亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的機(jī)制研究.pdf

1、近年來(lái)，非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease, NAFLD）的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈快速增長(zhǎng)。NAFLD是代謝綜合征的組成部分，其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，Day等提出了二次打擊學(xué)說(shuō)，胰島素抵抗、瘦素抵抗以及氧化應(yīng)激等在其中發(fā)揮重要作用。NAFLD目前尚無(wú)理想的防治藥物。研究表明慢性肝病患者體內(nèi)支鏈氨基酸（亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸）水平顯著低于非肝病的對(duì)照組，提示支鏈氨基酸對(duì)于慢性肝病有一定的改

2、善作用。因此，進(jìn)一步研究支鏈氨基酸，尤其是亮氨酸對(duì)非酒精性脂肪性肝病的作用及機(jī)制是十分必要的。
　　目的：
　　研究不同劑量亮氨酸對(duì)NAFLD的影響,并圍繞二次打擊學(xué)說(shuō)相關(guān)的因素探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1. NAFLD模型的建立及亮氨酸對(duì)肝臟脂肪變性的直接作用：5周齡雄性SD大鼠48只隨機(jī)分為4組，高脂組飼料參照Harlan實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)的60％高脂飼料配方，干預(yù)組在高脂飼料基礎(chǔ)上分別添加1.5%、3

3、%、4.5%的亮氨酸，喂養(yǎng)16周。每周記錄大鼠體重、攝食量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，觀察大鼠肝組織病理學(xué)改變，測(cè)定血清肝功能指標(biāo)丙氨酸轉(zhuǎn)移酶（ALT）和門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）水平。
　　2.亮氨酸對(duì) NAFLD模型大鼠糖脂代謝、氧化應(yīng)激以及炎癥因子的影響：16周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，測(cè)定大鼠血清空腹血糖以及空腹胰島素（FINS），計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。測(cè)定大鼠肝糖原，血清膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）等脂

4、代謝指標(biāo)水平，總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）等氧化指標(biāo)以及大鼠血清中白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和C反應(yīng)蛋白（CRP）的水平。Western blot檢測(cè)肝、脂肪代謝相關(guān)蛋白固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（SREBP1）以及腎周白色脂肪組織中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）的表達(dá)水平。
　　3.亮氨酸對(duì) NAFLD模型大鼠

5、瘦素通路的影響：16周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，測(cè)定大鼠血清瘦素水平。取下丘腦免疫組化法測(cè)定其瘦素受體表達(dá)。Western blot法進(jìn)一步檢測(cè)白色脂肪組織中瘦素受體表達(dá)以及JAK2、STAT3和SOCS3等瘦素信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1. NAFLD模型的建立及亮氨酸對(duì)肝臟脂肪變性的直接作用：（1）干預(yù)16周后，4組大鼠的體重、平均攝食量和主要臟器指數(shù)之間無(wú)顯著性差異。（2）肝組織病理切片觀察到高脂組大鼠肝臟呈現(xiàn)明顯的

6、脂肪變性，證實(shí)本研究中高脂喂養(yǎng)建立了NAFLD的大鼠模型。亮氨酸的干預(yù)則逆轉(zhuǎn)了脂肪變性。同時(shí)，亮氨酸的干預(yù)也顯著降低了高脂組升高的大鼠血清ALT、AST水平。
　　2.亮氨酸對(duì)NAFLD模型大鼠糖脂代謝、氧化應(yīng)激以及炎癥因子的影響：（1）亮氨酸組較高脂組FINS水平均顯著降低，但3個(gè)亮氨酸組之間無(wú)顯著性差異；亮氨酸的干預(yù)顯著降低了高脂組HOMA-IR指數(shù)。（2）干預(yù)16周后，4組大鼠的肝糖原之間的差異無(wú)顯著性，3個(gè)劑量的亮氨酸干預(yù)

7、都顯著降低了大鼠血清 TC、TG和LDL-C水平，3.0%和4.5%亮氨酸顯著升高肝臟T-SOD和GSH-Px水平，4.5%亮氨酸還顯著降低了肝臟MDA水平。（3）高脂組大鼠肝組織中SREBP1蛋白表達(dá)量由于亮氨酸的干預(yù)顯著降低，而腎周白色脂肪組織中的P P ARγ蛋白表達(dá)量則在亮氨酸的作用下顯著上升。
　　3.亮氨酸對(duì)NAFLD模型大鼠瘦素通路的影響：（1）單純高脂組和添加亮氨酸3組的血清瘦素水平分別為2.31±0.23,1.6

8、9±0.26,1.87±0.27和1.91±0.29 ng/mL，亮氨酸組顯著低于高脂組，且亮氨酸組之間無(wú)顯著性差異。（2）免疫組化染色結(jié)果顯示，4組大鼠肝組織瘦素受體的相對(duì)含量為22.70±3.21，54.33±3.06,39.50±2.08和36.00±3.51。亮氨酸組的相對(duì)含量均顯著高于高脂組，其中1.5%亮氨酸組效果最為顯著。和肝臟相似，亮氨酸組的大鼠下丘腦的瘦素受體也高于對(duì)照組。（3）亮氨酸的干預(yù)顯著升高了高脂組大鼠下丘腦中

9、瘦素受體蛋白和腎周白色脂肪組織中 JAK2和STAT3的表達(dá)量。降低了SOCS3的表達(dá)量。其中，1.5%亮氨酸組效果最好。
　　結(jié)論：
　　1.亮氨酸能夠改善肝臟功能以及肝臟脂肪變性，從而具有改善非酒精性脂肪性肝病的作用。
　　2.亮氨酸改善了高脂喂養(yǎng)的大鼠的糖脂類(lèi)代謝、提高抗氧化能力、降低血清及組織中的炎性因子。
　　3.亮氨酸降低血中瘦素水平，增加中樞和外周組織瘦素受體和 JAK2、STAT3等瘦素信號(hào)通路相