TBLR1-RARα融合基因?qū)562向紅系分化的影響.pdf

1、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院(清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：$2012014017TBLRlRARcx融合基因?qū)562向紅系分化的影響所院：姓名：指導(dǎo)教師：導(dǎo)師小組：學(xué)科專業(yè)：研究方向：完成時(shí)間：血液學(xué)研究所陳晶王建祥教授王敏教授、饒青教授內(nèi)科學(xué)白血病發(fā)病機(jī)制2015年5月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院(清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部)碩士學(xué)位論文TBLRlRARo【融合基因?qū)562向紅系分化的影響中文摘要研究目的

2、：實(shí)驗(yàn)室前期研究工作，在一例疑難早幼粒細(xì)胞白血病(acutepromyelocyticleukemiaAPL)病例中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的t(3；17)(q26；q21)突變異位，并且通過5’RACE(5’rapid—amplificationofcDNAends)方法鑒定發(fā)現(xiàn)APL新的融合基因TBLRl一RARo【。本研究旨在探討融合基因TBLRl№的表達(dá)對(duì)于白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞向紅系分化的作用，并探討其可能的機(jī)制。研究方法：利用四環(huán)素可

3、誘導(dǎo)表達(dá)體系Tet—Off系統(tǒng)，構(gòu)建TBLRl一RARoc表達(dá)載體pLVX—Tight—Puro—TBLRl一RAR(x—flag，通過PEI轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，收獲病毒，對(duì)K562細(xì)胞進(jìn)行感染，以G418及嘌呤霉素篩選穩(wěn)定克隆。實(shí)驗(yàn)所用的為Tet—Off系統(tǒng)，在不加強(qiáng)力霉素(doxycyclin，Dox)誘導(dǎo)時(shí)，TBLRl一RARo【融合基因可以表達(dá)。而加入Dox誘導(dǎo)后，TBLRl。RAR0‘不再表達(dá)，即可以通過Dox來控

4、制該融合基因的表達(dá)與否。應(yīng)用實(shí)時(shí)定量熒光PCR，檢測(cè)全反式維甲酸(All—transretinoidacid，ATRA)處理可誘導(dǎo)表達(dá)TBLRlRARe的K562細(xì)胞(K562TR)后，K562TR細(xì)胞紅系分化的表面抗原CD71及儀，￡，Y珠蛋白的基因表達(dá)水平，流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)ACS)分析細(xì)胞表面CD71和CD235a的表達(dá)情況，聯(lián)苯胺染色觀察血紅蛋白的生成情況。研究結(jié)果：當(dāng)TBLRl一RARⅨ融合基因表達(dá)時(shí)，

5、與K562TR紅系分化相關(guān)的CD71以及儀，￡，Y一珠蛋白的基因表達(dá)增DII；流式分析結(jié)果同樣表明紅系分化早期標(biāo)志CD71細(xì)胞所占比例增加。聯(lián)苯胺染色證實(shí)當(dāng)以ATRA處理后，胞漿出現(xiàn)藍(lán)染，表明TBLRlRARer可以誘導(dǎo)K562一TR細(xì)胞產(chǎn)生血紅蛋白。結(jié)論：TBLRlRARt]【融合基因的表達(dá)一定程度上可促使K562細(xì)胞向紅系分化。研究結(jié)論：TBLRIRA№融合基因的表達(dá)一定程度上可促使K562細(xì)胞向紅系分化。關(guān)鍵詞：TBLRlRARc