蛛網(wǎng)膜下腔出血后LTB4-BLT1軸介導(dǎo)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的臨床與基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：動(dòng)脈瘤破裂引起的蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急危重癥，具有高致殘率和致死率的特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅著人類生命及健康。早期腦損傷(early brain injury，EBI)被證實(shí)是SAH患者預(yù)后不佳的主要原因。EBI的具體機(jī)制十分復(fù)雜，包括血液機(jī)械損傷、顱內(nèi)壓增高、血腦屏障破壞、腦水腫、炎性反應(yīng)、細(xì)胞毒性作用、氧化應(yīng)激以及神經(jīng)細(xì)胞損傷等，臨床上千預(yù)其中一個(gè)單一的過(guò)程均無(wú)法達(dá)到期

2、望療效，因此尋找一種多效能的干預(yù)手段顯得尤為重要?；罨闹行粤＜?xì)胞募集并浸潤(rùn)組織可增加局部血管通透性、增強(qiáng)炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷。同時(shí)，白三烯B4(leukotriene B4，LTB4)被證實(shí)是高度強(qiáng)力的中性粒細(xì)胞趨化因子，主要通過(guò)其受體LTB4受體1（LTB4receptor1，BLT1）發(fā)揮作用。研究證實(shí)，SAH后3天內(nèi)大鼠腦組織中中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增加，導(dǎo)致微血管損傷，因此我們推測(cè)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)可能與SAH后EBI

3、存在密切的關(guān)系，且LTB4-BLT1軸亦參與其中。然而，目前尚沒(méi)有LTB4-BLT1軸介導(dǎo)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)在SAH后EBI中的相關(guān)報(bào)道。因此，本課題擬通過(guò)臨床及基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)對(duì)LTB4-BLT1軸介導(dǎo)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)在SAH后EBI中的作用及意義進(jìn)行研究。
　　方法：本課題首先通過(guò)分析LTB4、中性粒細(xì)胞標(biāo)記物髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxtidase，MPO）及相關(guān)炎性因子在動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者腦脊液中的水平變化及臨床意義;再利

4、用大鼠視交叉前池注血SAH模型，通過(guò)Western blotting、real-time PCR、免疫組織化學(xué)染色及免疫熒光染色在SAH后不同時(shí)間點(diǎn)分析LTB4及BLT1表達(dá)水平的變化和其細(xì)胞定位，以及BLT1與核因子-κB(NF-κB)表達(dá)水平的相關(guān)性;最后利用體內(nèi)SAH模型，通過(guò)上調(diào)和抑制實(shí)驗(yàn)探究LTB4-BLT1軸介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)對(duì)SAH后NF-κB介導(dǎo)的炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)、神經(jīng)元胞凋亡及壞死、血腦屏障破壞及神經(jīng)功能損傷的

5、作用。
　　結(jié)果：臨床研究表明，SAH后早期患者腦脊液中的LTB4水平顯著升高，與MPO及相關(guān)炎性因子水平呈正相關(guān)，與患者病情嚴(yán)重程度及預(yù)后不良密切相關(guān);體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，SAH后早期大鼠腦皮層中LTB4、BTL1水平明顯升高，BLT1受體主要表達(dá)于大腦中的神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞中，其表達(dá)水平與核內(nèi)NF-κB p65水平呈正相關(guān);進(jìn)一步干預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SAH后早期上調(diào)LTB4可加重大鼠腦水腫及神經(jīng)功能障礙，同時(shí)促進(jìn)大鼠腦實(shí)質(zhì)中

6、性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、小膠質(zhì)細(xì)胞激活、NF-κB p65的核內(nèi)移以及增加血腦屏障緊密連接蛋白ZO-1的降解，上調(diào)LTB4的同時(shí)應(yīng)用BLT1特異性抑制劑U75302可削弱LTB4的上述作用;抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SAH后早期應(yīng)用U75302阻斷LTB4-BLT1軸，可減少SAH后大鼠1天時(shí)腦實(shí)質(zhì)中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)，減弱NF-κB介導(dǎo)的炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)，減少血腦屏障相關(guān)蛋白的降解以及減少神經(jīng)元死亡;最后，SAH后早期應(yīng)用U75302抑制LTB4-B