慢性髓細胞白血病細胞株K562對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨成脂分化能力影響的研究.pdf

1、目的：體外條件下研究慢性髓細胞白血病細胞株K562對大鼠來源骨髓間充質(zhì)干細胞成骨、成脂分化能力改變的影響，為進一步研究白血病微環(huán)境下 BM-MSCs發(fā)生的改變提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.細胞來源：本實驗所需BM-MSCs來源于同濟醫(yī)學(xué)院動物中心提供的SPF級SD大鼠（雄性，體重100±10g）由。原代分離并培養(yǎng)SD大鼠（3-4周齡）骨髓間充質(zhì)干細胞，取第三代MSC流式鑒定并用于實驗；研究所需K562細胞來源華中科技大

2、學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院血液病研究所。
　　2.實驗分組和共培養(yǎng)：本實驗共分為三組，A組為MSC單獨培養(yǎng)體系（對照組），B組為MSC與K562直接共培養(yǎng)體系，C組為MSC與K562間接共培養(yǎng)體系。
　　3.實驗方法：共培養(yǎng)48h后加入成骨、成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基對共培養(yǎng)的MSC進行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)21天進行茜素成骨染色、14天進行成脂油紅O染色，并通過RT-PCR技術(shù)測定成骨基因mRNA（Runx2、ALP、BSP、OCN）和成脂基因mR

3、NA（PPARγ、Wnt-5b、LPL）的相對表達量。
　　結(jié)果：直接共培養(yǎng)組和非直接共培養(yǎng)組MSC成骨茜素染色和 mRNA表達量低于對照組，而直接共培養(yǎng)組低于非直接共培養(yǎng)組，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義；直接共培養(yǎng)和非直接共培養(yǎng)組MSC成脂分化染色和mRNA表達則強于對照組，非直接共培養(yǎng)組成脂染色和mRNA表達量則高于直接共培養(yǎng)組，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義；
　　結(jié)論：
　　1.BM-MSCs在K562模擬的CML白血病微環(huán)境下成骨

4、分化能力下降，成脂分化能力反而增強，直接共培養(yǎng)組成骨成脂均能力低于間接共培養(yǎng)體系；
　　2.BM-MSCs與K562共培養(yǎng)后成骨分化能力受到了K562的抑制，且直接接觸使BM-MSCs成骨分化能力受到抑制更強；共培養(yǎng)后成脂分化能力受到了K562的促進作用，直接接觸相對于間接接觸組抑制了BM-MSCs成脂分化能力；
　　3.K562可能通過直接或間接接觸改變了白血病微環(huán)境中BM-MSCs的成骨成脂分化能力，更有利于白血病的進程