大黃魚GDF—8基因的克隆及序列分析.pdf

1、大黃魚（Pseudosciaena crocea）,俗稱黃魚、黃花魚，為暖溫性集群洄游魚類。肌肉中富含氨基酸，味道鮮美，營養(yǎng)價值高，是我省重要的經(jīng)濟海洋魚類。然而經(jīng)過了多年養(yǎng)殖后，養(yǎng)殖大黃魚群體出現(xiàn)了經(jīng)濟性的衰退現(xiàn)象，如生長緩慢、成熟提早、親魚個體變小及肉質(zhì)變差等，這些因素直接影響到大黃魚的產(chǎn)量、銷售和商品的價格。 1997年McPherron等從小鼠骨骼肌cDNA文庫中克隆到了一個新基因，即生長分化因子-8（growth an

2、d differential factor-8，GDF—8）基因，并發(fā)現(xiàn)該基因主要在小鼠的骨骼肌中表達，由于它對骨骼肌的生長具有抑制作用，因而又被稱為肌肉生長抑制素（myostatin）。進一步研究發(fā)現(xiàn)GDF-8基因敲除的小鼠，其骨骼肌重量增加非常明顯，是正常野生型小鼠的2倍左右。除了骨骼肌重量明顯增加外，GDF-8基因敲除的小鼠其體內(nèi)脂肪形成還明顯減少。因此，可以通過抑制GDF-8基因的活性，提高養(yǎng)殖品種的肌肉含量，促進養(yǎng)殖品種的生長

3、。 本實驗以我省主要海水養(yǎng)殖魚類大黃魚研究對象，在對已報道的幾種動物GDF-8基因序列分析的基礎(chǔ)上，根據(jù)其序列的保守性設(shè)計引物，利用PCR法擴增和克隆大黃魚GDF-8基因，隨后對克隆產(chǎn)物測序，并對其結(jié)果進行了分析。結(jié)果顯示大黃魚GDF-8基因序列當(dāng)中起始密碼子到終止密碼子之間的長度為2232bp，其中包括外顯子Ⅰ379bp，內(nèi)含子Ⅰ3443bp，外顯子Ⅱ371bp，內(nèi)含子Ⅱ758，外顯子Ⅲ381。兩個內(nèi)含子共1101bp，編碼序

4、列（三個外顯子區(qū)域）共1131bp，編碼376個氨基酸。對序列進行相似性分析表明大黃魚GDF-8基因序列和其他魚類GDF-8基因序列還有哺乳類GDF-8基因序列相比，不管是在核酸水平還是在氨基酸水平上的相似性都很高。多重序列比較的結(jié)果顯示生長分化因子beta區(qū)域（282-376）在RXXR motif（264-267，RARR匹配RXXR的位點）和C基末端之間，從魚類到人類都是高度保守的。 另外信號肽的預(yù)測結(jié)果顯示，大黃魚GDF