DKK2在人結直腸癌中表觀遺傳學調控及其抑制結直腸癌細胞生長和轉移的機制研究.pdf

1、癌癥是全球重大的公共衛(wèi)生問題，同時也是各國最主要的致死性疾病之一。據(jù)2017年度美國國家癌癥中心數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示：美國所有癌癥疾病中，結直腸癌(Colorectal cancer,CRC)的發(fā)病率和死亡率高居前三位。而在發(fā)展中國家，癌癥發(fā)病率和死亡率遠高于發(fā)達國家，據(jù)2016年發(fā)表于美國CA CANCER J CLIN雜志的中國癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示：中國癌癥患者的發(fā)病和死亡人數(shù)呈不斷上升的趨勢，2015年大約281400名患者死于癌癥，平均每天

2、7500名患者。結直腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，隨著經濟發(fā)展及生活水平的改善，其發(fā)病率及死亡率有不斷上升的趨勢；因此，尋找新的癌癥治療方法對腫瘤病患者治療和預防有重要意義。
　　DKK2(Dickkopf WNT signaling pathway inhibitor2)是WNT信號通路最常見的調控因子，其家族成員主要包含4個(DKK1，DKK2，DKK3，DKK4)，均為外分泌型蛋白。其中DKK2位于染色體4q25，基因長

3、度149kb，編碼的蛋白約28kd。目前已有文獻報道：DKK2在腎癌、卵巢癌組織中存在著不同程度的甲基化及組織表達下調，同時有抑制腫瘤細胞生長、侵襲等生物學能力；在消化道腫瘤中存在不同程度的甲基化現(xiàn)象，但其在結直腸癌中的功能及相關分子機制尚不清楚。因此我們推測DKK2可能作為抑癌基因(Tumor suppressor gene,TSG)參與結直腸癌的進程。本研究采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(Reverse transcription pol

4、ymerase chain reaction,RT-PCR)、甲基化特異性聚合鏈式反應(Methylation specific PCR,MSP)、在線數(shù)據(jù)庫分析等方法分析了DKK2在結直腸癌細胞系及組織中的表達和甲基化狀態(tài)；同時體外實驗和體內實驗檢測 DKK2對細胞增殖及遷移的影響，并進一步采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Real-time fluorescence quantiattive polymerase chain reac

5、tion,qRT-PCR)、RT-PCR及蛋白印跡法(Western blot,WB)等方法檢測DKK2對增殖及遷移能力影響的相關分子機制。結果發(fā)現(xiàn)：DKK2基因在7株(100%)結直腸癌細胞中均有不同程度的表達下調或缺失；聯(lián)合去甲基化藥物5-氮雜-2脫氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-dC)及組蛋白去乙?；敢种苿┣蔷谹(Trichostatin A,TSA)處理后,DKK2信使RNA(Messeng

6、er RNA,mRNA)表達下調或沉默的細胞株(HCT116、HT-29、SW480)能恢復表達；同時MSP發(fā)現(xiàn)，A+T處理后細胞(HT-29)，其甲基化程度有不同程度的降低，因此提示了DKK2啟動子甲基化可能是導致mRNA表達水平下調的主要原因之一。體外功能實驗發(fā)現(xiàn)：DKK2能通過Wnt/β-catenin通路抑制腫瘤的生長及遷移。
　　綜上所述，DKK2作為抑癌基因參與結直腸癌的發(fā)生發(fā)展，可能為結直腸癌早期診斷及治療提供了相關