簡介：分類號墅密級壘翌學號83072008005學校代碼90031綈；軍蟹犬．譬八年制博士學位論文MLL3突變AML家系的異常表觀遺傳學研究及大劑量DNR治療AML的COCHRANE系統(tǒng)評價指導教師導師組成員宮薔陳潔平教授，主任醫(yī)師張勇葉治家錢志堅侯宇培養(yǎng)單位第三軍醫(yī)走學第一附屬醫(yī)院血液科申請學位類別鱟±童些竺垡論文提交日期2016年5月專業(yè)名稱墮生墮堂壘壅叢論文答辯EL期2016年5月答辯委員會主席王季石評閱人馮文莉李蓉劉利吳秉毅杜鵑二。一六年五月目錄縮略語表?????????????????????????????????1英文摘要?????????????????????????????????3中文摘要?????????????????????????????????6論文正文尬三3突變AML家系的異常表觀遺傳學研究及大劑量DNR治療AML的COCHRANE系統(tǒng)評價????????????????????????9第一章MLL3突變AML家系的異常表觀遺傳學研究???????????．．9第一節(jié)MLL3突變AML家系的異常DNA甲基化研究??????????．．101．1引言??????????????????????????．101．2材料與方法??????????????????．???????111．3結果???????????????????????????????????181．4討{侖???????????????????????????????????261．5小結???????????????????????????????????28第二節(jié)尬耶突變的AML家系中H3K4ME3異常機制研究????????．．282．1引言??????????????????????????．282．2材料和方法?????????????????????????．292．3結果???????????????????????????????????362．4討{念???????????????????????????????????412．5小結???????????????????????????????????43第二章大劑量DNR治療AML作用與安全性的COCHRANE系統(tǒng)評價?????．441．1引言??????????????????????????．441．2方法???????????????????????????????????441．3結果??????????????????????????????????．541．4討{侖???????????????????????????????????681．5小結???????????????????????????????????71文獻綜述急性髓細胞白血病的表觀遺傳學變異研究進展???????????．．72參考文獻??????????????????????????????一87攻讀學位期間的研究成果?????????????????????????107致{射??????????????????????????????????????????．．108

簡介：點擊查看更多野生型和阿爾茨海默病模型小鼠父代的空間訓練對子代認知功能和突觸可塑性的影響及表觀遺傳學機制.pdf精彩內容。

簡介：白紋伊蚊（AEDESALBOPICTUS）屬雙翅目，蚊科，伊蚊屬AEDES，是中國常見蚊種之一。白紋伊蚊分布廣，南起海南島，北至沈陽、大連市，西至隴縣和寶雞市，西南至西藏自治區(qū)，向東大部分地區(qū)均有分布，以北緯30℃以南最為常見。白紋伊蚊是登革熱、黃熱病、基孔肯雅熱、西尼羅熱等病毒傳播的重要媒介蚊蟲。當前，由于登革熱及登革出血熱尚無特效藥物和疫苗，控制登革熱傳播媒介白紋伊蚊是防治登革熱的主要手段。防治白紋伊蚊的方法主要包括化學防治和環(huán)境治理。通過蚊蟲防治措施的實施，可以降低白紋伊蚊的種群數(shù)量，同時也會影響白紋伊蚊的種群遺傳結構，進而影響一個地區(qū)白紋伊蚊的種群密度、分布和擴散，因此深入研究一個地區(qū)內白紋伊蚊種群遺傳結構是蚊蟲防治的基礎。我國一般情況下以“標本兼治，治本清源”為原則，以環(huán)境治理、消除孳生地為主的綜合防治措施防治白紋伊蚊。大量的滅蚊行動使白紋伊蚊的孳生地被清除，使其孳生地不連續(xù)，導致白紋伊蚊的生境不連續(xù)分布，使之破碎化。孳生地的不連續(xù)影響白紋伊蚊種群的擴散和自由交配，近親繁殖和遺傳漂變潛在的可能性增加，種群的遺傳多樣性下降，影響到物種的存活和進化潛力。蚊蟲防治措施是影響白紋伊蚊種群遺傳結構的人為干擾因素，同時WOLBACHIA感染也是影響白紋伊蚊種群遺傳結構的重要生物因素。WOLBACHIA是立克次體微生物，廣泛存在于節(jié)肢動物體內，能引起寄主的遺傳結構改變。胞質不融合作用使感染不同類型WOLBACHIA的白紋伊蚊不能產(chǎn)生可育后代，使白紋伊蚊種群基因交流受阻，影響白紋伊蚊的種群遺傳結構。在我國蟲媒病的爆發(fā)時有發(fā)生，為控制疫情流行，迅速降低成蚊密度，化學防治是必不可少的手段。衛(wèi)生殺蟲劑大量、持續(xù)的使用，導致媒介蚊蟲已經(jīng)產(chǎn)生了很高的抗性。蚊蟲抗藥性機理主要包括兩個方面代謝解毒和靶標敏感性下降。代謝抗藥性主要包括多功能氧化酶、乙酰膽堿酯酶、谷胱甘肽轉移酶和羧酸酯酶等酶活性升高。靶標抗性是指由于殺蟲劑作用靶標敏感度降低而產(chǎn)生的抗性，殺蟲劑作用的靶標主要有神經(jīng)軸突鈉離子通道、乙酰膽堿酯酶等。本研究以江蘇省南京市為例，以一個城市地理區(qū)劃范圍內白紋伊蚊為研究對象。研究白紋伊蚊的孳生地、種群密度和種群遺傳結構，分析代謝抗性和抗性靶標與對殺蟲劑抗性的關系，探討孳生地破碎化與WOLBACHIA感染對白紋伊蚊種群遺傳學的影響，為控制白紋伊蚊密度提供理論依據(jù)。本研究結果如下1白紋伊蚊自然種群密度的調查結果2013年7～9月共采集江蘇省南京市29個種群白紋伊蚊，共調查各種容器1651個，陽性容器696個。經(jīng)實驗室形態(tài)學和COⅠ序列鑒定全部為白紋伊蚊。分析白紋伊蚊幼蟲密度與孳生地點類型、容器顏色、容器大小、容器材質的相關性發(fā)現(xiàn)孳生密度僅與孳生容器顏色有關，和其它因素無關。2本研究的9個微衛(wèi)星位點，平均等位基因為73265，平均多態(tài)信息含量為056，平均期望雜合度為0605，一方面說明這9個微衛(wèi)星位點所提供的多態(tài)性信息含量較為豐富且基因頻率分布較為均勻，用其分析遺傳多樣性具有較高的有效性和可靠性，另一方面也說明本研究的樣本量較為充分。觀測雜合度除ZW種群和SQ種群外均低于期望雜合度，說明所研究的17個白紋伊蚊種群具有較高的基因一致度。3哈迪溫伯格平衡檢驗結果表明所有種群中均有微衛(wèi)星位點偏離哈溫平衡，這些位點偏離哈迪溫伯格平衡可能是種群內WOLBACHIA感染情況的不同，CI作用使群體內個體近交嚴重引起的，以及由于以治本清源為目的的大量滅蚊行動等人為原因和高溫、降雨量的減少等自然原因，造成其孳生地不連續(xù)，導致白紋伊蚊種群不夠大，各種群內近親交配。4本研究的9個微衛(wèi)星位點的17個種群的固定指數(shù)為0013～0141，群體平均固定指數(shù)為0043，說明群體間隨機交配程度較高，遺傳分化不明顯遺傳分化系數(shù)在002～0132之間，平均遺傳分化系數(shù)為004，表明這17個白紋伊蚊種群間有輕度遺傳分化。NEI氏遺傳距離和基因流結果也顯示各種群遺傳分化較低。5本研究的結果顯示17個白紋伊蚊種群并沒有明顯的遺傳多樣性降低的趨勢，表明生境破碎化和WOLBACHIA的CI作用對白紋伊蚊的遺傳分化沒有明顯的影響。對17個種群群體間遺傳距離和地理距離進行MANTEL檢驗，結果表明為二者之間沒有相關性。6白紋伊蚊感染W(wǎng)OLBACHIA的WSP基因序列結果對29個白紋伊蚊種群進行WOLBACHIA感染檢測，僅寧泉北苑種群沒有感染，其他種群均存在不同程度的感染，感染率為40％～100％。分析WOLBACHIAA大組和B大組測序結果，發(fā)現(xiàn)每個種群均存在超感現(xiàn)象隨機選擇使用通用引物檢測WOLBACHIA感染的測序結果進化分析，發(fā)現(xiàn)明顯分為2類，說明可能感染不同類型的WOLBACHIA隨機選擇每個種群中感染W(wǎng)OLBACHIAA大組和B大組的兩個樣本進行分析，發(fā)現(xiàn)WOLBACHIAA大組和B大組的序列基本都聚為一類，說明南京白紋伊蚊種群感染W(wǎng)OLBACHIAA大組和B大組的某一種WOLBACHIA類型，不是A大組或B大組的某幾種WOLBACHIA類型。7白紋伊蚊對常用殺蟲劑抗藥性測定結果本實驗室選擇殘殺威、毒死蜱、氯菊酯和溴氰菊酯作為實驗用藥對其幼蟲進行抗藥性測定，對殘殺威抗藥性倍數(shù)為218～593倍，對毒死蜱抗藥性倍數(shù)為123～24倍，對氯菊酯抗藥性為175～932倍，對溴氰菊酯抗藥性為303～2583倍，并且溴氰菊酯和氯菊酯抗藥性存在線性相關。8白紋伊蚊生化檢測結果分析白紋伊蚊對殺蟲劑抗藥性和ACHE、EST和GST三種代謝活性相關性，發(fā)現(xiàn)殘殺威LC50與EST活性、GST活性成線性相關，毒死蜱LC50和GST活性成線性相關，其他無相關性對細胞色素P450基因拷貝數(shù)與對不同殺蟲劑的LC50值之間進行相關性分析，發(fā)現(xiàn)其基因表達量的差異與對殺蟲劑的抗藥性沒有相關性。9抗藥性基因研究結果成功克隆鈉離子通道基因全長和乙酰膽堿酯酶基因全長，發(fā)現(xiàn)鈉離子通道基因氨基酸序列1998位點發(fā)生突變，可能與對溴氰菊酯抗藥性有關鈉離子通道基因上存在的可變剪接，可能與抗藥性相關序列沒有發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿酯酶基因突變。

簡介：目的細胞色素P450酶3A4CYTOCHROMEP4503A4，CYP3A4是人體中重要的藥物代謝酶，它能夠氧化代謝臨床上大約60％的藥物。CYP3A4的表達和活性在不同個體間存在非常大的差異且難以預測和評估。既往研究已表明，CYP3A4的表達能被多種臨床常用藥物誘導和抑制，這是導致CYP3A4表達和活性個體差異的一個重要原因，而且會引起藥物相互作用和不良反應的發(fā)生，對藥物研發(fā)和臨床安全用藥造成了很大的困擾。以往的研究主要集中于遺傳因素如單核苷酸多態(tài)性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMPHISMS，SNP對CYP3A4表達的影響，然而SNP在人群中的分布頻率普遍較低且僅能解釋大約1030％的個體差異。近年來的研究表明，表觀遺傳修飾能從多個水平上參與藥物代謝酶基因的表達調控，如DNA甲基化、組蛋白甲基化和乙?；?、非編碼RNANONCODINGRNA等。組蛋白修飾是一種重要的表觀遺傳調控機制，組蛋白甲基化和乙?；揎椗c基因的轉錄激活與抑制有著密切聯(lián)系，是細胞生命活動中重要的調節(jié)機制。孕烷X受體PREGNANEXRECEPT，PXR是肝臟中重要的核受體，CYP3A4的基因表達受PXR的調控，但其確切的調控機制不十分清楚，是否需要有其他關鍵因子協(xié)同其調控CYP3A4表達已有研究表明組蛋白甲基化和乙?；谝恍〤YPS的基因表達中發(fā)揮關鍵的調控作用，但組蛋白修飾對PXR介導的CYP3A4誘導表達的影響尚未見報道。本研究提出假設藥物激活PXR可通過募集相關的輔激活因子如核受體輔激活因子6NUCLEARRECEPTCOACTIVAT6，NCOA6和組蛋白乙?；D移酶P300等，識別CYP3A4基因啟動子區(qū)PXR的結合位點并引起組蛋白修飾的改變，從而激活CYP3A4的轉錄。已有研究報道MICRNA作為一種特殊的表觀遺傳學修飾，可以通過直接靶向CYP3A4的3端非編碼區(qū)3UNTRANSLATEDREGION，3UTR而調控其表達，或通過靶向調控轉錄因子如PXR等間接影響CYP3A4的表達。然而，MIRNA在藥物誘導CYP3A4表達中的作用及機制尚未見報道。綜上，本課題擬從組蛋白甲基化、乙酰化修飾和MIRNA調控的角度探討PXR配體利福平誘導CYP3A4基因表達調控的表觀遺傳機制，主要從以下幾個方面展開研究①組蛋白修飾在利福平誘導CYP3A4表達中的作用及機制②MIRNA在利福平誘導CYP3A4表達中的作用及機制③人肝臟組織中MIRNA表達和組蛋白修飾與CYP3A4基礎表達個體差異的關系。該研究為闡明藥物代謝酶個體差異的分子機制提供理論依據(jù)，以期有助于新藥研發(fā)和指導臨床合理用藥。材料與方法1人肝臟組織標本的收集本研究所用肝臟組織樣本從鄭州大學第一附屬醫(yī)院收集，標本來源為肝血管瘤、膽囊癌、肝膽管結石等患者進行肝部分切除術所獲得的正常肝臟組織。所有樣本已排除肝炎及其他傳染性疾病，且患者肝、腎功能正常。研究方案經(jīng)鄭州大學第一附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會的批準，所有標本的收集均獲得患者的同意并在手術前簽署了知情同意書。樣本保存于液氮中直至實驗。2CYP3A4在肝細胞中的誘導表達和人肝臟組織中表達的測定本研究經(jīng)過篩選后使用LS174T和HEPARG兩種細胞系作為利福平誘導CYP3A4表達的模型進行實驗。用利福平（10ΜM）誘導LS174T細胞和HEPARG細胞后，以TRIZOL法提取總RNA并采用一步法反轉錄合成CDNA，采用REAITIMEQUANTITATIVEPCRQPCR和WESTERNBLOT檢測CYP3A4誘導表達水平，并檢測CYP3A4在人肝臟組織中的MRNA和蛋白基礎表達水平。3RNA干擾實驗分別構建特異性靶向目標基因PXR、NCOA6和P300的SHRNA表達載體，瞬時轉染細胞后通過嘌呤霉素篩選穩(wěn)定轉染細胞株。檢測PXR、NCOA6和P300表達的下調作用并分析對利福平誘導效應的影響以及對組蛋白修飾的影響。4染色質免疫共沉淀CHROMATINIMMUNOPRECIPITATION，CHIP分析CYP3A4基因啟動子區(qū)組蛋白修飾水平將利福平誘導后的細胞用1％甲醛溶液交聯(lián)后進行超聲破碎剪切DNA片段，分別使用相應的抗體進行免疫共沉淀，用QPCR分析利福平對CYP3A4基因啟動子區(qū)PXR結合區(qū)域H3K4三甲基化H3K4ME3、H3K27三甲基化H3K27ME3和H3乙?；疕3AC水平以及對PXR、NCOA6和P300結合的影響。5細胞免疫熒光（IMMUNOFLUESCENCE，IF）和免疫共沉淀COIMMUNOPRECIPITATION，COIP檢測蛋白質在細胞中的定位及相互作用制備LS174T細胞爬片并給予利福平（10ΜM）誘導48H，根據(jù)細胞免疫熒光步驟操作并使用激光共聚焦顯微鏡觀察PXR、NCOA6、P300蛋白在細胞中的分布及共定位狀態(tài)。收集利福平誘導后的LS174T細胞并提取總蛋白，用NCOA6或P300的抗體進行COIP實驗，分析PXR和NCOA6P300之間的蛋白質相互作用。6利福平對HEPARG細胞中MIRNA表達的影響使用MIRVANATMMIRNA提取試劑盒提取HEPARG細胞總RNA，通過HUMANMIRNAARRAYV40表達譜芯片AFFYMETRIX檢測MIRNA的表達。使用生物信息學預測篩選能夠靶向CYP3A4的差異表達MIRNA，并通過QPCR分析驗證利福平對MIRNA表達的影響。構建攜帶CYP3A43UTR全長的熒光素酶報告基因載體并對MIRNA可能的結合位點進行定點突變，通過報告基因篩選并明確調控CYP3A4的MIRNA。7人肝臟組織中MIRNA表達和組蛋白修飾水平的檢測通過REALTIMEQPCR檢測所收集的人肝臟組織中MIRNA的表達，CHIPQPCR分析部分組織樣本CYP3A4基因啟動子區(qū)組蛋白修飾水平，并與CYP3A4的表達進行關聯(lián)分析。統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)以均值士標準差表示，兩組之間的均數(shù)比較采用T檢驗，多組之間均值的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用BONFERRONISPOSTHOCTEST或DUNTSTEST進行分析，關聯(lián)分析采用SPEARMAN相關性分析，數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析使用SPSS軟件進行。以P值小于005認為差異有統(tǒng)計學意義。實驗結果（一）組蛋白修飾在利福平誘導CYP3A4表達中的作用及機制1利福平對LS174T細胞中CYP3A4表達的誘導作用與對照組01％VV，DMSO比，利福平10ΜM能夠上調LS174T細胞中CYP3A4的MRNA4～15倍，P＜005和蛋白（16～29倍，P＜005）的表達且呈時間依賴性，而通過SHRNA干擾PXR的表達后則顯著降低利福平對CYP3A4的誘導作用（下調70％，P＜005），該結果提示利福平誘導CYP3A4的表達與PXR有關。2利福平對CYP3A4基因啟動子區(qū)組蛋白修飾水平及PXR、NCOA6和P300結合狀態(tài)的影響通過CHIPQPCR分析發(fā)現(xiàn)，利福平誘導LS174T細胞中CYP3A4表達的同時改變了CYP3A4基因啟動子區(qū)的組蛋白修飾狀態(tài)。與對照組01％VV，DMSO比，利福平10ΜM使CYP3A4啟動子序列上PXR結合區(qū)域的組蛋白H3K4ME3和H3乙?；斤@著升高P＜005而使H3K27ME3水平顯著降低P＜005，這種改變與CYP3A4表達的上調相一致。結果提示，組蛋白甲基化和乙?；降母淖兣cCYP3A4的誘導表達有關。進一步分析PXR、NCOA6和P300在CYP3A4基因啟動子PXR結合區(qū)域的富集水平發(fā)現(xiàn)，利福平能夠顯著提高PXR結合區(qū)域NCOA6和P300的結合（上調＞15倍，P＜005），這進一步提示組蛋白甲基化和乙?；癄顟B(tài)的變化參與了利福平對CYP3A4的誘導作用。3干擾NCOA6和P300的表達對利福平誘導CYP3A4表達及組蛋白修飾狀態(tài)的影響通過RNA干擾實驗將LS174T細胞中NCOA6和P300的表達抑制，發(fā)現(xiàn)CYP3A4MRNA的基礎表達顯著的下調（分別下調65％、31％，P＜005），而利福平對CYP3A4的誘導作用也被顯著下調（下調＞70％，P＜005）。將NCOA6和P300的表達抑制后，CYP3A4啟動子PXR結合區(qū)域的H3K4ME3和H3乙酰化水平顯著降低P＜005而H3K27ME3則明顯升高P＜005，同時利福平對CYP3A4啟動子區(qū)H3K4ME3、H3K27ME3和H3乙?；降母淖円脖幻黠@抑制。這表明，利福平對CYP3A4的誘導作用以及組蛋白修飾狀態(tài)依賴于NCOA6和P300的作用。4利福平通過激活PXR而改變CYP3A4啟動子區(qū)的組蛋白修飾及NCOA6和P300的結合狀態(tài)通過RNA干擾實驗抑制PXR的表達后，利福平對CYP3A4啟動子區(qū)H3K4ME3、H3K27ME3和H3乙?；降挠绊懕幻黠@抑制，H3K4ME3和H3乙?；捷^對照組明顯下降P＜005，而H3K27ME3水平則顯著升高P＜005。此外，NCOA6和P300在CYP3A4啟動子區(qū)的富集也被明顯抑制（下調＞50％，P＜005）。這些結果提示，PXR在利福平引起CYP3A4啟動子區(qū)組蛋白修飾狀態(tài)變化中發(fā)揮關鍵作用。進一步通過COIP分析發(fā)現(xiàn)，PXR能夠與NCOA6和P300發(fā)生蛋白質相互作用，且利福平能夠促進這種相互作用。細胞免疫熒光結果顯示，利福平促進PXR、NCOA6和P300在細胞核內的分布，PXR在細胞核內與NCOA6、P300的共定位明顯高于對照組。以上結果提示，利福平通過激活PXR并募集NCOA6和P300在CYP3A4基因啟動子區(qū)的結合從而促進CYP3A4的轉錄。（二）MIRNA在利福平誘導CYP3A4表達中的作用及機制1利福平誘導CYP3A4表達對MIRNA表達譜的影響利福平（10ΜM）能夠使HEPARG細胞中CYP3A4MRNA的表達上調30倍（VSDMSO對照組，P＜005），并且改變了65個MIRNA的表達（＞2倍），其中47個MIRNA的表達被下調，18個MIRNA的表達被上調。2生物信息學預測分析MIRNA的靶基因生物信息學預測出9個MIRNA能夠直接靶向CYP3A4的3UTR，進一步通過QPCR檢測其表達水平，結果顯示其中7個MIRNA的表達被利福平顯著下調MIR641、MIR6283P、MIR3425P、MIR2392、MIR4289、MIR4461、MIR7665P（＞2倍，P＜005）。這提示，MIRNA表達的下調可能與利福平誘導CYP3A4的表達有關。3MIRNA對CYP3A4報告基因熒光素酶活性的影響通過熒光素酶報告基因實驗發(fā)現(xiàn)MIR6283P和MIR641能顯著降低CYP3A43UTR報告基因的熒光素酶活性（分別下調50％和48％，P＜005），而MIR7665P和MIR3425P則不影響其活性P＞005。將CYP3A4的3UTR相應的結合位點突變后，MIR641和MIR6283P對熒光素酶活性的下調作用被明顯抑制。這提示，MIR6283P和MIR641通過靶向結合CYP3A4的3UTR而發(fā)揮對CYP3A4表達的下調作用。4過表達MIR6283P和MIR641對CYP3A4的基礎和誘導表達的影響在HEPARG細胞中轉染MIR6283P、MIR641的MIMICS后，CYP3A4的MRNA表達受到明顯的下調（分別為38％和55％，P＜005），且利福平對CYP3A4的誘導效應也被明顯降低（分別為27％和35％，P＜005）。這些結果表明，MIR6283P和MIR641能夠下調CYP3A4的基礎表達和利福平的誘導表達。（三）人肝臟組織中組蛋白修飾和MIRNA表達與CYP3A4基礎表達的相關性1人肝臟樣本中CYP3A4MRNA和蛋白的表達水平CYP3A4的MRNA和蛋白表達存在顯著的個體差異，MRNA的表達水平（相對于GAPDH基因MRNA表達）為006～259（中位數(shù)072），最大差異43倍蛋白的表達水平（相對于GAPDH蛋白表達）為010～233中位數(shù)049，最大差異23倍而CYP3A4基因MRNA和蛋白表達水平的相關系數(shù)為R016，相關性無統(tǒng)計學意義P＞005，N18。2肝臟中H3K4ME3、H3K27ME3和H3AC水平與CYP3A4MRNA表達的相關性CYP3A4基因啟動子區(qū)H3K4ME3、H3K27ME3和H3AC水平在10例肝臟組織樣本中也存在顯著的個體差異。相關性分析結果表明，CYP3A4的MRNA表達與近端PXR結合區(qū)域263～108BPH3K4ME3水平呈正相關R0574，P＜005，N10，而與遠端（8015～7793BP）H3K4ME3水平有正相關趨勢R0597，P0068，N10遠端PXR結合區(qū)域8015～7793BP的H3K27ME3水平與CYP3A4的MRNA表達負相關R0638，P＜005N10H3AC水平與CYP3A4的MRNA表達的相關性無統(tǒng)計學意義P＞005，N10。該結果表明，H3K4ME3和H3K27ME3修飾與CYP3A4的轉錄水平有關。3肝臟中MIR641和MIR6283P的表達與CYP3A4表達的相關性MIR641和MIR6283P在肝臟組織中的表達與CYP3A4表達均有相關性。其中，MIR641的表達與CYP3A4的蛋白表達負相關（R0525，P＜005，N18）而MIR6283P的表達與CYP3A4的MRNA表達負相關（R0502，P＜005，N10）。該結果表明，MIR641和MIR6283P與CYP3A4的轉錄后調控有關。結論1利福平誘導CYP3A4的表達與其基因啟動子區(qū)的組蛋白修飾狀態(tài)有關，通過激活核受體PXR并進一步募集輔激活因子NCOA6和P300而調控CYP3A4基因啟動子區(qū)的組蛋白修飾水平，從而誘導CYP3A4的表達。2利福平通過抑制HEPARG細胞中MIR6283P和MIR641的表達而上調CYP3A4表達。3人肝臟中CYP3A4的MRNA表達水平與其基因啟動子區(qū)的H3K4ME3和H3K27ME3修飾水平顯著相關。MIR641和MIR6283P在肝臟中的表達水平與CYP3A4的表達負相關。

簡介：分類號分類號R7352R7352密級密級不保密不保密UDCUDC610610學校代碼學校代碼1106511065博士專業(yè)學位論文胃癌相關分子遺傳學特征及治療的研究胃癌相關分子遺傳學特征及治療的研究高峰玉指導教師宣世英教授學位類別臨床醫(yī)學博士專業(yè)領域內科學（消化系?。┐疝q日期2015年6月5日答辯委員會主席陸倫根THERESEARCHOFGASTRICCANCERMOLECULARGEICSACTERISTICSTHERAPEUTICABSTRACTBACKGROUNDOBJECTIVESGASTRICCANCERISONEOFTHEMOSTFREQUENTDIGESTIVEMALIGNANTTUMINTHEWLDWHICHCOULDTHREATENHUMANSHEALTHITSINCIDENCEMTALITYHAVEBEENAMONGTHEHIGHESTINTHEWLDMALIGNANTTUMOFCOURSEGASTRICCANCERISSTILLONEOFTHEMAJTHREATSTOHUMANHEALTHBECAUSEITISLOWINEARLYDIAGNOSISTHEBESTTREATMENTOPPTUNITYHASBEENDELAYEDSODETECTINGSOMEGENESTOIMPROVETHEEARLYDIAGNOSISRATEOFGASTRICCANCERTAKINGACTIVETREATMENTTOREDUCETHEINCIDENCEOFGASTRICCANCERISPARTICULARLYIMPTANTMICRNASAREACLASSOFHIGHLYCONSERVEDENDOGENOUSNONCODINGSMALLRNAGENESTHELENGTHOFWHICHISABOUT22NUCLEOTIDESITPLAYSANIMPTANTROLEINTHEPROGRESSOFGASTRICCANCERTHROUGHREGULATINGONCOGENESTUMSUPPRESSGENESACTINGONTHETARGETGENESASSOCIATEDWITHAPOPTOSISPROLIFERATIONHELICOBACTERPYLIINFECTIONISTHEMOSTIMPTANTPATHOGENICFACTINTHEDEVELOPMENTOFGASTRICCANCERWHICHHASBEENCONFIRMEDBYCLINICALTRIALINVESTIGATIONOFEPIDEMIOLOGYTHEREFEERADICATIONOFHELICOBACTERPYLIISTHEKEYTOREDUCETHEINCIDENCEOFGASTRICCANCEROUREXPERIMENTISTOEXPLETHEEXPRESSIONROLEOFMIR132INGASTRICCANCEROBSERVETHEEFFECTOFCLOSTRIDIUMBUTYRICUMINHELICOBACTERPYLITHERAPYMETHODSINTHEPRESENTSTUDYTHEEXPRESSIONLEVELSOFMIR132WEREANALYZEDINGASTRICCANCERSAMPLESBYQUANTITATIVEREALTIMEREVERSETRANASEPOLYMERASECHAINREACTIONBESIDESCELLVIABILITYPROLIFERATIONINVASIONABILITIESWEREDETERMINEDINTWOGASTRICCANCERCELLLINES（NCIN87、MGC803）TRANSFECTEDWITHMIR132MIMICSANTISENSEOLIGOSITSTARGETGENEWASIDENTIFIEDATTHESAMETIMEINTHISSTUDYWEALSOOBSERVETHEEFFECTOFHELICOBACTERPYLIERADICATIONTHERAPYINWHICHWECOMBINEDCLOSTRIDIUMBUTYRICUMWITHSTARDTRIPLETHERAPYRESULTS1MIR132EXPRESSIONLEVELSWASSIGNIFICANTLYINCREASEDINGASTRICCANCERTISSUESTHANINTHEIRMATCHEDADJACENTNONCANCEROUSTISSUES2MIR132MAYPROMOTEGASTRICCANCERCELLPROLIFERATIONINVASION3ATTHEMOLECULARLEVELOURDATADEMONSTRATEDTHATMIR132COULDINHIBITPROTEINLEVELSOFRETINOBLASTOMA1RB1THROUGHTARGETINGITS3’UNTRANSLATEDREGIONMIR132DIRECTLYTARGETSTHERB1INGASTRICCANCERCELLS4RB1OVEREXPRESSIONBLOCKEDTHEPROLIFERATIVEROLESOFMIR1325CLOSTRIDIUMBUTYRICUMCOMBINEDEDWITHSTARDTRIPLETHERAPYCANIMPROVETHEERADICATIONRATEREDUCETHEINCIDENCEOFADVERSEREACTIONSCONCLUSIONS1MIR132MIGHTBEAPOTENTIALNOVELDIAGNOSTICTHERAPEUTICTARGETOFGASTRICCANCER2CLOSTRIDIUMBUTYRICUMWASHELPFULTOIMPROVETHEERADICATIONRATEOFHELICOBACTERPYLITHERAPYMAYREDUCETHEINCIDENCEOFGASTRICCANCERPOSTGRADUATESTUDENTFENGYUGAOINTERNALMEDICINEDIRECTEDBYPROFSHIYINGXUANKEYWDSGASTRICCANCERMICRNAMIR132；HELICOBACTERPYLICLOSTRIDIUMBUTYRICUM

簡介：博士學位論文學校代碼10023學號B2011002003高血壓表觀遺傳學調控機制研究及高血壓并發(fā)癥一一腦卒中的遺傳危險因素研究所院阜外心血管病醫(yī)院姓名藺亞暉指導教師惠汝太教授導師小組陳敬洲教授樊曉寒教授張偉麗教授汪一波教授學科專業(yè)生物化學與分子生物學研究方向心血管疾病的基礎與臨床研究完成日期2014年4月北京協(xié)和醫(yī)學院博士研究生畢業(yè)論文第一部分高血壓表觀遺傳學調控機制研究第一分題DNA甲基化在高血壓發(fā)生發(fā)展中的表觀調控機制研究中文摘要目的心腦血管病是人類健康的最主要威脅之一，高血壓是心腦血管病的最大危險因素，并己成為我國沉重社會負擔。因此闡明高血壓的發(fā)生、發(fā)展和轉歸規(guī)律仍是高血壓防治的關鍵。研究表明，高血壓是一種遺傳和環(huán)境因素相互作用的復雜疾病。候選基因策略和全基因組關聯(lián)研究獲得的所有易感位點均未顯示出與高血壓的較強關聯(lián)性，高血壓的病因問題仍然沒有確定解釋。近年來，高血壓表觀遺傳學研究已經(jīng)找到一些線索，可能在環(huán)境因素與核基因組間起到溝通橋梁作用，在沒有發(fā)生基因組變異的情況下影響基因表達水平，從而影響疾病的易感性。DNA甲基化是4個表觀遺傳調控的重要方式之一。但是在高血壓領域，DNA甲基化的研究還有很多問題亟待解答，關于人類高血壓全基因組的甲基化研究還鮮有報道。本論文的第一分題從全基因組水平在極端高血壓和完美對照組之間，高血壓前期未轉化和轉化組之間比較了外周血DNA甲基化譜的差異，并從兩者的交集中找到了兩個可能與高血壓發(fā)病機制相關的DNA甲基化差異位點，并做了初步功能研究。同時，選取與中國人群高血壓相關的GWAS陽性位點，初步探索了DNA甲基化修飾作用對表型的影響。方法選取來自于山東省日照社區(qū)的44例完美對照，44例極端高血壓患者，44例前期高血壓樣本，采用ILLUMINA450KBEADCHIP甲基化芯片檢測所有個體的外周血DNA甲基化狀態(tài)。采用焦磷酸測序技術重復第一人群芯片結果，隨后在擴大的70例完美對照和133例高血壓病例中驗證陽性的CPG甲基化位點。經(jīng)兩階段的篩選找出與高血壓相關的OVGPL基因。ELISA檢測高血壓與對照組間的血漿OVGPL蛋白水平。實時熒光定量PCR、WESTERNBLOT和免疫熒光實驗用于檢測OVGPL在內皮細胞的表達。進一步用PULLDOWN實驗捕獲與OVGPL相互作用的蛋白，并用慢病毒轉染HUVEC和THPL細胞，高表達OVGPL，檢測高血壓相關分子的MRNA水平變化。另一方面，用SNPSHOT法對第一階段的高血壓和對照人群分析RSL842896和RS7136259兩個位點的基因型，結合DNA甲基化數(shù)據(jù)，分析表觀遺傳、遺傳變異和表型的關系。結果在全基因組DNA甲基化篩選階段共有14個甲基化差異位點在完美對照和極端高血壓、高血壓前期未轉化和轉化兩個病例對照中均有顯著差異，并且甲基化升高或降低的趨勢相同。在焦磷酸測序驗證后，分別位于OVGPL和CPO基因啟動子區(qū)的C920823859和C917600943位點的甲基化水平在高血壓病例中均顯著降低，

簡介：博士學位論文論文題目成人混合表型急性白血病的臨床和分子遺傳學研究研究生姓名顏靈芝指導教師姓名吳德沛專業(yè)名稱內科（血液?。W研究方向白血病基礎與臨床論文提交日期2015年3月

簡介：FFLLLLLLLLLLRLLLLLLLLPIPIIIIIIIIIIIIIRLLLLLLLPIIY3238923分類號R7116密級公開⑧單位代碼10422學號201413886∥戶囊力署碩士學位論文THESISFORMASTERDEGREE專業(yè)學位論文題目平衡易位攜帶者行胚胎植入前遺傳學診斷的胚胎染色體異常類型分析及妊娠結局分析ABNORMALCHROMOSOMEANDPREGNANCYOUTCOMEANALYSISOFEMBRYOINRECIPROCALCARRIERSFOLLOWINGPREIMPLANTATIONGENETICDIAGNOSIS作者姓名黃才苡培養(yǎng)單位匡坐喧專業(yè)名稱塑左整堂指導教師呈壘蕉合作導師2017年5月17日原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名盔互敬日關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解山東大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權山東大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定論文作者簽名勃墊∑導師簽名壹耋軸期迦121￡1I、

簡介：分類號號R34學校代碼學校代碼10062密級級學號號2012602011碩士學位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目論文題目北方北方漢族漢族人群人群中發(fā)作性運動誘發(fā)性運動障礙發(fā)作性運動誘發(fā)性運動障礙的臨床及分子遺傳學床及分子遺傳學研究研究TITLECLINICALMOLECULARGEICSTUDYOFPAROXYSMALKINESIGENICDYSKINESIAINNTHERNHANCHINESE一級學科一級學科基礎醫(yī)學基礎醫(yī)學二級學科二級學科生物化學與分子生物學生物化學與分子生物學論文作者論文作者方玉蓮方玉蓮指導教師指導教師馬世坤馬世坤教授教授天津醫(yī)科大學研究生院二〇一五二〇一五年五月學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下獨立進行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學位論文作者簽名日期年月日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權將學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學校向國家有關部門或機構送交論文，并編入有關數(shù)據(jù)庫。保密，在年解密后適用本授權書。本論文屬于不保密。（請在相對應的方框內打“√”）學位論文作者簽名日期年月日導師簽名日期年月日

簡介：第三軍醫(yī)大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明秉承學校嚴謹?shù)男ｏL和科研作風，本人申明所呈交的論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構的學位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作者簽名量垡三日期生月2旦第三軍醫(yī)大學研究生學位論文版權使用授權書本人完全了解第三軍醫(yī)大學有關保護知識產(chǎn)權的規(guī)定，即研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權單位屬第三軍醫(yī)大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為第三軍醫(yī)大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內容保密內容除外，可以采用影印、縮印或其他手段論文作者簽名垂墮I蘭指導教師簽名341資料和方法68342結果6836討論8237小結87第四章一個BCD大家系患者致病基因篩查和臨床表型分析8841引言8842資料和方法8843結果8944討論9545小結99全文結論100參考文獻101文獻綜述C刪陽基因突變與結晶樣視網(wǎng)膜變性臨床表型的研究進展109參考文獻114在讀期間發(fā)表文章119致謝120

簡介：生璺墮堂型堂墮室塑塑墮蘭墮墼受叢型墾墮博士研究生學位論文一蘭蘭查博士學位論文學校代碼10023學號B2012004008WNT／PCP信號通路與先天性小耳畸形發(fā)病表觀遺傳學機制的初步研究THEPRELIMINARYRESEARCHOILTHERELATIONSHIPBETWEENWNT／PCPSIGNALPATHWAYANDTHEEPIGENETICETIOLOGYOFCONGENITALMICROTIA所院姓名指導教師導師小組學科專業(yè)研究方向完成日期中國醫(yī)學科學院整形外科醫(yī)院畢曄蔣海越教授楊慶華教授潘博副教授外科學組織移植與器官再造2015年4月10日北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院博士研究生學位論文中文摘要目的從表觀遺傳學角度出發(fā)，對先天性小耳畸形殘耳軟骨組織及正常耳軟骨組織的全基因組DNA甲基化水平進行對照研究，通過甲基化DEP和ROI深度分析，從中挖掘篩選出與生長發(fā)育密切相關的WNT信號通路，驗證其相關甲基化差異基因WNTL，WNTL1基因的表達差異，通過對WNT／PCP通路的干預了解其在耳廓軟骨細胞增殖與凋亡中的作用，并結合甲基化水平的異常探討其在先天性小耳畸形發(fā)病中可能的作用機制。方法1通過MEDIPCHIP技術獲得先天性小耳畸形全基因甲基化譜并對其進行深度GO和PATHWAY分析，篩選可能與本病相關的信號通路和相關分子。2對先天性小耳畸形患者和非耳畸形患者軟骨組織，及同一患者殘耳及正常軟骨組織中的WNTL和WNTL1基因表達進行REALTIMEPCR檢測，驗證基因表達狀態(tài)是否與甲基化芯片中WNT信號通路富集的結果相一致。3CCK8法檢測同一先天性小耳畸形患者來源的正常軟骨和殘耳軟骨細胞的增殖活性，ANNEXINV法檢測正常軟骨細胞及殘耳軟骨細胞的凋亡情況。4分別在同一先天性小耳畸形患者來源的正常軟骨和殘耳軟骨細胞組中加入JNKINHIBITORII、同時加入JNKINHIBITORII和5氮雜胞嘧啶苷，REALTIMEPCR檢測不同組間WNTL和WNTL1基因表達的變化，WESTEMBLOT法檢測WNTL和WNTLL蛋白含量的變化，確定WNT／PCP信號通路被充分阻斷后，CCK8法檢測各組正常軟骨和殘耳軟骨細胞的增殖活性，ANNEXINV法檢測各組正常軟骨細胞及殘耳軟骨細胞的凋亡情況。結果1對先天性小耳畸形DNA甲基化譜的深度分析，GO分析和PATHWAY篩選分析發(fā)現(xiàn)，WNT信號通路是較為富集并且可能與本病發(fā)生密切相關的信號通路。其相關基因WNTL及WNTLL在正常軟骨的啟動子區(qū)和CPG島呈現(xiàn)高甲基化趨勢，而殘耳軟骨中甲基化水平較低。結合GO和PATHWAY的結果，構建了存在甲基化差異表達的WNT信號通路NETWORK。并針對該通路中存在甲基化改變的WNTL和WNTL1基因及其所在的具體信號通路進行進一步研究。2對先天性小耳畸形患者和非耳畸形患者軟骨組織中WNTL及WNTLL的基因表達均未見明顯差異。而對同一先天性小耳畸形患者來源的殘耳軟骨組織中的WNTL1基因表達明顯高于正常軟骨組織。1

簡介：心原性猝死（SUDDENCARDIACDEATHSCD）是人類健康頭號殺手心血管疾病導致的突發(fā)性自然死亡。在諸多SCD高發(fā)的心血管疾病中，具有極高風險尤其對年輕人造成危害的遺傳性心律失常綜合征日漸受到關注。主要由各種離子通道蛋白及其調控蛋白編碼基因突變導致的遺傳性心律失常綜合征通常不伴心臟結構功能異常，而呈現(xiàn)以各種特征性的心電圖形態(tài)，在特殊環(huán)境狀態(tài)下誘發(fā)嚴重的心電生理活動紊亂促使惡性心律失常發(fā)生，從而導致SCD。早期復極（EARLYREPOLARIZATIONER）是部分心肌提前復極形成心電圖上J點抬高和非心肌缺血性ST段抬高的特殊波形，在人群中廣泛存在，且在半個世紀以來被認為是一種正常的心電圖表現(xiàn)。隨著流行病學調查研究的大力開展，部分有ER表現(xiàn)的人群被發(fā)現(xiàn)存在SCD風險及家族聚集現(xiàn)象。如何辨別具有SCD風險的ER表現(xiàn)成為臨床醫(yī)生所面臨的棘手問題。在最新的遺傳性心律失常綜合征診治共識中，這類具有惡性心律失常病史或SCD家族史且心臟結構正常，≧2個連續(xù)下壁和或側壁導聯(lián)出現(xiàn)J點抬高≧1MM心電圖表現(xiàn)的一組臨床癥候群被定義為早期復極綜合征（EARLREPOLARIZATIONSYNDROMEERS）。近年來分子遺傳學理論和技術的飛速發(fā)展極大地推動了人們對遺傳性心律失常綜合征中各類疾病的認知與探索。編碼ATP敏感性鉀離子通道KIR61的KCNJ8和ABCC9基因，編碼L型鈣離子通道的CACNA1C、CACNB2B和CACNA2D1基因，以及編碼鈉離子通道的SCN5A基因突變相繼在ERS中報道。突變導致的外向鉀離子通道功能增強和內向鈣離子或鈉離子通道功能減弱被認為是ERS的病理性致病基礎。ER不同于長QT綜合征和BRUGADA綜合征等其它具有顯著遺傳學特性的遺傳性心律失常綜合征類型，ERS致病基因突變多見于散發(fā)病例，具有家族遺傳性的基因突變罕見。此外，國人ERS的遺傳學研究報道罕見，由此可見國人相關致病基因突變的研究仍存在很大空間，對有明顯癥狀或猝死家族史的家系進行級聯(lián)式遺傳學篩查才能高效地篩查致病基因突變，并探索ERS分子遺傳學發(fā)病機制，從而尋找更加有效的ERS個體化治療方案。第一部分心原性猝死大家系臨床分析及遺傳學檢測目的本研究通過對所收集的SCD大家系先證者及存活成員進行全面的臨床評估，并對先證者尸檢報告仔細分析以及家系成員SCD候選基因篩查檢測，解析該家系SCD發(fā)生機制，以異常心電圖表現(xiàn)為線索尋找潛在的致死性原因及致病基因突變，為該家系SCD高危成員提供診療建議。方法1臨床資料收集嚴格遵循醫(yī)學倫理準則，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批獲準及入選研究對象知情同意，對我院心內科就診的江西籍SCD高?；颊呒捌溆H屬臨床資料進行采集。診斷標準參考2013年由美國心律協(xié)會（HEARTRHYTHMSOCIETYHRS）、歐洲心律學會（EUROPEANHEARTRHYTHMASSOCIATIONEHRA）和亞太心律協(xié)會（ASIAPACIFICHEARTRHYTHMSOCIETYAPHRS）共同制定的遺傳性心律失常綜合征患者診斷和治療專家共識，獲取家系成員病史，心電圖和心臟彩超等檢查信息。2尸檢資料收集在SCD死者法定代理人知情同意的情況下，獲取死者經(jīng)司法機構提供的尸檢報告及相關病理組織。3先證者心肌組織HE染色取死者心肌不同部位組織塊制作切片并HE染色，觀察心肌組織結構形態(tài)。4遺傳學檢測經(jīng)患者及其家屬知情同意后，采集外周靜脈全血5ML儲存于EDTA真空抗凝管，采用血液基因組DNA提取試劑盒抽提外周血白細胞全基因組DNA，選擇常見的遺傳性心律失常綜合征致病基因作為候選基因，包括編碼鈉離子通道的SCN5A、SCN1B、SCN3B和GPA1L基因，編碼鉀離子通道的KCNQ1、KCNH2、KCNJ8、KCNE1、KCNE2和KCND3基因，編碼鈣離子通道的CACNA1C、CACNB2B和CACNA2D1基因以及編碼通道調節(jié)蛋白的ANK2和PRKAG2基因，設計相應引物，使所測范圍涵蓋待測基因所有外顯子以及外顯子與內含子交界區(qū)序列，采用DNA直接測序法（雙脫氧鏈終止法）進行測序篩查基因變異，隨機選取本實驗室DNA庫中400例相同遺傳背景及年齡性別匹配的正常健康人群標本作為對照，以發(fā)現(xiàn)新的致病基因突變位點或單核苷酸多態(tài)性（SINGLENUCLEOTIDEPOLYMPHISMSSNPS）。5統(tǒng)計學分析所有涉及統(tǒng)計的實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS190軟件包統(tǒng)計學分析軟件進行分析。計量資料以均數(shù)±標準誤（X±S）表示，兩組間比較采用T檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（ONEWAYANOVA），P值＜005具有統(tǒng)計學意義，P值＜001具有顯著統(tǒng)計學意義。結果1本研究收集到一個原因不明夜間猝死大家系，死者為包含先證者在內的5名男性成員，先后在睡眠中發(fā)生猝死，均處青壯年時期，最小23歲，最大49歲，平均年齡34±84歲。2先證者尸檢報告提示無機械性損傷、機械性窒息致死的法醫(yī)病理學改變，也無中毒致死的依據(jù)；組織病理學檢查結果排外各主要器官器質性病變，考慮猝死可能由心原性因素所致。所取心肌組織形態(tài)結構及排列均正常，可排外心肌病等各種結構性心臟病以及可伴右室心肌病變的BRUGADA綜合征。先證者死前3年內偶發(fā)頭暈、心悸，無胸悶、胸痛及暈厥；既往心臟彩超檢查無明顯異常，24小時3導聯(lián)動態(tài)心電圖記錄II導聯(lián)和AVF導聯(lián)J點抬高≧15MM。3其他家庭成員既往史及個人史無特殊，無陽性體征，靜息心電圖、心臟彩超及平板運動試驗檢查未見明顯異常。24H動態(tài)心電圖檢查發(fā)現(xiàn)3位家庭成員有ER表現(xiàn)。其中先證者弟弟ER表現(xiàn)最為顯著，下壁II、III和AVF導聯(lián)，胸前V3V5導聯(lián)J點抬高005MV03MV，且可見J波，V2V4導聯(lián)T波高尖。先證者兒子及其弟弟女兒的動態(tài)心電圖表現(xiàn)為下壁和側壁導聯(lián)ST段抬高。4通過候選基因測序篩查發(fā)現(xiàn)該家系1個鈣離子通道Α1亞單位編碼基因CACNA1C的雜合錯義突變，由第48號外顯子上第5747號堿基A轉換為堿基G，導致第1916位谷氨酰胺變?yōu)榫彼?，即PQ1916R。該突變見于先證者及源于父系的所有一級和二級親屬，而其母親及母親的兄弟姐妹和其他與先證者無血緣關系的家庭成員均不存在此突變。此外，在家系中還篩查到已被報道的5個CACNA1C基因SNPS，分別為C2436CT（PD812D），C3786CT（PF1262F），C5361GA（PT1787T），C5609CT（PT1870M）和C5649GA（PP1883P），以及1個SCN5A基因SNPS，C3578GA（PR1193Q）。5CACNA1CQ1916R突變攜帶者中有ER表現(xiàn)和無ER表現(xiàn)成員心電圖參數(shù)比較結果顯示，有ER表現(xiàn)成員的心率校正QT間期比無ER表現(xiàn)的成員短，但均在正常范圍，QT間期離散度（QTDISPERSION，QTD）和TPTE間期離散度（TPTEDISPERSION，TPED）則更大，但兩組間各參數(shù)差異無統(tǒng)計學意義。結論1本研究從一個青壯年男性SCD高發(fā)大家系，揭示SCD可能與ERS相關。2ERS致病基因CACNA1CQ1916R新突變可能與該家系ERS致SCD相關。3CACNA1CQ1916R突變攜帶家庭成員中ER呈不完全外顯性，考慮與SCN5AR1193Q和性別相關。4ER家庭成員心電圖中有致惡性心律失常性作用的復極化跨壁離散度參數(shù)指標QTD和TPED增大，但與無ER表現(xiàn)的CACNA1C突變攜帶成員比較無統(tǒng)計學差異，樣本量有限是可能原因。5其它所發(fā)現(xiàn)的CACNA1C基因SNPS（D812D、F1262F、T1787T、T1870M和P1883P）無明顯致SCD效應。第二部分CACNA1C基因突變致心原性猝死相關ER的分子遺傳學、細胞電生理機制及藥物干預探討目的從組織和細胞水平探討CACNA1CQ1916R突變的功能變化及致SCD相關ER的分子機理，并篩選有效的治療藥物。方法1人心肌組織標本免疫組化取攜帶CACNA1C基因突變先證者左心室肌組織，通過免疫組化法對組織內由CACNA1C基因翻譯的CAV12蛋白表達及定位進行檢測，并以成年人正常左心室標本作為對照。2CACNA1CQ1916R定點突變采用經(jīng)典的定點突變技術，將CACAN1C基因第5747位堿基A突變?yōu)閴A基G，進行測序驗證并排除其它位點突變。3CACNA1C質粒瞬時轉染采用LIPOFECTAMINE2000轉染試劑盒，將攜帶野生和突變型CACNA1C，以及野生型CACNB2B和CACNA2D1基因的質粒載體按摩爾濃度111分兩組共轉染入人胚腎293細胞（HUMANEMBRYONICKIDNEY293HEK293）中用于后續(xù)實驗，用于膜片鉗細胞電生理實驗的細胞則按03比例額外轉染表達綠色熒光的PEGFPN3質粒。4實時熒光定量PCR（QUANTITATIVEREALTIMEPCRQRTPCR）采用QRTPCR引物擴增表達野生和突變型CACNA1C的HEK293細胞中CACNA1C的序列片段，檢測突變對CAV12總MRNA表達的影響。5蛋白免疫印跡（WESTERNBLOT）采用WESTERNBLOT檢測表達野生和突變型CACNA1C的HEK293細胞中，CAV12在細胞總蛋白、膜蛋白和漿蛋白各水平的表達情況。6細胞免疫熒光在共聚焦熒光顯微鏡下觀察轉染野生和突變型CACNA1C并經(jīng)CAV12特異抗體熒光染色的HEK293細胞，檢測突變對CAV12表達定位及轉運的影響。7全細胞膜片鉗細胞電生理分析及藥物篩選采用全細胞膜片鉗技術記錄表達突變型CACNA1C的HEK293細胞上L型鈣離子流變化，以及雄激素睪酮（10ΜM）對其的影響。再分別加入ER治療藥物異丙腎上腺素（10ΜM）和奎尼?。?ΜM），觀察藥物對鈣離子流的影響，繪制電流電壓（IV）曲線，電壓依賴的穩(wěn)態(tài)激活曲線STEADYSTATEACTIVATIONSSA和電壓依賴的穩(wěn)態(tài)失活曲線STEADYSTATEINACTIVATIONSSI。8統(tǒng)計學分析所有涉及統(tǒng)計的實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS190軟件包統(tǒng)計學分析軟件進行分析。計量資料以均數(shù)±標準誤（X±S）表示，兩組間比較采用T檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（ONEWAYANOVA），P值＜005具有統(tǒng)計學意義，P值＜001具有顯著統(tǒng)計學意義。結果1成功誘導CACNA1CQ1916R突變，經(jīng)測序驗證CACAN1C基因第5747位堿基A突變?yōu)閴A基G，其它位點未發(fā)生突變。2免疫組化結果顯示攜帶CACNA1C基因突變的先證者心室肌組織CAV12蛋白表達水平低于正常對照組織（P＜005），異源性表達突變CAV12的總MRNA表達水平較野生型CAV12低（P＜001），且在細胞總蛋白、模蛋白和漿蛋白各水平的表達均下降（P＜005）。3細胞免疫熒光結果顯示突變型CAV12蛋白轉運功能正常，但整體熒光強度更弱。4全細胞膜片鉗結果顯示突變組鈣電流密度較野生組顯著降低，降低有統(tǒng)計學意義（P＜005，P＜001），SSA和SSI兩組間無差異；睪酮（10ΜM）可顯著降低突變組電流密度，差異有統(tǒng)計學意義（＃P＜005）；ERS治療藥物異丙腎上腺素（10ΜM）可增加野生型鈣電流密度，對突變型鈣電流的增加無統(tǒng)計學意義，可引起野生型和突變型鈣電流的電壓依賴性SSA均發(fā)生左移；奎尼?。?ΜM）對野生型和突變型鈣電流的幅度、密度和電壓依賴性SSA均無任何影響。結論1CACNA1CQ1916R為功能喪失性突變，可使CAV12在MRNA和蛋白質水平表達量均降低，但不影響蛋白的定位及轉運，突變可能通過減少細胞膜上有效CAV12數(shù)量而降低鈣電流。2CACNA1CQ1916R突變是引起本研究家系中ER表現(xiàn)及SCD的主要原因。3睪酮加劇CACNA1CQ1916R突變鈣電流密度減小，證實男性是突變攜帶成員發(fā)生SCD和ER表現(xiàn)的重要危險因素。4異丙腎上腺素可能對有ER表現(xiàn)及SCD高危的CACNA1CQ1916R突變攜帶者有一定療效。

簡介：秀麗隱桿線蟲結構簡單，繁殖能力強，生長周期短，神經(jīng)系統(tǒng)簡單，其基因組已經(jīng)全部完成測序，是作為研究神經(jīng)系統(tǒng)功能和神經(jīng)環(huán)路良好的模式生物。本研究使用特異的啟動子標記線蟲的神經(jīng)元和膠質細胞，利用INFUSION技術結合SL2A多順反子剪接體系融合不同的熒光蛋白等生物學技術構建了一系列轉基因品系，并結合激光共聚焦成像技術確定特定啟動子驅動熒光蛋白的表達。在準確定位神經(jīng)元或膠質細胞后，利用光控蛋白、鈣指示蛋白特異表達于感興趣的細胞來研究在神經(jīng)環(huán)路中的功能。我們標記了線蟲嗅覺神經(jīng)元AWA、AWB、AWC、ASH、ADL和兩種膠質細胞AMPHIDSHEATHGLIA和CEPHALICSHEATHGLIA。通過行為學發(fā)現(xiàn)線蟲對于不同濃度的同一種氣味分子，如異戊醇，有從喜好到排斥的偏好轉換。以在體膜片鉗的方法，發(fā)現(xiàn)AWA、AWB、AWC三種不同的嗅覺神經(jīng)元對不同濃度IAA氣味分子均具有不同的響應特征。通過電生理和鈣成像實驗發(fā)現(xiàn)多模感受神經(jīng)元ASH只對高濃度異戊醇有響應，并通過TRPV陽離子通道OSM9介導。結果表明多種感覺神經(jīng)元通過多種響應模式介導了線蟲對氣味分子的濃度依賴性偏好行為。此外，為了研究線蟲膠質細胞的發(fā)育機制和其對神經(jīng)功能的影響，我們通過EMS正向遺傳學篩選并得到了一些影響線蟲CEPSH膠質細胞發(fā)育的關鍵分子。其中一個基因為VAB3。該基因突變定位在PAIREDDOMAIN上，通過在外顯子上的堿基突變成終止子密碼子而影響蛋白質的正常翻譯，使CEPSH膠質細胞發(fā)育受損，影響細胞定位，樹突遷移，軸突的導向。

簡介：電子科技大學UNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCETECHNOLOGYOFCHINA博士學位論文DOCTALDISSERTATION（電子科技大學圖標）論文題目多巴胺系統(tǒng)基因對腦網(wǎng)絡調控機制的多巴胺系統(tǒng)基因對腦網(wǎng)絡調控機制的影像遺傳學影像遺傳學研究研究學科專業(yè)生物醫(yī)學工程生物醫(yī)學工程學號201211090123作者姓名王超指導教師蔣田仔蔣田仔教授教授3IMAGINGGEICRESEARCHONREGULATIONMECHANISMOFDOPAMINESYSTEMRELATEDGENESINBRAINWKSADOCTALDISSERTATIONSUBMITTEDTOUNIVERSITYOFELECTRONICSCIENCETECHNOLOGYOFCHINAMAJBIOMEDICALENGINEERINGAUTHWANGCHAOADVISPROFESSJIANGTIANZISCHOOLSCHOOLOFLIFESCIENCETECHNOLOGY

簡介：分類號號R6557學校代碼學校代碼10062密級級學號號2012602739碩士學位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目論文題目THY0517細胞系的表面抗原表達、超微結細胞系的表面抗原表達、超微結構及遺傳學特性構及遺傳學特性TITLETHESURFACEANTIGENEXPRESSIONULTRASTRUCTUREGEICACTERISTICSOFCELLLINETHY0517一級學科臨床醫(yī)學一級學科臨床醫(yī)學二級學科外科學二級學科外科學胸心外科胸心外科論文作者賀論文作者賀斌指導教師張指導教師張鵬教授教授天津醫(yī)科大學研究生院二〇一五年二〇一五年五月學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下獨立進行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學位論文作者簽名日期年月日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權將學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學校向國家有關部門或機構送交論文，并編入有關數(shù)據(jù)庫。保密，在年解密后適用本授權書。本論文屬于不保密√。（請在相對應的方框內打“√”）學位論文作者簽名日期年月日導師簽名日期年月日