職業(yè)性噪聲聾工人血清miRNAs的表達(dá)差異分析.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模貉芯柯殬I(yè)性噪聲聾工人與聽力正常工人之間血清中microRNAs(miRNAs)的表達(dá)差異。通過(guò)實(shí)驗(yàn)篩選并驗(yàn)證表達(dá)差異性miRNAs，并對(duì)其進(jìn)行靶基因的預(yù)測(cè)和驗(yàn)證，分析職業(yè)性噪聲聾致病機(jī)理，為后續(xù)的研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的支持。
　　實(shí)驗(yàn)方法：1.從病人血樣標(biāo)本中分離出300-500μL的血清，并對(duì)其進(jìn)行編號(hào)、記錄和分裝，并在-80℃冰箱進(jìn)行長(zhǎng)期保存。之后建立血液樣本信息數(shù)據(jù)庫(kù)，并從數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需的樣本。2.對(duì)血清樣本

2、進(jìn)行miRNAs的分離與純化。將提取出的總miRNAs用分光光度計(jì)進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，確定濃度和總量是否能夠進(jìn)行miRNAs的芯片雜交實(shí)驗(yàn)。3.進(jìn)行miRNAs標(biāo)記反應(yīng)體系的準(zhǔn)備、10× Blocking Agent的配制、雜交樣品的準(zhǔn)備、雜交混合液的配制、芯片雜交、芯片洗滌、芯片掃描、芯片數(shù)據(jù)提取等操作流程，完成miRNAs芯片實(shí)驗(yàn)。并通過(guò)圖表對(duì)miRNAs雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。最終找出差異性miRNAs。4.對(duì)芯片雜交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行熒光定

3、量PCR的驗(yàn)證，分析結(jié)果的可信度。再將篩選出的miRNAs進(jìn)行靶基因的預(yù)測(cè)，并驗(yàn)證其對(duì)靶基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1.所有血液樣本均已提取血清，并進(jìn)行記錄、編號(hào)及保存。建立血樣數(shù)據(jù)庫(kù)，在數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出需進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)的血清樣本共6個(gè)，其中對(duì)照組3個(gè)，耳聾組3個(gè)。2.經(jīng)過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)所得miRNAs進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，耳聾組（編號(hào)1-3）和對(duì)照組（編號(hào)1-3）樣本的miRNAs濃度及質(zhì)量達(dá)到芯片雜交實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。3.從6個(gè)樣本的質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果來(lái)看樣

4、本的完整性和純度均符合實(shí)驗(yàn)要求。通過(guò)分析miRNA芯片雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，共篩選出8個(gè)差異性miRNAs，它們是hsa-miR-1229-5p，hsa-miR-3162-5p，hsa-miR-4459， hsa-miR-483-5p，hsa-miR-6087，hsa-miR-6088，hsa-miR-638和hsa-miR-4484。4.熒光定量PCR的驗(yàn)證結(jié)果表明，在所選耳聾組樣本中hsa-miR-1229-5p和hsa-miR-483-5

5、p這兩條miRNAs的表達(dá)量均高于對(duì)照組。對(duì)它們的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，其中hsa-miR-1229-5p可能的靶基因?yàn)锳TG101，MAPK1，SLC12A6，SLC25A24，SLC30A8和SLC9C1， hsa-miR-483-5p可能的靶基因?yàn)镾RF和MAPK3。經(jīng)定量PCR結(jié)果驗(yàn)證，hsa-miR-1229-5p的靶基因?yàn)镸APK1，SLC12A6，SLC25A24和SLC30A8，hsa-miR-483-5p的靶基因?yàn)镾RF。<

6、br>　　結(jié)論：1.芯片雜交結(jié)果表明，從6個(gè)樣本中共篩選出8個(gè)差異性miRNAs，它們是hsa-miR-1229-5p， hsa-miR-3162-5p， hsa-miR-4459， hsa-miR-483-5p， hsa-miR-6087， hsa-miR-6088，hsa-miR-638，hsa-miR-4484。2.經(jīng)過(guò)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)職業(yè)性噪聲聾工人血清中hsa-miR-1229-5p，和hsa-miR-483-5p的表達(dá)量均高于對(duì)照組