人sCD152和sFasL基因克隆表達及sCD152功能研究.pdf

1、CD152是表達于活化T細胞表面的共刺激信號抑制配體,與抗原遞呈過程中T細胞活化的負調控有關.FasL屬于腫瘤壞死因子家族,它能傳導細胞凋亡信號,誘導活化的T細胞凋亡.由于CD152和FasL都能下調病理性T細胞的活化,所以在器官移植和自身免疫病領域有著很好的前景.以高效分泌表達CD152膜外可溶性片段(sCD152)畢赤氏酵母菌株為材料,大批量發(fā)酵表達得到純化蛋白,通過小鼠體內外一系列免疫試驗和人體外雙向混合淋巴細胞反應、淋巴細胞轉化

2、試驗結果顯示sCD152具有顯著的免疫抑制功能.其中以牛血清白蛋白作為抗原免疫小鼠,sCD152組比對照組的BSA抗體滴度明顯降低;而小鼠淋巴細胞增殖試驗說明sCD152去除后對初次免疫應答并無明顯抑制,且對體內BSA免疫的sCD152組脾細胞體外用OVA刺激得到陽性結果,初步證明了sCD152的免疫抑制特異性.為了獲得既帶有純化配體表位又帶有可剪切序列的可溶性sCD152蛋白,我們設計構建了含有His-tag和腸激酶識別切割序列DDD

3、DK的sCD152表達載體pPIC-HE-sCD152,結果這一表達載體在畢赤氏酵母中同樣高效分泌表達出目的蛋白,大量純化后用腸激酶酶切去除His-tag,用以進一步功能實驗,初步結果表明具有體外細胞免疫抑制功能.為了與sCD152一起誘導更強的免疫耐受,我們設計并構建了sFasL原核表達載體pBV220-sFasL,得到了高表達的基因工程BL21菌株,制備了大量純化蛋白,經腸激酶剪切后與sCD152一起進行了初步的功能實驗,結果顯示s