物敏感菌株（不耐藥菌株）、單純耐一線抗結(jié)核藥物（利福平、異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇）的結(jié)核桿菌臨床分離株、耐多藥的結(jié)核桿菌臨床分離株中缺失突變對其耐藥性產(chǎn)生的影響。
　　方法：以利用SOE-PCR技術(shù)和T載體構(gòu)建及鑒定各基因置換型缺失突變載體；利用電穿孔技術(shù)將各缺失突變載體分別

2、電轉(zhuǎn)化至不同耐藥結(jié)核桿菌菌株，并鑒定；利用刃天青顯色法快速檢測各組結(jié)核桿菌菌株最小抑菌濃度（MIC），比較分析和探討結(jié)核桿菌Pup-蛋白酶體系統(tǒng)基因缺失突變對其耐藥性產(chǎn)生的的影響。
　　結(jié)果：1.成功構(gòu)建了結(jié)核桿菌Pup-蛋白酶體系統(tǒng)（包括Pup基因、Mpa基因、Dop基因、PafA基因）基因置換型缺失突變載體T-Pup-N-K-Pup-C、 T-Mpa-N-K-Mpa-C、 T-Dop-N-K-Dop-C和T-PafA-N-K-

3、PafA-C；2.成功構(gòu)建了Pup基因缺失突變株：INH-MTB△Pup、RFP-MTB△Pup、SM-MTB△Pup、EB-MTB△Pup、MDR-MTB△Pup和 Drug-sensitive-MTB△Pup，Mpa基因缺失突變株：INH-MTB△Mpa、RFP-MTB△Mpa、SM-MTB△Mpa、EB-MTB△Mpa、MDR-MTB△Mpa和Drug-sensitive-MTB△Mpa，Dop基因缺失突變株：INH-MTB△Do

4、p、RFP-MTB△Dop、SM-MTB△Dop、EB-MTB△Dop、MDR-MTB△Dop和 Drug-sensitive-MTB△Dop，PafA基因缺失突變株：INH-MTB△PafA、RFP-MTB△PafA、SM-MTB△PafA、EB-MTB△PafA、MDR-MTB△PafA和Drug-sensitive-MTB△PafA；3.刃天青顯色法測定了各組結(jié)核桿菌菌株的MIC，結(jié)果顯示：與原始耐藥結(jié)核桿菌菌株相比，單純耐一線抗

5、結(jié)核藥物和耐多藥的結(jié)核桿菌臨床分離株P(guān)up基因、Mpa基因和Dop基因缺失突變后，其MIC均出現(xiàn)不同程度下降，以Pup基因缺失株最為明顯；單純耐一線抗結(jié)核藥物和耐多藥的結(jié)核桿菌臨床分離株P(guān)afA基因缺失突變后，其MIC基本無變化；結(jié)核桿菌藥物敏感菌株P(guān)up基因、Mpa基因、Dop基因和PafA基因缺失突變后，MIC基本無變化。
　　結(jié)論：結(jié)核桿菌Pup-蛋白酶體系統(tǒng)Pup基因、Mpa基因和Dop基因缺失突變可使新疆地區(qū)流行的單純耐