食品動物源沙門氏菌耐藥性及耐β-內(nèi)酰胺類基因的檢測.pdf

1、為了對動物源沙門氏菌進(jìn)行耐藥性監(jiān)測，以及了解質(zhì)粒介導(dǎo)β-內(nèi)酰胺類耐藥基因的流行病學(xué)研究，為指導(dǎo)臨床合理使用β-內(nèi)酰胺類藥物提供依據(jù)。本研究采用常規(guī)鑒定法和玻片凝集法鑒定出2003年至2013年分離自不同食品動物源的710株沙門氏菌，共鑒定出15種血清型，主要血清型為雞白痢沙門氏菌405株（檢出率為50.04％），其次為德爾卑沙門氏菌50株(7.04％)，吉韋沙門氏菌37株(5.21％)，菲利斯河沙門氏菌30株(4.23％)，腸炎沙門氏菌

2、11株(1.55％)以及其他少見血清型(5.63％)。不同動物源菌株的血清型分布有差異，其中禽源菌株以雞白痢沙門氏菌為主，豬源以德爾卑為主，牛源以吉韋為主。
　　采用微量肉湯稀釋法對710株沙門氏菌進(jìn)行了21種抗菌藥物敏感性試驗。結(jié)果顯示，所有藥物耐藥率均超過10％，對β-內(nèi)酰胺類藥物依次為阿莫西林+克拉維酸60.56％，氨芐西林50.42％，氨曲南50.14％，頭孢唑啉49.72％，頭孢噻呋47.76％，頭孢曲松28.45％，頭

3、孢噻肟24.51％，頭孢他啶22.25％，頭孢比肟15.07％，頭孢西丁13.66％。對非β-內(nèi)酰胺類藥物依次為復(fù)方新諾明91.83％，磺胺異惡唑67.61％，四環(huán)素45.63％，多西環(huán)素45.21％，鏈霉素30.14％，氟苯尼考18.45％，氯霉素16.76％，卡那霉素16.2％，環(huán)丙沙星14.93％，慶大霉素10.85％，阿米卡星10.7％。不同動物源菌株耐藥性比較顯示，豬源、牛源菌株耐藥率明顯高于禽源菌株;不同年代來源菌株耐藥性比

4、較顯示，菌株分離年代與耐藥率無明顯相關(guān)性，但整體上菌株耐藥率隨時間延長呈上升趨勢;致病性與非致病性菌株耐藥性比較顯示，菌株耐藥性的產(chǎn)生與菌株致病性有一定的相關(guān)性。本次菌株多重耐藥性檢測顯示，91.83％菌株呈3耐及以上的多重耐藥性，主要以4～5耐為主，有440種耐藥譜型，優(yōu)勢耐藥譜型為AMP/AMC/EFT/COS，占總耐藥譜型4.65％(33/440)，其中豬源、牛源菌株主要以12～13耐為主，禽源以1耐和4耐為主。
　　對耐阿

5、莫西林+克拉維酸的430株菌株進(jìn)行4種β-內(nèi)酰胺類耐藥基因（TEM、CTX-M、SHV和CMY) PCR檢測和PCR-測序結(jié)果顯示:430株菌中207株菌檢出TEM（檢出率為48.14％），其它基因檢出率均為0％;菌株TEM檢出率與菌株來源不同有關(guān)，其中牛源株檢出率(75％)和豬源株檢出率(62.14％)，高于禽源株(42.54％);23株菌TEM測序結(jié)果顯示，23株菌攜帶基因?qū)儆赥EM-1B亞型;對207株TEM陽性菌質(zhì)粒分析發(fā)現(xiàn)，菌

6、株共有7種質(zhì)粒圖譜型(質(zhì)粒大小范圍＞1000～＞15000bp)，其中豬源和牛源株所含小質(zhì)粒(＜15000)比禽源株多;比較TEM陽性和陰性菌耐藥性發(fā)現(xiàn)，陽性菌株對氨芐西林、頭孢吡肟、氨曲南、鏈霉素、阿米卡星、卡那霉素、慶大霉素、氯霉素、氟苯尼考、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、磺胺異惡唑均顯著或極顯著高于陰性菌組（0.01＜P＜0.05或P＜0.01），對一、二、三代頭孢菌素、多西環(huán)素和復(fù)方新諾明8種藥物的耐藥性陰、陽兩組菌間無明顯差異(P＞0.0

7、5)。
　　采用質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移試驗評價耐藥基因在不同菌株間的擴(kuò)散程度。接合試驗結(jié)果顯示:207株TEM陽性菌經(jīng)接合轉(zhuǎn)移試驗共獲得118株接合子(接合轉(zhuǎn)移率為57.01％，118/207);TEM的接合轉(zhuǎn)移效率與菌株來源存在相關(guān)性，其中雞源菌株接合轉(zhuǎn)移效率3.8×10-2～5.75×10-2，顯著高于豬、牛源菌株接合效率為4.77×10-8～7.15×10-8;接合轉(zhuǎn)移后接合子的質(zhì)粒圖譜與菌株來源有關(guān)，其中雞源和牛源菌株接合子質(zhì)粒條帶

8、單一，僅含有一條R質(zhì)粒帶，而豬源菌株接合子至少含有兩條R質(zhì)粒;比較不同來源菌株接合子對抗菌藥的MIC值發(fā)現(xiàn)，雞源、牛源、豬源菌接合子對21種藥物的MIC值變化有差異，尤其對頭孢唑啉、頭孢西丁、頭孢比肟和氨曲南的MIC值差異最明顯。
　　以上結(jié)果表明，本次檢測的710株食品動物源沙門氏菌血清型較復(fù)雜，對抗菌藥物已產(chǎn)生一定的耐藥性，臨床應(yīng)加強(qiáng)食品動物源沙門氏菌血清型和耐藥性檢測，在養(yǎng)殖業(yè)和獸醫(yī)臨床應(yīng)謹(jǐn)慎使用抗菌藥物;TEM基因在430