兩種不同來源神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)研究.pdf

1、目的:神經(jīng)遞質(zhì)是發(fā)生突觸聯(lián)系的中介,通過傳遞各種信息調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能。對(duì)于神經(jīng)元發(fā)育缺陷或損傷導(dǎo)致的疾病,選自更易分化為特定區(qū)域所需的神經(jīng)元的神經(jīng)干細(xì)胞,可能更有利于細(xì)胞定植、與缺陷區(qū)域建立功能聯(lián)系,達(dá)到更好的移植效果。腦神經(jīng)干細(xì)胞已廣泛用于各種神經(jīng)退行性疾病或損傷的移植治療,而腸神經(jīng)干細(xì)胞,目前處于研究初期階段,在進(jìn)入臨床應(yīng)用研究以前,尚有許多問題需要解決。本實(shí)驗(yàn)研究具代表性的γ-氨基丁酸、一氧化氮、乙酰膽堿、去甲腎上腺素等四種遞質(zhì)在

2、腦神經(jīng)干細(xì)胞和腸神經(jīng)干細(xì)胞中的表達(dá),為今后如何獲得合適的、有功能的、能長期使用的移植干細(xì)胞提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:1.采用神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液,以反復(fù)傳代法從胚胎20天SD大鼠提取兩種神經(jīng)干細(xì)胞。
　　 2.經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察及特異性抗原Nestin免疫組織化學(xué)染色,以確定分離培養(yǎng)的兩種細(xì)胞是否為神經(jīng)干細(xì)胞。
　　 3.經(jīng)5％胎牛血清誘導(dǎo)分化4天后,免疫熒光化學(xué)染色觀察形成的不同類型神經(jīng)元。
　　 4.傳

3、代得到的兩種神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)瓊脂糖預(yù)包埋制成石蠟切片,進(jìn)行GABA、nNOS、ChAT和DB H免疫組化檢測(cè),IPP軟件圖像分析。
　　 5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩種神經(jīng)干細(xì)胞GABA、nNOS、ChAT和Dβ H染色陽性細(xì)胞數(shù)目及比例。
　　 結(jié)果:1.兩種神經(jīng)干細(xì)胞均能出現(xiàn)神經(jīng)球樣結(jié)構(gòu),腦來源的神經(jīng)球較早出現(xiàn)懸浮生長,且增大迅速,進(jìn)一步培養(yǎng)兩種神經(jīng)球球體中心出現(xiàn)發(fā)黑及老化現(xiàn)象。
　　 2.培養(yǎng)的兩種來源的細(xì)胞陽性表達(dá)N

4、estin,確認(rèn)培養(yǎng)的兩種細(xì)胞含有神經(jīng)干細(xì)胞。
　　 3.兩種神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)胎牛血清的誘導(dǎo)分化后,免疫熒光化學(xué)染色均能觀察到表達(dá)γ-氨基丁酸、一氧化氮、乙酰膽堿及去甲腎上腺素的四種不同類型神經(jīng)元。
　　 4.將瓊脂糖預(yù)包埋石蠟切片技術(shù)應(yīng)用于神經(jīng)干細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè),能解決脫片、細(xì)胞重疊等問題。
　　 5.消化道來源的神經(jīng)干細(xì)胞,GABA組、nNOS組、ChAT組及Dβ H組與空白對(duì)照組的累積面積、平均光密度和10

5、D相比,nNOS組和ChAT組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),另外兩組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 6.腦來源的神經(jīng)干細(xì)胞,GABA組、nNOS組、ChAT組及Dβ H組與空白對(duì)照組的累積面積、平均光密度和IOD相比,nNOS組、ChAq、組和Dβ H組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),GABA組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 7.兩種神經(jīng)干細(xì)胞nNOS組和IChAT組相同參數(shù)分別比較,累積面

6、積、平均光密度和10D差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 8.流式細(xì)胞儀測(cè)定,消化道來源的神經(jīng)干細(xì)胞GABA、nNOS、ChAT、Dβ H陽性細(xì)胞分別為0.47％、14.13％、5.31％、0.06％；而腦來源的神經(jīng)干細(xì)胞GABA、nNOS、ChAT、Dβ H陽性細(xì)胞分別為1.86％、5.8％、25.01％、8.8％。
　　 結(jié)論:1.消化道來源的神經(jīng)干細(xì)胞表達(dá)的神經(jīng)遞質(zhì)主要為一氧化氮和乙酰膽堿,且以一氧化氮為主

7、,故可能宜作為一氧化氮陽性神經(jīng)元缺如性疾病的移植細(xì)胞源。
　　 2.腦來源的神經(jīng)干細(xì)胞表達(dá)的神經(jīng)遞質(zhì)為一氧化氮、乙酰膽堿和去甲腎上腺素,且以乙酰膽堿為主,故可能宜作為乙酰膽堿陽性神經(jīng)元缺如性疾病的移植細(xì)胞源。
　　 3.兩種神經(jīng)干細(xì)胞均不表達(dá)γ-氨基丁酸,提示對(duì)γ-氨基丁酸陽性神經(jīng)元缺如性疾病進(jìn)行移植治療時(shí),需要在移植前對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)后,才可能到達(dá)較好的移植效果。
　　 4.腦來源的神經(jīng)干細(xì)胞可能更適合作為