低溫脅迫對大黃魚MIPS、SCD和CIRP基因在相關組織中表達量變化的影響.pdf

1、浙江沿海越冬大黃魚年年有凍死,為了探索大黃魚應對低溫環(huán)境時相關基因的表達變化，本實驗模擬了大黃魚越冬季節(jié)養(yǎng)殖環(huán)境，對大黃魚進行室內低溫協(xié)迫實驗，運用 cDNA末端快速擴增（rapid amplification of cDNA ends，RACE）技術克隆部分低溫相關基因的全長，并利用實時熒光定量（quantitative real-time PCR，qPCR）技術研究候選耐寒基因在正常越冬水溫（12℃）和急性、慢性降溫處理條件下相關組

2、織的表達量變化。研究結果如下：
　　大黃魚MIPS基因 cDNA全長為2657bp，5′非編碼區(qū)（untranslated region，UTR）248bp，3′非編碼區(qū)750bp，開放閱讀框為1659 bp，起于ATG和終于TAA，編碼一個由553個氨基酸組成的蛋白；大黃魚 SCD-1a基因 cDNA全長為3125bp，5′非編碼區(qū)133bp，3′非編碼區(qū)1978bp，開放閱讀框為1014 bp，起于ATG和終于TAA，編碼一個

3、由338個氨基酸組成的蛋白；大黃魚 SCD-1b基因 cDNA全長為2647bp，5′非編碼區(qū)15bp，3′非編碼區(qū)1624bp，開放閱讀框為1008 bp，起于ATG和終于TGA，編碼一個由336個氨基酸組成的蛋白。并對三個基因進行跨膜域預測，結果表明 SCD-1a和SCD-1b基因編碼的蛋白有明顯的跨膜區(qū)，推測其為跨膜類蛋白。
　　大黃魚在正常越冬水溫（12℃）情況下，MIPS基因在鰓中表達量最高，在皮膚、腦、腎和脾組織中的表

4、達量低，而在肌肉、腸、肝、性腺和心組織中幾乎不表達；大黃魚 SCD-1a基因主要在肝組織中表達，SCD-1b基因主要在肝和肌肉組織中表達，在其他組織中少量表達或幾乎不表達；大黃魚 CIRP基因在10種組織中均有表達，肝中表達量最高，性腺中表達最少。
　　緩慢降溫路線為：12℃→10℃→8℃→6℃，降溫速率為0.5℃/d。經慢性低溫脅迫后，MIPS基因在鰓、皮膚、和心組織中均呈先顯著上升后顯著下降的趨勢，腦和肌肉組織則在整個脅迫過程

5、中呈持續(xù)升高趨勢。CIRP基因在鰓、皮膚、腎和心四個組織中最先發(fā)生響應，隨后是肌肉組織。SCD-1a基因鰓組織呈升高趨勢，脾、肌肉、腸和腦組織先升高后下降，肝組織呈下降趨勢。SCD-1b基因皮膚和腦呈現升高趨勢，肌肉、腸和心組織先上升后下降，肝組織表達量持續(xù)在高水平，變化不顯著。
　　急性降溫幅度為：12℃→8℃，取樣時間點為0 h、0.5 h、2 h、4 h。經急性性低溫脅迫后，MIPS基因除腸組織以外其他組織的表達量總體呈上升