非傷寒沙門氏菌耐藥性產(chǎn)生及增強(qiáng)對(duì)其毒力的影響.pdf

1、隨著對(duì)細(xì)菌耐藥機(jī)制的深入研究，人們不僅證明細(xì)菌耐藥性的出現(xiàn)與菌株長(zhǎng)期處于環(huán)境中多種抗生素的選擇性壓力及耐藥基因通過(guò)耐藥質(zhì)?；蛉旧w在菌群間的廣泛傳播或擴(kuò)散有關(guān)，還發(fā)現(xiàn)細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生與其生物學(xué)特性之間可能有一定關(guān)聯(lián)，尤其對(duì)細(xì)菌的毒力可能產(chǎn)生一定的影響。沙門氏菌作為一種重要的人獸共患病原菌，在醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)和公共衛(wèi)生學(xué)上均具有重要意義。因此，為探討非傷寒沙門氏菌耐藥性產(chǎn)生及增強(qiáng)對(duì)其毒力的影響，本研究開(kāi)展了以下工作：
　　 1、選擇一

2、株藥物敏感性非傷寒沙門氏菌作為親本株，采用肉湯稀釋法測(cè)定其對(duì)四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、氯霉素、卡那霉素的最小抑菌濃度，然后采用次抑菌濃度體外多步誘導(dǎo)法構(gòu)建耐藥菌株；K-B法測(cè)定15株構(gòu)建菌株及親本株的耐藥表型，并采用PCR方法檢測(cè)其全基因組DNA和質(zhì)粒DNA中不同耐藥基因分布情況。結(jié)果表明沙門氏菌在長(zhǎng)期低劑量的接觸抗菌藥物后可產(chǎn)生耐藥性變異，形成相應(yīng)的耐藥菌株，且耐藥性相對(duì)穩(wěn)定，但未能獲得相應(yīng)的耐藥基因。
　　 2、采用寇氏改良法測(cè)定5

3、株不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌(即親本株和DOX、TET+DOX、TET+DOX+CHL、TET+DOX+CHL+KAN耐藥菌株)對(duì)昆明小鼠的半數(shù)致死量，結(jié)果顯示，非傷寒沙門氏菌對(duì)昆明小鼠具有致病性，各感染組之間LD50無(wú)顯著差異，LD50均在108CFU數(shù)量級(jí)。
　　 3、以5株不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌LD50為攻毒劑量腹腔注射昆明小鼠，分別于感染后24h、96h、168h眼球采集血，并取各組小鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟制作

4、病理切片；采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)小鼠外周血中CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴細(xì)胞的含量；ELISA方法用于檢測(cè)小鼠血清中細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的濃度。剖檢結(jié)果顯示沙門氏菌感染小鼠后能夠?qū)е碌湫偷哪c炎以及肝臟、脾臟的腫大；病理變化觀察結(jié)果表明，沙門氏菌感染能夠引起全身性敗血癥及脾臟和肝臟的炎癥反應(yīng)以及，且以多重耐藥菌株炎癥反應(yīng)更為嚴(yán)重。淋巴細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示，感染后不同時(shí)間各感染組小鼠體內(nèi)CD3+CD4+、CD3+CD8+細(xì)胞的

5、含量與對(duì)照組相比均有所降低，CD4+/CD8+比值比對(duì)照組有所上升，表明非傷寒沙門氏菌感染機(jī)體后導(dǎo)致免疫抑制；但是各感染組之間CD3+CD4+、CD3+CD8+細(xì)胞的含量以及CD4+/CD8+比值差異不顯著，表明隨著非傷寒沙門氏菌耐藥性的產(chǎn)生及增強(qiáng)，其細(xì)胞免疫沒(méi)有顯著變化。細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示，非傷寒沙門氏菌感染小鼠后細(xì)胞因子IFN-γ的含量和IFN-γ/IL-4的比值均有所上升，IL-4的含量基本沒(méi)有變化，表明非傷寒沙門氏菌感染后主要

6、導(dǎo)致Th1型炎癥反應(yīng)；不同耐藥譜沙門氏菌菌株之間的比較結(jié)果顯示，非傷寒沙門氏菌多重耐藥菌株炎癥反應(yīng)更為嚴(yán)重。
　　 4、采用PCR方法檢測(cè)了16株不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌質(zhì)粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD以及rck的分布情況，結(jié)果均為陰性。
　　 綜上所述，隨著非傷寒沙門氏菌耐藥性的產(chǎn)生及增強(qiáng)，其生物學(xué)特性LD50和毒力基因均未發(fā)生明顯變化：從宿主的角度來(lái)看，不同耐藥譜非傷寒沙門氏菌感染后，多重