禽沙門氏菌的分離鑒定、生物被膜測定及耐藥性分析.pdf

1、沙門氏菌（Salmonella）既可感染動物，表現(xiàn)出敗血癥或胃腸炎，也可以感染人，引起食品中毒，因此是重要的人獸共患病原菌。由于抗生素的濫用，沙門氏菌的多重耐藥性已成為世界性關注的問題。我國的家禽養(yǎng)殖業(yè)非常發(fā)達，而沙門氏菌感染仍然是家禽生產(chǎn)過程中常見一個現(xiàn)象。由于沙門氏菌的流行與耐藥隨著時間和環(huán)境的變化不斷發(fā)生改變，因此有必要對沙門氏菌的流行情況和耐藥情況進行持續(xù)跟蹤調查。本研究利用實驗室前期建立的多重PCR方法(mPCR)對疑似沙門氏

2、菌進行檢測鑒定，通過藥敏實驗測定沙門氏菌的耐藥性，測定了分離株的生物被膜形成能力，分析了生物被膜和Ⅰ類整合子與沙門氏菌耐藥性的關系，為沙門氏菌的防控提供流行病學數(shù)據(jù)支撐和理論指導。
　　1、禽沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性分析
　　2014年2月至2015年7月在揚州大學動物醫(yī)院采集病死雞、鴨、鵝等禽類的肝臟和膽囊，無菌劃線接種麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得無色、透明或半透明、圓形、光滑菌落。經(jīng)mPCR鑒定，共分離鑒定出61株沙門氏菌

3、，其中鼠傷寒沙門氏菌33株，腸炎沙門氏菌3株，雞白痢沙門氏菌25株。雞源分離株主要是雞白痢沙門氏菌(22/24，91.67％)，鵝源分離株主要是鼠傷寒沙門氏菌(29/33，87.88％)。藥敏試驗結果顯示，所分離的禽沙門氏菌普遍對青霉素、苯唑西林、利福平和萬古霉素的耐藥率達到了100％，但對美福仙、諾氟沙星、阿米卡星、卡那霉素、氯霉素、氟苯尼考有較好的敏感性。96.72％沙門氏菌對6種及其以上抗菌藥耐藥，說明沙門氏菌的多重耐藥性比例高。

4、
　　2、沙門氏菌分離株的生物被膜測定與耐藥性的關系
　　通過結晶紫染色定量法測定分離到的61株禽沙門氏菌生物被膜形成能力，共有54株沙門氏菌有較強的生物被膜形成能力(54/61，88.52％)，其中，鼠傷寒沙門氏菌28株(28/33，84.84％)，雞白痢沙門氏菌23株(23/25，92％)，腸炎沙門氏菌3株(3/3，100％，)。選擇生物被膜形成能力強的雞白痢沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌各3株，測定抗生素的MI

5、C和MBC。相對沙門氏菌浮游菌，生物被膜形成后阿米卡星、慶大霉素、氯霉素和氟苯尼考MIC值和MBC值提高了20倍以上。因此，絕大多數(shù)沙門氏菌可形成生物被膜，細菌在生物被膜狀態(tài)下可顯著提高其對抗生素的抵抗力。
　　3、禽沙門氏菌Ⅰ類整合子的檢測及序列分析
　　通過遞減PCR方法測定篩選出的59株多重耐藥沙門氏菌的Ⅰ類整合子，共擴增出5個菌株的Ⅰ類整合子，長度約1.6 kb，其中包括4株雞白痢沙門氏菌檢出，1株腸炎沙門氏菌，而鼠