冷凍液中添加阿拉伯半乳聚糖或聚蔗糖對牛取樣胚胎冷凍效果的影響.pdf

1、自PCR胚胎性別鑒定技術(shù)應(yīng)用以來,顯著提高了奶牛場母犢出生率,但該技術(shù)需對胚胎切割取樣,因而對胚胎造成一定損傷,使其對冷凍的耐受性降低。本實(shí)驗(yàn)主要以取樣胚胎為對象,通過向常規(guī)冷凍液中添加不同濃度的阿拉伯半乳聚糖(arabinogalactan)和聚蔗糖(Ficoll),,篩選出適于透明帶受損和細(xì)胞數(shù)量減少的胚胎冷凍液。
　　 本研究通過:
　　 試驗(yàn)一:取樣冷凍胚胎二次冷凍-解凍-觀察試驗(yàn)；
　　 試驗(yàn)二:取樣冷

2、凍胚胎二次冷凍-解凍-培養(yǎng)試驗(yàn)；
　　 試驗(yàn)三:取樣胚胎鮮胚冷凍-解凍-培養(yǎng)試驗(yàn)；
　　 試驗(yàn)四:取樣胚胎鮮胚冷凍-解凍-移植試驗(yàn)。
　　 試驗(yàn)時從阿拉伯半乳聚糖系列冷凍液和聚蔗糖系列冷凍液中各篩選出一種效果較好的冷凍液(0.03EAS1和0.6EFS1),之后采用這兩種冷凍液和對照組EG FREEZE(進(jìn)口成品乙二醇冷凍液)對體外生產(chǎn)牛胚胎的取樣胚和完整胚進(jìn)行冷凍試驗(yàn),比較冷凍效果。
　　 結(jié)果:

3、>　　 試驗(yàn)一,通過將各種冷凍液的胚胎回收率、0.5h形態(tài)完整率、1h形態(tài)完整率、1.5h形態(tài)完整率同對照組進(jìn)行比較,在阿拉伯半乳聚糖系列冷凍液中,篩選出六種冷凍效果較優(yōu)秀的冷凍液:0.005EAS1、0.01EAS1、0.02EAS1、0.03EAS1、0.04EAS1、0.05EAS1,四項(xiàng)指標(biāo)同EG FREEZE比較的結(jié)果為:96.67％、96.67%、93.33%、93.33%、93.33%、96.67%vs90.00%;72

4、.41%、65.52%、57.14%、85.71%、75.00%、65.52%vs61.62%:58.62%、55.17%、42.86%、78.57%、71.43%、48.28%vs51.52%:51.72%、41.38%、39.29%、60.71%、67.86%、37.93%vs39.39%。在聚蔗糖系列冷凍液中,篩選出七種冷凍效果較優(yōu)秀的冷凍液:0.4EFS、0.5EFS、0.6EFS、0.1EFS1、0.2EFS1、0.5EFS1

5、、0.6EFS1,四項(xiàng)指標(biāo)同EG FREEZE比較的結(jié)果為:90.00%、96.77%、90.63%、100.00%、90.00%、80.65%、100.00%vs90.00%;77.78%、56.67%,65.52%、70.00%、88.89%、64.00%、76.67%vs61.62%:70.37%、53.33%、55.17%、56.67%、66.67%、52.00%、60.00%vs51.52%;44.44%、46.67%、41.

6、38%、40.00%、51.85%、40.00%、60.00%vs39.39%。
　　 試驗(yàn)二,通過將各種冷凍液的胚胎回收率、培養(yǎng)24h發(fā)育率、培養(yǎng)48h發(fā)育率同對照組進(jìn)行比較,在阿拉伯半乳聚糖系列冷凍液中進(jìn)一步篩選出兩種冷凍液:0.03EAS1和0.04EAS1,三項(xiàng)指標(biāo)同EG FREEZE比較的結(jié)果為:100.00%、70.00%vs75.00%;20.00%、42.86%vs13.33%;30.00%、42.86%vs13

7、.33%。在聚蔗糖系列冷凍液中也進(jìn)一步篩選出兩種冷凍液:0.5EFS和0.6EFS1,三項(xiàng)指標(biāo)同EG FREEZE比較的結(jié)果為:100.00%、36.36%vs75.00%;35.00%、37.50%vs13.33%:40.00%、37.50%vs13.33%。
　　 試驗(yàn)三,通過將各種冷凍液的胚胎回收率、培養(yǎng)24h發(fā)育率、培養(yǎng)48h發(fā)育率同對照組進(jìn)行比較,得出結(jié)果,阿拉伯半乳聚糖系列冷凍液中,0.03EAS1(86.05%vs

8、93.62%、70.27%vs15.91%、81.08%vs22.73%)冷凍效果最好,聚蔗糖系列冷凍液中,0.6EFS1(88.10%vs93.62%、64.86%vs15.91%、70.27%vs22.73%)冷凍效果最好。
　　 試驗(yàn)四，移植結(jié)果同上述相符。體外受精胚胎冷凍-解凍培養(yǎng)試驗(yàn),通過比較各種冷凍液的胚胎回收率、4h形態(tài)完整率、培養(yǎng)24h發(fā)育率,得出結(jié)果,對取樣胚,0.03EAS1(90.00%、55.56%、11