農(nóng)村菌介導(dǎo)的GS1、GS2基因和P5CS基因轉(zhuǎn)化苜蓿的研究.pdf

1、谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase，GS；E.C.6.3.1.2)是植物和革蘭氏陰性微生物在氨同化過程中的關(guān)鍵酶，轉(zhuǎn)GS基因的植物具有抗除草劑和抗鹽漬等非生物脅迫的特性。二氫吡咯-5-羧化物合成酶(△1-pyrroline-5-carboxylatesynthetase，P5CS)是植物體內(nèi)合成脯氨酸的關(guān)鍵酶，轉(zhuǎn)P5CS基因的植物對(duì)鹽脅迫也表現(xiàn)出了較高的耐受性。本論文研究以隴東苜蓿、甘農(nóng)1號(hào)、甘農(nóng)3號(hào)、新疆大葉四個(gè)苜

2、蓿品種為試驗(yàn)材料，建立了上述苜蓿品種再生體系。特別是由新疆大葉種子誘導(dǎo)愈傷組織，再由愈傷組織形成胚狀體，從而分化成再生植株獲得成功，可以明顯提高再生植株的再生頻率，并可避免產(chǎn)生嵌合體。構(gòu)建了同時(shí)含有兩個(gè)谷氨酰胺合成酶(GS1和GS2)基因和P5CS基因，而不含有具有潛在危害的抗性篩選標(biāo)記基因的植物表達(dá)載體p2GS-P5CS。以該表達(dá)載體通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，轉(zhuǎn)化新疆大葉品種，利用谷氨酰胺合成酶的有效表達(dá)及NaCl同時(shí)篩選轉(zhuǎn)化體，獲得了轉(zhuǎn)基因

3、苜蓿再生植株。主要研究結(jié)果如下： 1.建立四個(gè)不同苜蓿品種的再生體系。 2.通過種子—愈傷—胚狀體途徑，優(yōu)化了新疆大葉苜蓿的再生體系。 3.構(gòu)建了植物表達(dá)載體p2GS-P5CS，同時(shí)含有兩個(gè)谷氨酰胺合成酶(GS1和GS2)基因和P5CS基因，且不含有具有潛在危害的抗性篩選標(biāo)記基因。 4.用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化苜蓿新疆大葉品種，得到轉(zhuǎn)基因植株。 5.對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR，PCR-Southern和So