miR-592在人結(jié)直腸癌的發(fā)生中靶向調(diào)控FOXO3A基因.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：預(yù)測及確認(rèn)miR-592在人結(jié)腸癌中的靶基因，并通過調(diào)控靶基因發(fā)揮生物學(xué)功能。
　　方法：1、通過在線預(yù)測軟件，預(yù)測miR-592下游靶基因，篩選出與miR-592結(jié)構(gòu)重疊的FOXO3A基因作為本實(shí)驗(yàn)的目的基因。收集20對臨床結(jié)直腸癌病人的樣本，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)和免疫組織蛋白技術(shù)檢測結(jié)直腸癌組織及其配對的正常腸組織中FOXO3A的表達(dá)量。2、構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)，將FOXO3A突變型及野生型3’UTR載體分別與miR-

2、592inhibitor、miR-592mimic共轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中，計(jì)算相對熒光素酶活性。3、將慢病毒LV-miR592inh和LV-miR592-NC載體分別轉(zhuǎn)染到結(jié)腸癌細(xì)胞系LS174T細(xì)胞中，通過免疫蛋白印跡法分析轉(zhuǎn)染了慢病毒載體后結(jié)直腸癌細(xì)胞中FOXO3A的表達(dá)量。
　　結(jié)果：1、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在臨床收集的20例結(jié)直腸癌病例中，F(xiàn)OXO3A在結(jié)直腸癌組織與配對的正常腸組織中低表達(dá)，免疫組織蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯

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