牛源結(jié)核分枝桿菌耐藥性檢測(cè)及其對(duì)中藥單體的敏感性研究.pdf

1、本研究首先對(duì)分離鑒定的牛源結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行藥物敏感性分析；確定對(duì)一線抗結(jié)核藥物具有耐藥性的菌株作為實(shí)驗(yàn)菌株；重點(diǎn)探討耐藥菌株產(chǎn)生耐藥性的分子機(jī)制。在此基礎(chǔ)上篩選多個(gè)中藥單體作用于分離菌株考察其敏感性，并將中藥單體與抗結(jié)核藥物INH、RFP、SM聯(lián)合作用于牛源結(jié)核分枝桿菌，評(píng)價(jià)中西藥聯(lián)合作用效果，為中西藥聯(lián)合應(yīng)用抗結(jié)核分枝桿菌研究奠定基礎(chǔ)。
　　 應(yīng)用Z-N氏染色法及PCR方法對(duì)菌株進(jìn)行鑒定，確定分離得到的臨床菌株為結(jié)核分枝桿菌復(fù)

2、合群菌株；采用噬菌體生物擴(kuò)增法（Phage amplified biologically assay，PhaB）檢測(cè)菌株對(duì)藥物的敏感性。進(jìn)一步應(yīng)用PCR-直接測(cè)序法檢測(cè)耐藥結(jié)核分枝桿菌相關(guān)蛋白的編碼基因，分析katG、rpoB、rpsL基因突變與耐藥性產(chǎn)生的關(guān)系；利用微孔阿爾瑪蘭分析法（Microplate Alamar Blue Assay，MABA）將中藥單體分別與INH、RFP、SM聯(lián)合作用于牛源結(jié)核分枝桿菌后，測(cè)定其聯(lián)合作用的F

3、ICIs值，以此評(píng)價(jià)聯(lián)合作用效果。分離鑒定得到MTC 44株，陽性率為23.28%（44/189）。PhaB法對(duì)44株臨床分離菌株進(jìn)行耐藥表型檢測(cè)，其中14株對(duì)INH耐藥，6株對(duì)RFP耐藥，9株對(duì)SM耐藥，2株為INH、RFP多重耐藥菌株。PCR-DS結(jié)果顯示31株耐藥株中11株katG基因發(fā)生突變， 5株rpoB基因突變，7株rpsL基因突變；2株多重耐藥菌株均在rpoB基因531位點(diǎn)和katG基因315位點(diǎn)發(fā)生基因突變。篩選了18β

4、-GA、PGA、黃連素Berberine、魚腥草素鈉Sodium houttuyfonate、苦參素Oxymatrine、苦參總堿Banlangen共6種中藥作用于結(jié)核分枝桿菌，選擇出具有良好抗菌活性的中藥單體18β-GA和PGA與抗結(jié)核藥物聯(lián)合，進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)中藥單體18β-GA聯(lián)合INH、RFP、SM作用于牛源結(jié)核分枝桿菌后MIC值分別顯著下降4-16倍、4-8倍、4-8倍；PGA聯(lián)合INH、RFP、SM后MIC值均下降4-16