人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：間充質(zhì)干細(xì)胞(mesonehymal stem cells，MSCs)是最早自骨髓中分離出的一類具有自我更新及多向分化潛能的成體干細(xì)胞。具有穩(wěn)定和修復(fù)造血微環(huán)境，促進(jìn)造血干細(xì)胞增殖、分化，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞免疫功能，減輕移植排斥反應(yīng)等生物學(xué)效應(yīng)。許多資料表明間充質(zhì)干細(xì)胞具有抑制白血病生長(zhǎng)的作用，但具體機(jī)制不詳。本實(shí)驗(yàn)旨在研究正常人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與慢性粒細(xì)胞白血病(CML)共培養(yǎng)后，間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞增殖影響并探討其作用機(jī)制。

2、 方法：采集健康供者骨髓血，通過(guò)密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)分離純化人骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞、體外培養(yǎng)傳代、倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況、瑞氏染色，取第三代MSCs經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組A：?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)的初治CML患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(CML-MNC，1×10<'4>/ml)；對(duì)照組B：?jiǎn)为?dú)培養(yǎng)的健康人第三代MSCs(1×10<'4>/ml)；實(shí)驗(yàn)組a：MSCs+CML-MNC(10：1)共培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組b：MSCs+

3、CML-MNC(1：1)共培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組c：MSCs+CNK-MNC(1：10)共培養(yǎng)；每天收集對(duì)照組A和實(shí)驗(yàn)組b的各三組CML-MNC計(jì)數(shù)后取均值，繪制生長(zhǎng)曲線。分別于實(shí)驗(yàn)的第三天和第六天收集各培養(yǎng)組的上清液，ELISA法檢測(cè)IFN-α含量。 結(jié)果：原代和傳代培養(yǎng)的細(xì)胞呈大的長(zhǎng)梭形，細(xì)胞排列具有明顯的方向性，呈平行、漩渦狀、輻射狀排列；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記：CD44陽(yáng)性(99.6﹪)、CIM5陰性、HLA-DR表達(dá)率低。結(jié)

4、合細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)特性，及細(xì)胞膜表面標(biāo)志，考慮所獲得細(xì)胞就是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。與懸浮培養(yǎng)比較，黏附培養(yǎng)的CML-MNC細(xì)胞增殖受抑。ELISA法所測(cè)得的IFN-α量結(jié)果分析：對(duì)照組A生成IFN-α的量明顯低于對(duì)照組B，更低于各實(shí)驗(yàn)組(a、b、c)，P<0.001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，生成的IFN-α量越多；各實(shí)驗(yàn)組MSCs濃度越大，上清液中IFN-α的量越多。 結(jié)論：MSCs與CML-MNC共培養(yǎng)促使CML-M