大鼠小膠質(zhì)細胞及巨噬細胞對C6膠質(zhì)瘤細胞株遷移能力影響的研究.pdf

1、膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，盡管多種治療方法均報道取得一定進展，但總體療效改善不明顯，死亡率較高，是神經(jīng)外科領(lǐng)域的一個重要研究方向。膠質(zhì)瘤中有大量的免疫細胞浸潤，在不同的文獻中，這些細胞有的被稱為小膠質(zhì)細胞，有的被稱為巨噬細胞，也有的被稱為膠質(zhì)瘤相關(guān)性小膠質(zhì)/巨噬細胞(Glioma associated microglia/macrophages，GAMs)。結(jié)合文獻內(nèi)容，這三個名稱所指的是同一組細胞群。在膠質(zhì)瘤的生長中

2、，腦組織中特有的巨噬細胞，即小膠質(zhì)細胞被腫瘤釋放的多種趨化因子招募，浸潤到腫瘤中心和周圍;同時由于血腦屏障的破壞，外周的巨噬細胞也浸潤其中，和小膠質(zhì)細胞一起，共同組成了GAMs。
　　相關(guān)研究結(jié)果提示盡管膠質(zhì)瘤組織中伴隨著大量GAMs浸潤，但在腫瘤組織中GAMs的抗腫瘤作用被抑制，其在腫瘤微環(huán)境中被馴化，反而為膠質(zhì)瘤的生長、侵襲創(chuàng)造了有利條件。在膠質(zhì)瘤細胞與GAMs相互作用過程中，GAMs產(chǎn)生的IL-10、IL-18、MMP-9等

3、細胞因子在抑制免疫、促進腫瘤遷移過程中發(fā)揮了作用。同時，膠質(zhì)瘤細胞產(chǎn)生的TGF-β、FAS配體等因子也在誘導、馴化GAMs使其由抗腫瘤作用向促腫瘤作用轉(zhuǎn)變。由于組成GAMs的小膠質(zhì)細胞和外周血來源的巨噬細胞均屬于巨噬細胞群，是巨噬細胞在不同時期、不同組織的特異性分化，且分子標志物也基本一致，使膠質(zhì)瘤中這兩種細胞難以區(qū)分。這兩種具有同源性的不同來源的小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞在膠質(zhì)瘤中生物學效應是否一致，是一個值得探討的問題。
　　本研究

4、采用體外分離培養(yǎng)小膠質(zhì)細胞及外周血巨噬細胞，然后將小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞與C6膠質(zhì)瘤細胞株共培養(yǎng)，于共培養(yǎng)0h、24h、48h行劃痕實驗，以成纖維細胞與膠質(zhì)瘤細胞共培養(yǎng)為陽性對照，單純膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)為陰性對照，每次劃痕后6h觀察實驗結(jié)果并計算愈合率。同時，于共培養(yǎng)24h、48h流式細胞分選分離小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞及與分別這兩種細胞共培養(yǎng)的C6膠質(zhì)瘤細胞，將獲得的各組細胞與未共培養(yǎng)的三種細胞分別行WB檢測，了解共培養(yǎng)前后小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞

5、IL-10、IL-18、MMP-9表達水平的改變及相應C6膠質(zhì)瘤細胞株TGF-β、FAS配體表達水平的改變。
　　劃痕實驗提示與單純C6膠質(zhì)瘤細胞劃痕實驗相比，共培養(yǎng)初期(0h)小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞均表現(xiàn)為抗腫瘤效果，抑制腫瘤遷移(P＜0.05)，但共培養(yǎng)一段時間(24h、48h)后，其抗腫瘤作用消失，兩種細胞被馴化，均表現(xiàn)為促進腫瘤遷移且促進效果無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　在共培養(yǎng)不同時間節(jié)點(24h、48h)分離

6、細胞并提取蛋白行WB檢測小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞的IL-10、IL-18、MMP-9蛋白表達均較0h升高，且共培養(yǎng)后兩種細胞之間蛋白表達水平無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。共培養(yǎng)24h、48h時的膠質(zhì)瘤細胞TGF-β、FAS配體表達水平較共培養(yǎng)前(0h)升高且兩組膠質(zhì)瘤細胞間無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，說明共培養(yǎng)的C6細胞株受小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞的影響也一致。
　　結(jié)合劃痕實驗和WB檢測結(jié)果，可以認為經(jīng)過膠質(zhì)瘤細胞馴化的小膠質(zhì)細胞與巨