基于DArT技術(shù)的大黃魚耐低溫性狀相關(guān)分子標(biāo)記的篩選.pdf

1、大黃魚（Larimichthys crocea）隸屬于硬骨魚綱，鱸形目（Perciformes），石首魚科（Sciaenidae），黃魚屬。又名黃魚、大鮮、金龍、紅口等，寧波等地市1997年引進(jìn)福建大黃魚養(yǎng)殖后，發(fā)現(xiàn)冬季越冬水溫過不了8oC，年年有大黃魚被凍死，為此選育了大黃魚“東海1號(hào)”耐低溫和生長(zhǎng)較快的新品種。通過以“東海1號(hào)”為實(shí)驗(yàn)材料，采用多樣性芯片技術(shù)（DiversityArrays Technology，DArT）篩選了大黃

2、魚耐低溫性狀相關(guān)分子標(biāo)記，為“東海1號(hào)”選育提供了理論依據(jù)。結(jié)果如下：
　　對(duì)“東海1號(hào)”進(jìn)行低溫篩選試驗(yàn)，得到了在水溫9oC以上有死亡征兆的七條對(duì)低溫敏感的“東海1號(hào)”大黃魚低溫敏感群體和在水溫6oC以下仍健康存活的七條耐低溫的“東海1號(hào)”大黃魚耐低溫群體。以低溫篩選實(shí)驗(yàn)中得到的低溫敏感群體和耐低溫群體作為實(shí)驗(yàn)材料。
　　將低溫敏感群體和耐低溫群體的基因組DNA等量混合，選擇七種降低基因組復(fù)雜度方法(PstI/AluI、P

3、stI/BanII、PstI/Bsp1286 I、PstI/BstN I、PstI/HaeIII、PstI/Rsa I、Pst I/Taq I)降低大黃魚基因組DNA的復(fù)雜度，并分別構(gòu)建了對(duì)應(yīng)的DArT文庫(kù)，7個(gè)文庫(kù)庫(kù)容均＞105，插入片段平均長(zhǎng)度＞500bp。
　　從上述7個(gè)文庫(kù)中各隨機(jī)挑取840個(gè)克隆，以其插入片段為探針，點(diǎn)制大黃魚篩選型芯片，用低溫敏感群體和耐低溫群體為材料，以Pst I/Alu I、Pst I/Ban II

4、、Pst I/Bsp1286 I、Pst I/BstN I、Pst I/Hae III、Pst I/Rsa I、Pst I/Taq I七種降低基因組復(fù)雜度的方法制備雜交樣品，計(jì)算七種降低基因組復(fù)雜度方法的多態(tài)性率，分別為6.52％、9.66%、8.00%、10.14%、7.12%、17.49%、12.80%。
　　重新點(diǎn)制篩選型芯片，選擇多態(tài)性率最高(17.49%)的Pst I/Rsa I方法進(jìn)行后續(xù)探針篩選，利用模糊C-均值聚類