芍藥苷對骨髓間充質干細胞增殖的影響.pdf

1、研究背景：芍藥苷是中藥芍藥的主要活性單體成份，具有養(yǎng)血柔肝之功效并能調節(jié)人體的免疫功能。骨髓間充質干細胞(BMSCs)是人體造血微環(huán)境的重要組成部分，通過與骨髓造血干祖細胞直接接觸，并分泌多種造血相關因子及細胞外基質，維持骨髓造血微環(huán)境結構和功能的完整性。除此之外，骨髓間充質干細胞還具有多種作用于B淋巴細胞、T淋巴細胞、自然殺傷細胞及樹突狀細胞的效應，其構成了骨髓間充質干細胞特異的免疫調節(jié)功能，故骨髓間充質干細胞對人體的造血機制及免疫重

2、建功能起著十分重要的調控作用。芍藥苷作為中藥芍藥的主要活性成分，其補血及免疫調節(jié)作用是否是通過間充質干細胞來實現的，是否與間充質干細胞有關，以及芍藥苷對骨髓間充質干細胞增殖及細胞因子的分泌和表達有何影響，目前報道較少，本實驗通過體外細胞培養(yǎng)的方法，觀察芍藥苷對骨髓間充質干細胞增殖及分泌細胞因子的影響，以期闡明芍藥苷補血及調節(jié)免疫作用的藥理學機制，從而為芍藥苷的臨床使用和研究奠定實驗基礎。
　　研究目的：通過體外細胞培養(yǎng)的方法，分離

3、擴增培養(yǎng)人骨髓間充質干細胞，觀察并了解骨髓間充質干細胞的形態(tài)特征及生長增殖規(guī)律等生物學特性。以芍藥苷與骨髓間充質干細胞共同培養(yǎng)的方式，探討芍藥苷對骨髓間充質干細胞增殖及IL-6表達的影響，以此分析芍藥苷的補血及免疫調節(jié)機制。
　　研究方法：采用密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)相結合的方法體外分離培養(yǎng)擴增人骨髓間充質干細胞，倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，應用流式細胞儀檢測細胞表型特征，成骨成脂法觀察細胞的分化潛能。四甲基偶氮唑鹽(MTT)法

4、檢測不同濃度芍藥苷對人骨髓間充質干細胞增殖的影響，酶聯免疫吸附(ELISA)法測定芍藥苷干預人骨髓間充質干細胞后，培養(yǎng)上清液中IL-6的分泌水平，RT-PCR法檢測芍藥苷干預后IL-6基因的表達情況。
　　實驗結果：成功分離出人骨髓間充質干細胞。原代培養(yǎng)12 d的人骨髓間充質干細胞，呈多角形或圓形緊密排列，具有較強的增殖能力；傳代后骨髓間充質干細胞快速生長，6d左右即達90％融合，骨髓間充質干細胞形態(tài)均一，為長梭形，排列規(guī)則，漩渦

5、狀生長。骨髓間充質干細胞冷凍保存和復蘇前后，細胞生長特性和生理功能無明顯變化。用流式細胞術檢測骨髓間充質干細胞表面標志物，骨髓間充質干細胞表現為CD29、CD44及CD105高表達，CD34、CD45及HLA-DR低表達。成骨和成脂定向培養(yǎng)顯示，骨髓間充質干細胞具備向成骨、成脂細胞分化的能力。與對照組相比，2μmol/L和10μmol/L濃度的芍藥苷可明顯促進骨髓間充質干細胞增殖。10μmol/L芍藥苷干預骨髓間充質干細胞后，G0/G1

6、期細胞比例顯著降低，S期細胞比例顯著升高。10μmol/L芍藥苷干預組，骨髓間充質干細胞IL-6的分泌和mRNA表達均明顯高于對照組?？梢?，一定濃度的芍藥苷可促進骨髓間充質干細胞增殖，并提高骨髓間充質干細胞IL-6分泌水平和基因表達。
　　結論：芍藥苷或許是通過促進骨髓或外周血中間充質干細胞的增殖，促使其高分泌IL-6等細胞因子，而IL-6與其它細胞因子協同作用于骨髓造血干祖細胞及相關組織的免疫細胞，從而起到調節(jié)機體造血及免疫功能