Xpert MTB-RIF檢測腦脊液中結(jié)核分枝桿菌及其耐藥性的研究.pdf

1、目的:結(jié)核性腦膜炎(tuberculousmeningitis，TBM，簡稱結(jié)腦)，是由結(jié)核分枝桿菌引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，其致殘率和致死率均較高?？焖佟?zhǔn)確的診斷及制定合理的治療方案是決定預(yù)后的關(guān)鍵因素。近年來出現(xiàn)的一種利福平耐藥實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增技術(shù)(XpertMTB/RIF)，是一種可在2h內(nèi)檢測出結(jié)核分枝桿菌并判定其是否對利福平耐藥的半巢式多重實(shí)時(shí)熒光半定量系統(tǒng)。本試驗(yàn)應(yīng)用該技術(shù)對臨床診斷為結(jié)核性腦膜炎患者及非結(jié)核性腦膜

2、炎患者的腦脊液進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌檢測，探討其對于腦脊液中結(jié)核分枝桿菌檢出的敏感性及特異性，并對耐藥情況做一分析。
　　方法:結(jié)腦組為60例（60人份腦脊液）臨床診斷為結(jié)核性腦膜炎的患者，所有患者腦脊液均進(jìn)行常規(guī)、生化、細(xì)胞學(xué)檢查，結(jié)腦組還進(jìn)行改良抗酸染色檢查，并根據(jù)2010年發(fā)表在柳葉刀雜志中的關(guān)于結(jié)腦入組評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分為結(jié)腦確診組（38人份腦脊液）、很可能組（11人份腦脊液）及可能組（11人份腦脊液）。對照組為30例（30人份腦脊液）

3、為非結(jié)核性腦膜炎患者。所有患者均應(yīng)用XpertMTB/RIF檢測所有患者腦脊液中結(jié)核分枝桿菌的特異性rpoB基因片段。收集腦脊液1mL保存于-80℃冰箱內(nèi)，室溫融化后與2倍體積的處理液混勻，渦旋振蕩1分鐘，取2mL混合液放入儀器中進(jìn)行核酸擴(kuò)增，2h內(nèi)儀器會(huì)自動(dòng)輸出結(jié)核桿菌檢出結(jié)果、含菌量及是否對利福平耐藥。當(dāng)6條探針中除了質(zhì)控探針外至少2條探針發(fā)出熒光時(shí)可判定為結(jié)核分枝桿菌感染，并可根據(jù)CT值對結(jié)核菌濃度進(jìn)行高(CT＜16)、中(16＜

4、CT＜22)、低(22＜CT＜28)、極低(CT＞28)判定。若5條探針并未都發(fā)出熒光，說明對利福平耐藥。通過對結(jié)腦組和組內(nèi)各組別及非結(jié)腦組腦脊液中結(jié)核分枝桿菌PCR檢出率進(jìn)行對比分析，探討該技術(shù)對腦脊液中結(jié)核分枝桿菌檢出的敏感性及特異性。通過對PCR與抗酸染色陽性率差異的分析，比較二者對于診斷結(jié)核性腦膜炎的優(yōu)缺點(diǎn)。通過耐藥結(jié)核菌的檢出率及突變基因的分布，探討結(jié)核分枝桿菌對利福平的耐藥情況及耐藥分子機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1

5、、腦脊液結(jié)核分枝桿菌PCR結(jié)果:結(jié)核性腦膜炎患者60份腦脊液中，經(jīng)XpertMTB/RIF檢測有11份呈陽性，30份對照組中有0份呈陽性，敏感性為18.33％，特異性為100％，結(jié)腦組與對照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、結(jié)腦組中各小組結(jié)核分枝桿菌PCR結(jié)果:確診組:38份腦脊液中陽性份數(shù)9份，陽性率23.68％;很可能組:11份腦脊液中陽性份數(shù)2份，陽性率18.18％;可能組:11份腦脊液中陽性份

6、數(shù)0份，陽性率0。確診組、很可能組與可能組三組進(jìn)行比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、腦脊液中結(jié)核分枝桿菌含量檢測結(jié)果:在11份檢出結(jié)核分枝桿菌的標(biāo)本中，結(jié)核菌含量極低(CT＞28)9份，低(22＜CT＜28)2份。
　　4、結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥情況:共發(fā)現(xiàn)耐藥腦脊液4份，總耐藥率為36.36％。產(chǎn)生突變而未發(fā)出熒光的探針為E探針3份，D探針1份。耐藥不明確腦脊液2份，未發(fā)出熒光的探針為E探針。

7、
　　5、結(jié)腦組中腦脊液結(jié)核分枝桿菌PCR法與改良抗酸染色法的比較:在60人份結(jié)腦的腦脊液中，改良抗酸染色陽性的有38份，其中有9份(23.68％)腦脊液結(jié)核分枝桿菌PCR同時(shí)陽性;抗酸染色陰的有22份，其中有2份(9.09％)腦脊液結(jié)核分枝桿菌PCR為陽性。兩種方法進(jìn)行比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:XpertMTB/RIF是診斷結(jié)核性腦膜炎較為特異的方法，可準(zhǔn)確檢測出結(jié)核分枝桿菌，腦脊液中

8、結(jié)核分枝桿菌含量較少，不易檢出，該方法對腦脊液中結(jié)核分枝桿菌的檢測敏感性為18.33％，較改良抗酸染色的檢測敏感性低，結(jié)核桿菌含量在極低濃度到低濃度范圍(CT＞22)，檢測特異性為100％，兩種方法聯(lián)合應(yīng)用可提高對結(jié)核性腦膜炎的診斷敏感性與特異性。藥物作用靶位點(diǎn)基因突變可導(dǎo)致耐藥性的產(chǎn)生，使得藥物治療效果不明顯，如不及時(shí)更換治療方案可能導(dǎo)致延誤病情，影響預(yù)后，本試驗(yàn)檢出結(jié)核分枝桿菌對利福平耐藥率為36.36％，突變基因最常見于E探針覆蓋