抗冷凍蛋白Ⅲ對家兔卵巢組織冷凍效果的影響.pdf

1、目的：卵巢組織冷凍和移植在保存女性生育力，恢復(fù)生殖內(nèi)分泌功能方面具有重要作用，已成為生殖醫(yī)學(xué)研究的重要課題。但是卵巢組織的冷凍損傷和移植后缺血損傷是制約卵巢組織冷凍移植技術(shù)發(fā)展的瓶頸。研究發(fā)現(xiàn)抗冷凍蛋白在組織和細(xì)胞的冷凍保存中取得了較好效果。本研究旨在評價抗冷凍蛋白Ⅲ（AFPⅢ）在家兔卵巢組織冷凍保存中的效果。
　　方法：本研究選用家兔卵巢為研究對象，分別采用玻璃化冷凍技術(shù)冷凍家兔卵巢皮質(zhì)片段，慢速冷凍和玻璃化冷凍技術(shù)冷凍家兔全卵

2、巢，并在常規(guī)保護(hù)劑方案中添加AFPⅢ。將凍融后的卵巢行光學(xué)顯微鏡組織學(xué)特性分析，透射電子顯微鏡觀察超微結(jié)構(gòu)變化，TUNEL法檢測卵巢組織間質(zhì)細(xì)胞、顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞的凋亡情況；共聚焦顯微鏡下檢測卵泡存活情況。
　　結(jié)果：采用玻璃化冷凍法冷凍卵巢家兔皮質(zhì)片段，解凍復(fù)蘇后，新鮮卵巢組的卵泡形態(tài)正常率顯著高于兩冷凍組（P<0.05），卵母細(xì)胞凋亡率顯著低于兩冷凍組（P<0.05）；在冷凍保護(hù)劑中添加AFPⅢ后卵泡形態(tài)正常率顯著高于未添加

3、AFPⅢ的常規(guī)玻璃化冷凍組（P<0.05），卵母細(xì)胞凋亡率顯著低于常規(guī)玻璃化冷凍組。
　　采用慢速冷凍和玻璃化冷凍家兔全卵巢，解凍復(fù)蘇后，新鮮組卵泡形態(tài)正常率、間質(zhì)細(xì)胞密度、卵泡存活率顯著高于4組凍融組（P<0.05）；新鮮組卵母細(xì)胞凋亡率顯著低于4組凍融組。慢速冷凍法冷凍家兔全卵巢時，在冷凍保護(hù)劑中添加AFPⅢ后卵泡形態(tài)正常率、間質(zhì)細(xì)胞密度和卵泡存活率較未添加AFPⅢ明顯升高（P<0.05）；而其卵母細(xì)胞凋亡率顯著低于未添加AF

4、PⅢ組（P<0.05）。玻璃化冷凍家兔全卵巢時，在冷凍保護(hù)劑中添加AFPⅢ后卵泡形態(tài)正常率和間質(zhì)細(xì)胞密度較未添加AFPⅢ明顯升高（P<0.05）；卵母細(xì)胞凋亡率顯著低于未添加AFPⅢ組（P<0.05）；而兩組間卵泡存活率無明顯差異（P＞0.05）。采用玻璃化冷凍法冷凍家兔全卵巢的卵泡形態(tài)正常率、卵泡存活率和卵母細(xì)胞凋亡率，與慢速冷凍法相比無顯著差異（P＞0.05），但其間質(zhì)細(xì)胞密度顯著高于慢速冷凍（P<0.05）。
　　結(jié)論：采用

5、玻璃化冷凍技術(shù)冷凍家兔卵巢組織片段，新鮮卵巢組的卵泡形態(tài)正常率顯著高于凍融后卵巢組織，而卵母細(xì)胞凋亡率明顯低于凍融卵巢，說明卵巢皮質(zhì)玻璃化冷凍過程中存在冷凍損傷；而冷凍保護(hù)劑中加入AFPⅢ可減少家兔卵巢皮質(zhì)玻璃化冷凍損傷，提高卵泡形態(tài)正常率減低卵母細(xì)胞凋亡率。
　　采用慢速冷凍和玻璃化兩種方法冷凍家兔全卵巢，兩種冷凍方法的效果相當(dāng)，但玻璃化冷凍對全卵巢的間質(zhì)細(xì)胞冷凍保存效果優(yōu)于慢速冷凍。在慢速冷凍和玻璃化冷凍保護(hù)劑中添加AFPⅢ均