下調(diào)miRNA146a抑制膠質(zhì)瘤微環(huán)境內(nèi)M2型巨噬細(xì)胞分泌IL-6的研究.pdf

1、目的：腫瘤微環(huán)境是目前研究的熱點(diǎn)，其中腫瘤免疫炎性微環(huán)境在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。在膠質(zhì)瘤中也是如此，膠質(zhì)瘤免疫炎性微環(huán)境中的主要細(xì)胞是發(fā)揮固有免疫功能的巨噬細(xì)胞，除了傳統(tǒng)的腫瘤抑制型M1型巨噬細(xì)胞，還有具有促進(jìn)膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)的M2型巨噬細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)miRNA146a在M2型巨噬細(xì)胞明顯高表達(dá)，而M2型巨噬細(xì)胞可分泌IL-6，IL-6不僅可以直接促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，也可刺激M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镸2型巨噬細(xì)胞從而間接達(dá)到促腫瘤生長(zhǎng)

2、效果。目前對(duì)于M2型巨噬細(xì)胞中miRNA146a與IL-6的關(guān)系鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬建立M2型巨噬細(xì)胞模型，通過慢病毒轉(zhuǎn)染下調(diào)M2型巨噬細(xì)胞中miRNA146a的表達(dá)，測(cè)定M2型巨噬細(xì)胞慢病毒干擾前后IL-6分泌的變化，以闡明miRNA146a在M2型巨噬細(xì)胞分泌IL-6中的作用。
　　方法：正常培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞后，使用IL-4刺激RAW264.7，免疫組化檢測(cè)刺激后的細(xì)胞的M2型巨噬細(xì)胞特性標(biāo)記物CD206表

3、達(dá)，以確定刺激后的細(xì)胞為M2型細(xì)胞。將M2型巨噬細(xì)胞分為三組，轉(zhuǎn)染抑制性載體的實(shí)驗(yàn)組（PC）、轉(zhuǎn)染空載體的陰性對(duì)照組（NC）與只加入完全培養(yǎng)基的空白對(duì)照組。對(duì)轉(zhuǎn)染后的三組細(xì)胞行Real-time PCR檢測(cè)miRNA146a的變化及IL-6表達(dá)的變化，GraphPad Prism5軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)以means±SD表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)及其他相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：RAW264.7在

4、IL-4刺激后，細(xì)胞表達(dá)CD206，極化為M2型巨噬細(xì)胞。使用慢病毒轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染抑制載體的PC組及轉(zhuǎn)染空載體的NC組在熒光顯微鏡下均表達(dá)紅色熒光示病毒已轉(zhuǎn)染。Real-Time PCR結(jié)果表明轉(zhuǎn)染抑制性載體病毒后M2型巨噬細(xì)胞中miRNA146a相對(duì)于NC組和空白對(duì)照組明顯下降（P＜0.05）），NC組與空白對(duì)照組對(duì)比無明顯變化（P＞0.05）。Real-Time PCR檢測(cè)IL-6分泌情況，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染抑制性載體病毒后M2型巨噬細(xì)胞中I