以細(xì)胞篩為載體的玻璃化冷凍和慢速程序化冷凍保存人卵巢組織的效果比較.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分
　　女性腫瘤患者接受腫瘤相關(guān)治療后可能喪失生育功能。一些良性疾病患者，如有卵巢早衰風(fēng)險(xiǎn)、需要進(jìn)行化療的自身免疫疾病、需要骨髓移植的疾病等，也有生育力保存的需求。胚胎冷凍、卵母細(xì)胞冷凍、卵巢冷凍等都是生育力保存的方法。與發(fā)展較為成熟的胚胎冷凍相比，卵巢冷凍仍處于實(shí)驗(yàn)階段。卵巢冷凍主要由兩種冷凍方法，玻璃化冷凍和慢速冷凍，目前卵巢組織冷凍復(fù)蘇再移植活產(chǎn)的報(bào)道使用的冷凍方法都是慢速冷

2、凍。玻璃化冷凍在胚胎凍存上已取代了慢速冷凍，但二者保存卵巢組織的效果孰優(yōu)孰劣仍有爭(zhēng)議，可能在于玻璃化冷凍的載體選擇。冷凍過程使用的載體系統(tǒng)能否達(dá)到形成玻璃化的降溫速度是決定玻璃化冷凍效果的重要因素。細(xì)胞篩是用于細(xì)胞培養(yǎng)、雜質(zhì)過濾、細(xì)胞分散的工具，主要材質(zhì)為聚丙乙烯，孔徑為100μm，可使液氮和冷凍保護(hù)劑迅速滲透，有望作為玻璃化冷凍的良好載體。
　　目的:比較以細(xì)胞篩為載體的玻璃化冷凍與慢速程序化冷凍用于人卵巢組織冷凍的效果。

3、>　　方法:人卵巢組織取皮質(zhì)切塊后，隨機(jī)分為3組:新鮮組織對(duì)照組（F組）、慢速程序化冷凍組（S組）及以細(xì)胞篩為載體玻璃化冷凍組（V組）。卵巢組織冷凍復(fù)蘇后，固定切片后行蘇木素-伊紅染色，觀察卵泡形態(tài);使用TdT介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記技術(shù)，觀察卵泡凋亡情況;采用免疫組化方法觀察三組IGF1-R表達(dá)情況。比較三組卵泡正常形態(tài)率、卵泡凋亡率、IGF1-R陽(yáng)性面積比。部分卵巢組織體外培養(yǎng)，隔日采集培養(yǎng)液后檢測(cè)雌二醇(E2)濃度;比較三組及E

4、2濃度。V組和S組復(fù)蘇后卵巢組織各選6只去勢(shì)雌裸鼠進(jìn)行異體移植，另以6只去勢(shì)雌裸鼠作為對(duì)照組，移植后飼養(yǎng)1月，比較三組小鼠血清E2濃度。
　　結(jié)果:與F組原始卵泡正常形態(tài)率(91.1％)相比，V組原始卵泡正常形態(tài)率(88.1％)無顯著差異(P＞0.05)，而S組原始卵泡正常形態(tài)率(79.6％)顯著下降(P＜0.001);V組初級(jí)卵泡正常形態(tài)率(74.2％)與S組(73.6％)相似，但兩組均低于F組(89.0％)(P＜0.05);凋

5、亡檢測(cè)中，三組凋亡率無顯著差異(P＞0.05); IGF1-R在三組原始卵泡和初級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞中均有表達(dá)，三組陽(yáng)性面積比無顯著差異(P＞0.05)。體外培養(yǎng)2周后，各組E2濃度持續(xù)上升，F(xiàn)組E2濃度顯著高于S組、V組(P＜0.001)，后二組E2濃度無顯著差異(P＞0.05)。異體移植后，S組、V組裸鼠血清E2濃度顯著高于去勢(shì)對(duì)照組(P＜0.05)，但兩組間無顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:以細(xì)胞篩為載體的玻璃化冷凍和慢速

6、程序化冷凍均能較好地保存人卵巢組織卵泡的形態(tài)和內(nèi)分泌功能，前者對(duì)原始卵泡的保存效果更佳;復(fù)蘇后組織體外培養(yǎng)和異體移植后后，還可持續(xù)分泌E2; IGF1-R可在卵巢組織的原始卵泡和初級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞上表達(dá)，冷凍并不會(huì)損傷IGF1-R的免疫活性。
　　第二部分
　　目的:觀察Implanon皮下埋置避孕劑植入后出現(xiàn)的出血模式改變及副作用。
　　方法:納入有避孕需求的婦女45例，簽署知情同意書后植入皮下埋置避孕劑。以90 d

7、為一個(gè)觀察期，觀察避孕效果、出血模式改變和副作用。隨訪4個(gè)觀察期。記錄出血模式、痛經(jīng)、體重、痤瘡及其他不良反應(yīng)。
　　結(jié)果:在觀察期內(nèi)，無意外妊娠發(fā)生。第1個(gè)觀察期末，患者平均出血天數(shù)為28.2 d，平均出血次數(shù)為3.2次。頻繁出血和/或出血時(shí)間延長(zhǎng)、出血次數(shù)減少、出血次數(shù)正常、閉經(jīng)者分別占40％、35.6％、35.6％和11.1％。隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，在第4個(gè)觀察期末，平均出血天數(shù)降至17.3 d，平均出血次數(shù)為2.3次。頻繁出

8、血和/或出血時(shí)間延長(zhǎng)、出血次數(shù)減少、出血次數(shù)正常和閉經(jīng)者分別占11.1％、41.7％、38.9％和13.9％。使用1年后，82.4％的患者痛經(jīng)完全緩解或程度減輕。使用皮埋劑后患者的平均體重[(60.5±9.8)kg]顯著高于放置前[(58.0±9.9)kg](P＜0.01)，平均增加了(2.5±3.3) kg。其他不良反應(yīng)較少，1例出現(xiàn)痤瘡，2例出現(xiàn)情緒改變，1例出現(xiàn)嗜睡癥狀。
　　結(jié)論:Implanon植入1年避孕有效（有效率1