四種不同來(lái)源巨噬細(xì)胞在M1和M2狀態(tài)下IL-10的表達(dá)研究.pdf

1、背景：炎癥細(xì)胞可以分泌TNF-α，IFN-γ等促炎因子，也可以分泌IL-4，IL-10等抗炎因子。IL-10可以抑制促炎性因子表達(dá)，抑制抗原提呈，抑制炎癥細(xì)胞的激活，黏附等多方面發(fā)揮強(qiáng)大的抗炎作用。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞均能分泌IL-10，其中包括單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，可以幫助機(jī)體抵御微生物的入侵，清除體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞以及壞死和凋亡的細(xì)胞。目前巨噬細(xì)胞分類(lèi)有多種，而世界上公認(rèn)的巨噬細(xì)胞分型方式主要是：

2、M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞，即：在LPS和IFN-γ作用下的巨噬細(xì)胞由靜止?fàn)顟B(tài)極化為M1型；在IL-4刺激下極化為M2型。迄今尚無(wú)M1型和M2型巨噬細(xì)胞分型的明確標(biāo)準(zhǔn)和定義，而是跟據(jù)其表達(dá)的某些生物學(xué)標(biāo)志物和發(fā)揮某些生物學(xué)功能來(lái)劃分。TNF-α，IL-6，IL-8等促炎細(xì)胞因子是M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)的主要標(biāo)志物，M1型巨噬細(xì)胞發(fā)揮促進(jìn)炎癥反應(yīng)，清除壞死和凋亡的細(xì)胞，吞噬病菌等病原微生物等作用；M2型巨噬細(xì)胞主要表達(dá)抗炎因子如YM1,A

3、rg1,FIZZ1等標(biāo)志物，發(fā)揮抑制炎癥過(guò)度反應(yīng)，促進(jìn)傷口愈合，利于組織修復(fù)等作用。大多數(shù)研究巨噬細(xì)胞的文獻(xiàn)，主要用的巨噬細(xì)胞有腹腔巨噬細(xì)胞，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞和巨噬細(xì)胞系，而且根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道都說(shuō)明M2型巨噬細(xì)胞能夠高表達(dá)IL-10，因而也將IL-10看做是M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物之一。
　　目的：探討四種來(lái)源巨噬細(xì)胞優(yōu)劣，及在M1和M2狀態(tài)IL-10的表達(dá)。
　　方法：用LPS100 ng/ml+IFN-γ20 n

4、g/ml和IL-420 ng/ml分別刺激四種巨噬細(xì)胞，即：RAW264.7巨噬細(xì)胞系、原代腹腔巨噬細(xì)胞、巰基乙酸鹽誘導(dǎo)的腹腔原代巨噬細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞。運(yùn)用ELISA試劑盒分別檢測(cè)0h,2h,4h,8h,16h時(shí)，四種類(lèi)型巨噬細(xì)胞IL-10蛋白濃度的變化。運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)四種類(lèi)巨噬細(xì)胞IL-10和刺激4h時(shí)TNF-α和Arg1的mRNA表達(dá)。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)四種類(lèi)巨噬細(xì)胞的細(xì)胞純度。
　　結(jié)果：成功復(fù)制和比