中國(guó)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株二線(xiàn)抗結(jié)核藥物耐藥性的初步研究.pdf

1、目的:
　　評(píng)價(jià)BACTEC MGIT960法檢測(cè)一線(xiàn)、二線(xiàn)抗結(jié)核藥物敏感性的效果;初步分析結(jié)核分枝桿菌喹諾酮類(lèi)藥物耐藥株gyr基因突變特點(diǎn),探討耐藥表型與gyr基因突變的關(guān)系;用間隔區(qū)寡核苷酸分型(Spacer oligonucleotide typing,Spoligotyping)對(duì)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進(jìn)行基因分型,分析北京家族菌株與喹諾酮類(lèi)藥物耐藥的相關(guān)性。
　　材料和方法:
　　1、214株結(jié)核分枝桿菌臨床

2、分離株是從中國(guó)疾病預(yù)防與控制中心傳染病所結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室/傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室結(jié)核病組保存的結(jié)核分枝桿菌菌株庫(kù)中抽取。
　　2、分別采用“世界衛(wèi)生組織/國(guó)際防癆與肺部疾病聯(lián)合會(huì)”推薦的比例法及世界衛(wèi)生組織推薦的BACTEC MGIT960方法,對(duì)所選菌株進(jìn)行一線(xiàn)抗結(jié)核藥物異煙肼(Isoniazid, INH)、利福平(Rifampicin, RFP)、鏈霉素(Streptomycin, SM)和乙胺丁醇(Ethambutol,

3、 EMB);二線(xiàn)抗結(jié)核藥物卷曲霉素(Capreomycin, CPM)、卡那霉素(Kanamycin, KAN)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFLX)、乙硫異煙胺(EthionamideETH)敏感性試驗(yàn),綜合比較分析兩種方法的結(jié)果,進(jìn)行驗(yàn)證、評(píng)估。
　　3、采用直接測(cè)序法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌耐藥相關(guān)基因gyrA、gyrB的突變情況并分析基因突變與耐藥表型及結(jié)核分枝桿菌北京基因型的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、用BACT

4、EC MGIT960法與L-J固體比例法對(duì)214株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進(jìn)行藥物敏感性檢測(cè),異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫異煙胺的符合率分別97.7％(209/214)、94.4%(202/214)、95.3%(204/214)、83.1%(178/214)、96.0%(205/214)、94.9%(203/214)、97.7%(209/214)和85.5%(183/214)。BACTEC MGIT

5、960法進(jìn)行一線(xiàn)抗結(jié)核藥物藥敏試驗(yàn)所需時(shí)間平均8.07天,較L-J固體比例法26.27天提前18.20天,二線(xiàn)抗結(jié)核藥物藥敏試驗(yàn)所需時(shí)間平均為7.75天,較L-J固體比例法25.92天提前18.17天。兩者間的差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、214株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株中有59株對(duì)氧氟沙星耐藥,其中50株為MDR-TB合并氧氟沙星耐藥。耐藥株中有41株 gyr基因發(fā)生突變,突變率為69.5%,其中40株為MDR-TB合并氧氟沙

6、星耐藥。40株為 gyrA基因突變,突變位點(diǎn)包括90,91和94位氨基酸;5株為 gyrB基因突變,突變位點(diǎn)為500,506,534和539位氨基酸,4株為 gyrA和gyrB基因共同突變。
　　3、214株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株中,北京基因型和非北京基因型菌株對(duì)二線(xiàn)藥物氧氟沙星的耐藥率分別為40.21%和34.48%,兩者間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.23, P>0.05);gyrA基因的90、91、94氨基酸位點(diǎn)突變?cè)诮Y(jié)核分

7、枝桿菌北京基因型與非北京基因型間的發(fā)生率分別為17.95%、7.69%、41.03%和10%、10%、35%,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.43、0.18、0.67,P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、BACTEC MGIT960藥敏方法與傳統(tǒng)L-J固體比例法對(duì)于一線(xiàn)抗結(jié)核藥物異煙肼、利福平和鏈霉素;二線(xiàn)藥物卷曲霉素、卡那霉素和氧氟沙星的藥敏檢測(cè)結(jié)果具有較好的一致性,但乙胺丁醇和乙硫異煙胺的藥敏檢測(cè)結(jié)果一致性較低,還需進(jìn)一步

8、研究。
　　2、BACTEC MGIT960法所需的檢測(cè)時(shí)間較短,有利于耐藥結(jié)核病人的早期診斷和治療。
　　3、結(jié)核分枝桿菌喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥主要與gyr基因突變有關(guān),gyrA基因突變是gyr基因突變的主要形式。其中94、90、91位氨基酸突變特異性較高,可作為喹諾酮耐藥標(biāo)志,為進(jìn)行喹諾酮類(lèi)藥物耐藥的快速檢測(cè)和監(jiān)測(cè)提供了良好基礎(chǔ)。
　　4、從常規(guī)耐藥和gyr基因突變檢測(cè)結(jié)果顯示北京型MTB菌株與喹諾酮類(lèi)藥物耐藥及耐藥基