職業(yè)性慢性苯中毒臨床分析及血清差異蛋白的篩選.pdf

1、目的：
　　苯（benzene）不僅是工業(yè)生產(chǎn)中重要的生產(chǎn)原料，也是工業(yè)生產(chǎn)中重要的有機(jī)溶劑。同時(shí)，苯作為居室的裝修材料,在日常生活中被廣泛應(yīng)用。近年來(lái),我國(guó)職業(yè)性慢性苯中毒發(fā)生率一直高居慢性中毒的前三位,重大惡性職業(yè)中毒事件也常見(jiàn)于報(bào)道。苯污染及其對(duì)健康的危害已成為亟待解決的重要的公共衛(wèi)生安全和健康問(wèn)題之一。目前，苯致病的作用機(jī)制還未完全闡明。各國(guó)學(xué)者對(duì)于苯中毒進(jìn)行了大量的研究,以期對(duì)苯中毒及苯致白血病的機(jī)制有更加全面的認(rèn)識(shí)，篩

2、選苯接觸及中毒效應(yīng)的生物標(biāo)志物，但由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,涉及多種致病因素和環(huán)節(jié),研究一直未能取得突破性進(jìn)展。本研究有兩個(gè)目的：了解苯對(duì)機(jī)體血清蛋白質(zhì)變化的影響，有助于尋找關(guān)鍵蛋白和標(biāo)志蛋白，對(duì)于闡明疾病發(fā)生機(jī)制、尋找早期生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)以及藥物治療靶標(biāo)具有重要意義；了解職業(yè)性慢性苯中毒的發(fā)病特點(diǎn)、疾病變化規(guī)律，對(duì)于闡明疾病發(fā)生機(jī)制具有重要意義。
　　方法：
　?、挪杉?例正常對(duì)照和18例職業(yè)性慢性苯中毒不同中毒程度的血清樣品，其中

3、職業(yè)性慢性輕度苯中毒、中度苯中毒及重度苯中毒各6例。血清樣品去除白蛋白和IgG后，對(duì)血清蛋白質(zhì)定量及熒光標(biāo)記，再進(jìn)行雙向熒光差異凝膠電泳(two-dimensional fluorescence differential gel electrophoresis，2D-DIGE）。以DeCyder V6.5軟件分析得出有顯著差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)，以基質(zhì)輔助激光解吸離子飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（MALDL-TOF-MS）鑒定差異蛋白質(zhì)。根據(jù)差異蛋白的生物

4、學(xué)過(guò)程、生物學(xué)功能及與苯的相關(guān)性，選擇有重要意義的差異蛋白，通過(guò)免疫比濁法對(duì)篩選出的差異蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。⑵采集職業(yè)性慢性苯中毒患者及正常健康體檢者全血、血清標(biāo)本，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查，包括血常規(guī)及肝功能的檢測(cè)；查閱職業(yè)性慢性苯中毒患者所有病歷，收集患者的臨床資料，包括一般情況、臨床癥狀、體格檢查、治療方法等進(jìn)行分析，找出其發(fā)病特點(diǎn)、疾病變化規(guī)律，觀察職業(yè)暴露與發(fā)病之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　?、俳⒘寺殬I(yè)性慢性苯中毒患者不同中毒程度

5、和正常對(duì)照血清樣品的2D-DIGE圖譜，其中輕度中毒與正常對(duì)照、中度中毒與正常對(duì)照、重度中毒與正常對(duì)照、中度中毒與輕度中毒、重度中毒與輕度中毒以及重度中毒與中度中毒之間比較分別存在4、11、6、1、0和4個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)，共計(jì)19個(gè)顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)。經(jīng)MALDI-TOF-MS鑒定的19個(gè)蛋白點(diǎn)，屬于10種蛋白質(zhì)。輕度中毒與正常對(duì)照相比，表達(dá)上調(diào)的蛋白是：載脂蛋白A-I和a1-抗胰蛋白酶；中度中毒與正常對(duì)照相比，表達(dá)上調(diào)的蛋白是

6、：載脂蛋白A-I、a1-抗胰蛋白酶、激肽原-1、補(bǔ)體C3、甲狀腺素運(yùn)載蛋白和a1-抗胰糜蛋白酶；重度中毒與正常對(duì)照相比，表達(dá)上調(diào)的蛋白是：載脂蛋白A-I、a1-抗胰糜蛋白酶、補(bǔ)體C3、玻連蛋白和凝聚素；中度中毒與輕度中毒相比表達(dá)上調(diào)的蛋白是：甲狀腺素運(yùn)載蛋白；重度中毒與中度中毒相比，表達(dá)下調(diào)的蛋白是：血清淀粉樣蛋白P和結(jié)合珠蛋白。免疫比濁法驗(yàn)證了Alpha-1-antitrypsin、Apolipoprotein A-I和Complem

7、ent C3在各組間的差異表達(dá)，趨勢(shì)與2D-DIGE相一致。②職業(yè)性慢性苯中毒患者中大部分自訴癥狀為頭昏、頭痛、乏力、睡眠差(失眠、多夢(mèng)）等神經(jīng)衰弱綜合癥，個(gè)別患者可有四肢疼痛及視物模糊等體征。造血系統(tǒng)的主要癥狀為牙齦出血、皮下出血等?；颊叽_診后即脫離苯接觸，住院治療。對(duì)慢性輕度苯中毒患給予一般支持療法；慢性中度苯中毒患者除了一般支持療法外，視具體情況給予人類白細(xì)胞集落刺激因子或輸血治療等；慢性重度苯中毒患者除了一般支持療法外，給予人類

8、白細(xì)胞集落刺激因子、糖皮質(zhì)激素、雄激素、丙種球蛋白、抗生素以及反復(fù)輸注紅細(xì)胞懸液和血小板等。輕度苯中毒、中度苯中毒、重度苯中毒的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、總蛋白、白蛋白及球蛋白結(jié)果均低于正常對(duì)照；輕度苯中毒、中度苯中毒、重度苯中毒間紅細(xì)胞計(jì)數(shù)逐漸減少，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　?、盆b定了10種與職業(yè)性慢性苯中毒程度（輕、中、重）相關(guān)的差異蛋白；篩選的血清差異蛋白功能與機(jī)體炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝紊亂及認(rèn)知功能