簡(jiǎn)介：極低頻電磁場(chǎng)（EXTREMELYLOWFREQUENCYELECTROMAGICFIELDS，ELFEMF）一般指頻率為0300HZ的交變電磁場(chǎng)，其中頻率為5060HZ的磁場(chǎng)又稱為工頻磁場(chǎng)（MAGICFIELDS，MF），可由各種家用電器以及高壓輸變電線路產(chǎn)生，廣泛存在于職業(yè)環(huán)境及日常生活環(huán)境中。自1979年，LEEPER和WERTHEIMER首先報(bào)道MF暴露與兒童白血病發(fā)病率存在正相關(guān)，ELFEMF對(duì)人體的潛在危害日益受到人們的關(guān)注。此后，又有諸多研究報(bào)道ELFEMF暴露與腫瘤，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，不孕癥等疾病具有相關(guān)性。然而，到目前為止，ELFEMF產(chǎn)生這些生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)制尚不明確。線粒體作為細(xì)胞的“能量工廠”，不僅能夠通過呼吸作用產(chǎn)生ROS，還能在維持離子濃度平衡中起著重要的作用。因此，線粒體極易成為外界刺激因素的一個(gè)作用位點(diǎn)。本課題組在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，工頻磁場(chǎng)暴露可以引起線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換（MITOCHONDRIALPERMEABILITYTRANSITION，MPT）并伴隨細(xì)胞色素CCYTC的釋放，但并不引起細(xì)胞發(fā)生凋亡。線粒體具有雙層膜結(jié)構(gòu)，正常生理情況下，線粒體內(nèi)膜對(duì)離子高度不通透。然而在某些因素的作用下，可致線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔MITOCHONDRIALPERMEABILITYTRANSITIONPE，MPTP開啟，從而允許分子量小于1500DA的分子自由出入線粒體內(nèi)外膜，引起線粒體基質(zhì)腫脹及其結(jié)構(gòu)改變，并最終產(chǎn)生一系列生物學(xué)效應(yīng)。有研究表明，細(xì)胞內(nèi)有多種信號(hào)分子可介導(dǎo)MPTP的開啟，從而誘導(dǎo)發(fā)生MPT，如BCL2蛋白家族，GSK3Β蛋白，ROS等，而誘導(dǎo)產(chǎn)生ROS是工頻磁場(chǎng)比較確定的效應(yīng)。因此，本學(xué)位論文首先探索了ROS等信號(hào)分子在工頻磁場(chǎng)暴露誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生MPT過程中的可能作用，以期揭示工頻磁場(chǎng)誘導(dǎo)細(xì)胞MPT的分子機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，工頻磁場(chǎng)暴露并不改變線粒體中BCL2，BAX蛋白的含量，但可以顯著增高細(xì)胞內(nèi)ROS水平并改變GSK3Β磷酸化水平程度用ROS清除劑NAC及GSK3Β抑制劑分別預(yù)處理細(xì)胞均可以抑制工頻磁場(chǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的MPT并且NAC預(yù)處理細(xì)胞能夠顯著抑制工頻磁場(chǎng)暴露后GSK3Β磷酸化的改變。以上結(jié)果提示，工頻磁場(chǎng)暴露引起細(xì)胞發(fā)生MPT由ROSGSK3Β信號(hào)通路介導(dǎo)。另外，前期研究發(fā)現(xiàn)工頻磁場(chǎng)暴露雖然誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生了MPT及CYTC的釋放，但并沒有引起細(xì)胞凋亡的發(fā)生，因此，推測(cè)工頻磁場(chǎng)暴露可能會(huì)改變細(xì)胞的狀態(tài)，從而影響細(xì)胞對(duì)外界刺激因素的響應(yīng)。為此，本學(xué)位論文隨后探索了工頻磁場(chǎng)暴露與凋亡誘導(dǎo)劑STAUROSPINESTS可能的聯(lián)合作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，將細(xì)胞預(yù)暴露于工頻磁場(chǎng)可以顯著抑制低劑量STS誘導(dǎo)的細(xì)胞早期凋亡，并呈現(xiàn)出暴露時(shí)間窗效應(yīng)和功率窗效應(yīng)。MPT抑制劑CYCLOSPINEACSA預(yù)處理細(xì)胞可以抑制工頻磁場(chǎng)的抗凋亡作用，提示MPT在這一過程中起著重要的作用。同時(shí)，工頻磁場(chǎng)暴露可促進(jìn)線粒體ROS通過MPTP釋放到胞漿中并激活A(yù)KT信號(hào)通路。而且，PI3KAKT抑制劑能有效抑制MF的抗凋亡作用，提示AKT也參與了工頻磁場(chǎng)的抗凋亡過程。以上結(jié)果表明，工頻磁場(chǎng)暴露可誘導(dǎo)細(xì)胞線粒體內(nèi)ROS經(jīng)MPTP釋放到胞漿并激活A(yù)KT信號(hào)通路，從而影響細(xì)胞對(duì)外界的刺激因素的響應(yīng)。綜上所述，本學(xué)位論文分別探討了工頻磁場(chǎng)暴露引起MPT的分子機(jī)制及其生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果顯示，細(xì)胞內(nèi)ROSGSK3Β信號(hào)通路介導(dǎo)工頻磁場(chǎng)誘導(dǎo)的MPT發(fā)生過程線粒體內(nèi)ROS可通過MPTP釋放到胞漿中并激活A(yù)KT信號(hào)通路，從而拮抗STS誘導(dǎo)的細(xì)胞早期凋亡。

簡(jiǎn)介：乙酰基轉(zhuǎn)移酶抑制劑C646對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及作用機(jī)制研究⑧論文作者簽名≥垂檻指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人1匿名評(píng)閱評(píng)閱人2匿名遷闥評(píng)閱人3匿名遷闥評(píng)閱人4評(píng)閱人5答辯委員會(huì)主席睦蟹3熬拯3逝洹太堂醫(yī)堂睦委員1堂童∑熬拯∑逝江笪醫(yī)堂壁堂睦委員2奎國(guó)熊3圭堡醫(yī)短3煎趟垣菹太堂瞪屬醫(yī)瞳委員3睦鲞睦圭堡醫(yī)垣逝洹太堂醫(yī)堂瞳隨屬筻二醫(yī)院委員4廛塑齷3數(shù)援∑逝塑太堂醫(yī)堂醫(yī)隨厘筮二醫(yī)睦委員5答辯日期2016年5月30日本研究受浙江省省部共建項(xiàng)目計(jì)劃ETVL在胃腸道間質(zhì)瘤KITLOW干細(xì)胞致瘤分化中的調(diào)控機(jī)制研究項(xiàng)目編號(hào)WKJ20112002和P300／CBP在胃腸道間質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及調(diào)控機(jī)制項(xiàng)目編號(hào)WKJZJ一1614資助。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)學(xué)位論文HIPPO及WNT信號(hào)通路在大腸癌發(fā)生中的作用及沉默信號(hào)通路在大腸癌發(fā)生中的作用及沉默YAPSURVIVIN基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響ROLEOFHIPPOWNTSIGNALINGPATHWAYSINCOLECTALCARCINOGENESISIMPACTOFSIRNAMEDIATEDSILENCINGYAPSURVIVINGENESONBIOLOGICALBEHAVIOFCOLECTALCANCERCELLS曹立宇指導(dǎo)老師姓名許建明教授安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)（消化系?。┨峤徽撐娜掌?01603論文答辯日期201605學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)答辯委員會(huì)主席教授評(píng)閱人教授等2016年03月安徽醫(yī)科大學(xué)博士論文學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，有權(quán)允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。愿意將本人的學(xué)位論文提交中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫、中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡(luò)及其他數(shù)字媒體形式公開出版，并同意編入CNKICNKI中國(guó)知識(shí)資源總庫，在中國(guó)博碩士學(xué)位論文評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期201653日期201653

簡(jiǎn)介：博士學(xué)位論文（專業(yè)學(xué)位）S100A8基因在HL60細(xì)胞中的生物學(xué)作用及耐藥機(jī)制研究S100A8GENEOVEREXPRESSEDINHL60CELLLINEPROMOTINGTHECELL’SINVASIONMEDIATINGTHEIRRESISTANCETOETOPOSIDE研究生姓名楊小燕指導(dǎo)教師姓名胡紹燕專業(yè)名稱兒科學(xué)研究方向血液腫瘤所在院部?jī)嚎婆R床醫(yī)學(xué)院S100A8基因在HL60細(xì)胞中的生物學(xué)作用及耐藥機(jī)制研究中文摘要

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)柮芗?jí)公開專業(yè)博士學(xué)位論文黏蛋白1激活A(yù)KT和ERK對(duì)非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)特性影響作者姓名姚孟英導(dǎo)師姓名邢麗華教授專業(yè)學(xué)位名稱內(nèi)科學(xué)（呼吸專業(yè)）培養(yǎng)院系鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院完成時(shí)間2015年03月01日原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日

簡(jiǎn)介：背景下腰痛是一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題，它是導(dǎo)致45歲以下人群勞動(dòng)能力受限的最主要原因。流行病學(xué)調(diào)查顯示，全世界約70％的成年人口在一生中至少經(jīng)歷過一次下腰痛。在美國(guó)下腰痛每年造成的經(jīng)濟(jì)損失約900億美元，中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)年鑒顯示2008年我國(guó)下腰痛位于所有慢性病患病率的第六位，可見在我國(guó)下腰痛造成的社會(huì)生產(chǎn)力損失同樣十分巨大。雖然目前下腰痛的確切病因尚未完全闡明，但椎間盤退變無疑是一個(gè)重要的誘因。椎間盤內(nèi)的髓核細(xì)胞通過分泌細(xì)胞外基質(zhì)維持椎間盤功能，其數(shù)量減少和隨之帶來的細(xì)胞外基質(zhì)代謝失衡是椎間盤退變重要的病理生理變化。近年來，細(xì)胞移植治療椎間盤退變方興未艾，間充質(zhì)干細(xì)胞具有向髓核樣表型分化的能力，在椎間盤退變的生物學(xué)修復(fù)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，由于椎間盤為乏血供組織，其能量代謝主要依靠糖酵解，導(dǎo)致其內(nèi)部產(chǎn)生酸性、高滲、低氧和炎癥因子蓄積的惡劣微環(huán)境，在椎間盤退變過程中上述微環(huán)境進(jìn)一步惡化，使得間充質(zhì)干細(xì)胞的代謝活力和生物學(xué)修復(fù)能力受到損害，而上述微環(huán)境因素中又以酸性微環(huán)境對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞損害作用最為明顯。有研究表明，人類椎間盤內(nèi)的PH值隨椎間盤退變程度的加重而下降。人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞具有獲取方便、供體部位損傷小、來源豐富和增殖能力強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，是一種理想的椎間盤組織工程種子細(xì)胞。人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的供體年齡可能是細(xì)胞活力的一個(gè)重要影響因素，退變椎間盤不同程度的酸性微環(huán)境對(duì)人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)活力的損害程度也很可能存在差異。然而，不同年齡來源的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)退變椎間盤不同程度酸性微環(huán)境的耐受情況目前尚不清楚，闡明退變椎間盤不同程度酸性微環(huán)境對(duì)不同年齡組供體來源的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞存活、增殖和細(xì)胞外基質(zhì)代謝等生物學(xué)行為的影響，將為椎間盤生物學(xué)修復(fù)研究的種子細(xì)胞選擇提供重要參考。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)退變椎間盤存在一定的修復(fù)作用，但僅僅通過細(xì)胞移植、生長(zhǎng)因子及抗炎藥物注射等手段很難確保脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞植入后在退變椎間盤惡劣的微環(huán)境中長(zhǎng)期保持生物學(xué)活力并發(fā)揮修復(fù)作用。近年來有學(xué)者在椎間盤內(nèi)發(fā)現(xiàn)了間充質(zhì)干細(xì)胞存在的證據(jù)，進(jìn)一步的研究證實(shí)在人類退變髓核和終板中存在間充質(zhì)干細(xì)胞，在人類纖維環(huán)中存在具有多向分化潛能的祖細(xì)胞同時(shí)，動(dòng)物的體內(nèi)研究也證實(shí)髓核中存在間充質(zhì)干細(xì)胞，并且發(fā)現(xiàn)這些內(nèi)源性間充質(zhì)干細(xì)胞在椎間盤內(nèi)存在一定的遷移和修復(fù)行為，提示這種新型組織特異性間充質(zhì)干細(xì)胞具有潛在的研究和應(yīng)用價(jià)值。目前，髓核間充質(zhì)干細(xì)胞的存在已經(jīng)被多項(xiàng)研究所證實(shí)。本課題組在前期工作中成功分離培養(yǎng)出大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞，它具有間充質(zhì)干細(xì)胞的一般特性，能夠?qū)崿F(xiàn)成軟骨、成脂和成骨分化，完全符合國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)關(guān)于間充質(zhì)干細(xì)胞的認(rèn)定標(biāo)準(zhǔn)。然而，作為一種新型組織特異性間充質(zhì)干細(xì)胞，髓核間充質(zhì)干細(xì)胞是否能夠成為一種更加合適的椎間盤組織工程種子細(xì)胞這個(gè)問題尚不得而知。比較退變椎間盤酸性微環(huán)境對(duì)髓核間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的存活、增殖和細(xì)胞外基質(zhì)代謝等重要生物學(xué)行為的影響，將有助于我們更好的理解這兩種間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性，并對(duì)其在椎間盤生物學(xué)修復(fù)領(lǐng)域的應(yīng)用前景做出正確的評(píng)價(jià)，從而為下一步開發(fā)具有潛在應(yīng)用價(jià)值的椎間盤干細(xì)胞修復(fù)技術(shù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究分為兩個(gè)部分第一部分退變椎間盤酸性微環(huán)境對(duì)人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。目的研究退變椎間盤酸性微環(huán)境對(duì)不同年齡組供體來源的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的存活、增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)代謝等生物學(xué)行為的影響，探索適合進(jìn)行脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植干預(yù)的椎間盤微環(huán)境PH閾值，明確供體年齡對(duì)人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞酸性微環(huán)境適應(yīng)能力的影響。方法人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞根據(jù)供體來源分為未成年組（812歲，N6）和成年組（3342歲，N6）。設(shè)立PH值74的培養(yǎng)條件作為標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件，使用PH值為71，68和65的培養(yǎng)條件分別模擬正常椎間盤、輕度退變椎間盤和嚴(yán)重退變椎間盤的酸性微環(huán)境特征。采用異硫氰酸熒光素橋連膜聯(lián)蛋白Ⅴ碘化丙啶染色FLUESCEINISOTHIOCYANATEANNEXINⅤPROPIDIUMIODIDESTAININGFITCAⅤPI測(cè)定細(xì)胞存活。采用MTT34，5DIMETHYLTHIAZOL2YL2，5DIPHENYLTETRAZOLIUMBROE，34，5二甲基噻唑22，5二苯基四氮唑澳鹽）法測(cè)定細(xì)胞增殖。使用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)REALTIMEPCR檢測(cè)聚集蛋白聚糖AGGRECAN、Ⅰ型膠原COLLAGENⅠ、Ⅱ型膠原COLLAGENⅡ、基質(zhì)金屬蛋白酶2MATRIXMETALLOPROTEINASE2，MMP2、金屬蛋白酶組織抑制3（TISSUEINHIBITOFMETALLOPROTEINASE3，TIMP3），P53和細(xì)胞凋亡蛋白酶3CASPASE3的MRNA表達(dá)水平，使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA）測(cè)定聚集蛋白聚糖、Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、MMP2和TIMP3的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果退變椎間盤酸性微環(huán)境能夠降低未成年組和成年組供體來源的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的存活和增殖能力，并且抑制它們的聚集蛋白聚糖、Ⅰ型膠原和Ⅱ型膠原的基因和蛋白表達(dá)水平。未成年組和成年組供體來源的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)退變椎間盤酸性微環(huán)境的應(yīng)答模式相似，但是未成年組供體來源的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)退變椎間盤酸性微環(huán)境的耐受能力強(qiáng)于成年組供體來源的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。結(jié)論本研究顯示退變椎間盤酸性微環(huán)境是人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞用于椎間盤生物學(xué)修復(fù)的重要有害因素，來源于未成年組供體的人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞可能更加適合用于椎間盤生物學(xué)修復(fù)，人類脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞用于椎間盤生物學(xué)修復(fù)可能在退變?cè)缙冢ó?dāng)退變椎間盤病理組織微環(huán)境PH值大于68時(shí)）更加有效。第二部分退變椎間盤酸性微環(huán)境對(duì)大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。目的研究退變椎間盤酸性微環(huán)境對(duì)大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的存活、增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)代謝等生物學(xué)行為的影響。方法從健康雄性大鼠身上提取的髓核間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分別在四種不同的PH條件下進(jìn)行培養(yǎng)，分別是標(biāo)準(zhǔn)條件PH74和模擬正常、輕度退變和重度退變的椎間盤微環(huán)境（PH值分別為71，68和65）采用異硫氰酸熒光素橋連膜聯(lián)蛋白Ⅴ碘化丙啶染色FLUESCEINISOTHIOCYANATEANNEXINⅤPROPIDIUMIODIDESTAINING，F(xiàn)ITCAⅤPI評(píng)價(jià)細(xì)胞存活，CCK8（CELLCOUNTINGKIT8）測(cè)定細(xì)胞增殖，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)REALTIMEPCR和蛋白印跡法WESTERNBLOT檢測(cè)聚集蛋白聚糖AGGRECAN、Ⅰ型膠原COLLAGENⅠ、Ⅱ型膠原COLLAGENⅡ、基質(zhì)金屬蛋白酶2MATRIXMETALLOPROTEINASE2，MMP2、Ⅳ型血小板結(jié)合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶ADISINTEGRINMETALLOPROTEINASEWITHTHROMBOSPONDINMOTIFS4，ADAMTS4和金屬蛋白酶組織抑制劑3TISSUEINHIBITOFMETALLOPROTEINASE3，TIMP3的基因和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果退變椎間盤酸性微環(huán)境能夠顯著抑制大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的存活與增殖同時(shí)，該酸性微環(huán)境能夠抑制上述兩種間充質(zhì)干細(xì)胞中聚集蛋白聚糖、Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原以及TIMP3的基因和蛋白表達(dá)水平，并且提高M(jìn)MP2和ADAMTS4的基因和蛋白表達(dá)水平。但是，與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞相比，該酸性微環(huán)境對(duì)髓核間充質(zhì)干細(xì)胞的存活與增殖能力的抑制作用明顯較弱，同時(shí)髓核間充質(zhì)干細(xì)胞具有更高的聚集蛋白聚糖、Ⅱ型膠原和TIMP3表達(dá)水平，以及更低的MMP2和ADAMTS4表達(dá)水平。結(jié)論退變椎間盤的酸性微環(huán)境是髓核間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)椎間盤的主要障礙之一髓核間充質(zhì)干細(xì)胞較脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞更能耐受該酸性微環(huán)境，因而可能成為一種新型種子細(xì)胞用于椎間盤生物學(xué)修復(fù)。

簡(jiǎn)介：目錄中文摘要（1）英文摘要（3）論文題目（5）材料與方法（7）結(jié)果（16）討論（23）結(jié)論（25）參考文獻(xiàn)（25）文獻(xiàn)綜述（29）參考文獻(xiàn)（35）縮略語表（39）攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況（41）個(gè)人簡(jiǎn)歷（42）致謝（43）

簡(jiǎn)介：研究目的通過檢測(cè)慢病毒介導(dǎo)的Γ谷氨?；然福╒ITAMINKDEPENDENTGAMMAGLUTAMYLCARBOXYLASE，GGCX）基因轉(zhuǎn)染兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞后對(duì)其凋亡的影響，以及對(duì)兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞中MMP13、Ⅱ型膠原和Ⅹ型膠原的影響，探討其對(duì)兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的作用。進(jìn)而為體外骨性關(guān)節(jié)炎的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法1、選取12只重量約20±02KG左右的日本雄性大耳兔，運(yùn)用膝前交叉韌帶切斷的方法構(gòu)建動(dòng)物模型。對(duì)白兔進(jìn)行6周飼養(yǎng)后處死，對(duì)兔膝關(guān)節(jié)的軟骨細(xì)胞進(jìn)行分離以及培養(yǎng)，最后運(yùn)用ALCIANBLUE染色法以及Ⅱ型膠原纖維染色法對(duì)軟骨細(xì)胞做鑒定。2、隨機(jī)將軟骨細(xì)胞分為三個(gè)組空白對(duì)照組（不作任何處理）、陰性對(duì)照組（轉(zhuǎn)染不含GGCX慢病毒的空載體）、轉(zhuǎn)染組（轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒）。檢測(cè)轉(zhuǎn)染成功后分別用QRTPCR法及WESTERNBLOT法檢測(cè)各組中軟骨細(xì)胞中GGCX、MMP13、Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原MRNA及蛋白表達(dá)水平。3、運(yùn)用ANNEXINVFITCPI法來檢測(cè)各個(gè)分組中軟骨細(xì)胞的凋亡的情況。4、運(yùn)用茜素紅染色軟骨細(xì)胞進(jìn)行組織學(xué)檢查。研究結(jié)果1、兔骨關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞在初代中顯現(xiàn)為扁平，多角不規(guī)則，有幾個(gè)隆突，胞核為橢圓形，位于胞體中間。ALCIANBLUE染色軟骨細(xì)胞表現(xiàn)天藍(lán)色，Ⅱ型膠原纖維染色發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞和胞外基質(zhì)表現(xiàn)棕色或黃色。2、QRTPCR檢測(cè)結(jié)果示GGCX在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平明顯升高，MMP13在轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)水平明顯降低，Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)明顯升高，X型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平亦明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005），陰性對(duì)照組以及空白對(duì)照組之間相比較未見顯著差異（P＞005）；WB檢測(cè)結(jié)果顯示GGCX在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平明顯升高，MMP13在轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)水平明顯降低，Ⅱ型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平明顯升高，X型膠原在轉(zhuǎn)染組中表達(dá)水平亦明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005），陰性對(duì)照組以及空白對(duì)照組之間相比較未見明顯的差異（P＞005）。3、運(yùn)用ANNEXINVFITCPI法檢測(cè)各個(gè)分組凋亡率的結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組總凋亡率為17833±2612％，與空白對(duì)照組總凋亡率（25467±2623）以及陰性對(duì)照組總凋亡率（26167±2637）相比明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005），陰性對(duì)照組以及空白對(duì)照組相比較未見明顯差異存在（P＞005）。4、茜素紅染色結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組中軟骨基質(zhì)深染，細(xì)胞數(shù)量多，可見少量鈣結(jié)節(jié)，空白組和陰性對(duì)照組中軟骨基質(zhì)染色均一，大量鈣結(jié)節(jié)形成。結(jié)論1、采取前叉韌帶切斷大白兔的韌帶能夠成功造出白兔骨關(guān)節(jié)炎的模型，并能夠成功分離培養(yǎng)出兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的軟骨細(xì)胞；2、慢病毒能成功介導(dǎo)GGCX基因轉(zhuǎn)染兔骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞使其表達(dá)顯著增加；3、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒能夠使軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原的表達(dá)顯著增加；4、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒能夠使軟骨細(xì)胞MMP13、X型膠原的表達(dá)顯著降低；5、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒后能夠使骨性關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞的凋亡受到顯著抑制；6、轉(zhuǎn)染含GGCX慢病毒后能夠使骨性關(guān)節(jié)炎鈣結(jié)節(jié)形成受到顯著抑制。

簡(jiǎn)介：中圖法分類號(hào)R384學(xué)校代碼10661學(xué)號(hào)2013059密級(jí)公開碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（學(xué)術(shù)型學(xué)位）貴州及周邊地區(qū)斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素抗肝癌貴州及周邊地區(qū)斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素抗肝癌活性及對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究活性及對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究姓名名郭侃專業(yè)業(yè)病原生物學(xué)病原生物學(xué)研究方向研究方向醫(yī)學(xué)昆蟲資源開發(fā)與利用醫(yī)學(xué)昆蟲資源開發(fā)與利用導(dǎo)師師李曉飛李曉飛教授劉流副教授副教授培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位遵義醫(yī)學(xué)院遵義醫(yī)學(xué)院2016年5月遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文郭侃目錄1、論文貴州及周邊地區(qū)斑蝥體內(nèi)結(jié)合斑蝥素抗肝癌活性及對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究中英縮略詞對(duì)照表1中文摘要2英文摘要4前言7材料與方法9結(jié)果18討論45結(jié)論48參考文獻(xiàn)492、綜述斑蝥素及其衍生物的抗腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展533、致謝624、作者簡(jiǎn)介63基金課題編號(hào)1國(guó)家自然科學(xué)基金（NO81260488）；2貴州省科技廳中藥現(xiàn)代化項(xiàng)目（黔科合SY字20133012）；3貴州省科技廳社會(huì)發(fā)展攻關(guān)項(xiàng)目（黔科合SY字20123082）

簡(jiǎn)介：目的現(xiàn)階段，用于研究干細(xì)胞的主要材料來源于胚胎干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，但這兩種來源的干細(xì)胞都存在著部分的局限性，例如涉及創(chuàng)傷性、倫理道德性等，所以現(xiàn)臨床急需要尋找一種新型的干細(xì)胞以避免上述干細(xì)胞標(biāo)本倫理學(xué)的爭(zhēng)議、來源的缺乏及腫瘤形成的潛在性等弊端。本實(shí)驗(yàn)主要研究來源于經(jīng)血的經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞MENSTRUALBLOODDERIVEDMESENCHYMALSTEMCELLS。MENSCS在體外獲取及培養(yǎng)增殖的方法并鑒定，觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)情況等基本生物學(xué)特性以及體外誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞成脂細(xì)胞方向分化以及重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)體外誘導(dǎo)其向子宮內(nèi)膜上皮和間質(zhì)細(xì)胞方向分化的可行性及不同濃度雌激素對(duì)分化結(jié)果的影響。為其在臨床中的應(yīng)用奠定一定基礎(chǔ)。方法本實(shí)驗(yàn)采用FICOLL密度梯度法從月經(jīng)第二天健康女性經(jīng)血中分離MENSCS采用經(jīng)典的MTT法對(duì)體外擴(kuò)增的第一代、第二代細(xì)胞描繪生長(zhǎng)曲線，并通過傳代培養(yǎng)、體外擴(kuò)增使用倒置光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及在培養(yǎng)過程中的動(dòng)態(tài)增殖變化。第二代細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)免疫表型的表達(dá)情況。取第二代MENSCS分成誘導(dǎo)組和對(duì)照組。分別按5104ML接種至明膠包被的6孔板中24小時(shí)細(xì)胞貼壁后。誘導(dǎo)組培養(yǎng)液更換成干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基專用血清成骨誘導(dǎo)液為雙抗、200ΜMOLL抗壞血酸、10MMOLLΒ甘油磷酸鈉和01ΜMOLL地塞米松。對(duì)照組培養(yǎng)液換為L(zhǎng)DMEM添加10％FBS細(xì)胞置入37℃、5CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)每?jī)商鞊Q液1次連續(xù)培養(yǎng)3周。分別在第1、2、3周結(jié)束誘導(dǎo)結(jié)束時(shí)，通過檢測(cè)ALP活性、膠原表達(dá)情況、以及鈣結(jié)節(jié)表達(dá)情況，觀察成骨誘導(dǎo)的效果；分組方法同上，取第2代MENSCS按5104ML接種于被明膠包被的6孔板中細(xì)胞過夜貼壁后誘導(dǎo)組更換為干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基專用血清1106MOLL地塞米松10MOLL胰島素05MMOLLIBMX02MMOLL吲哚美辛對(duì)照組培養(yǎng)液LDMEM添加10?S細(xì)胞置入37℃、5CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)每?jī)商鞊Q液1次。分別在誘導(dǎo)2、3、4周結(jié)束時(shí)進(jìn)行油紅O染色，鏡下觀察油紅染色的結(jié)果。通過檢測(cè)MENSCS成骨成脂的誘導(dǎo)情況。探討其在體外向成骨成脂方向分化的潛能。將培養(yǎng)后的MENSCS分為4個(gè)研究組，每組培養(yǎng)體系中添加生長(zhǎng)因子TGFΒ10NGML。EGF10NGML。PDGFBB10NGML和不同濃度17Β雌二醇1109MOLL、1108MOLL、1107MOLL、1106MOLL分別標(biāo)記為組1、組2、組3、組4，培養(yǎng)體系中未添加生長(zhǎng)因子和雌激素的組為對(duì)照組。誘導(dǎo)培養(yǎng)5天后觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞標(biāo)記物角蛋白（CYTOKERATIN，CK）和基質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物波形蛋白（VIMENTIN，VIM），同時(shí)運(yùn)用RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)CK、VIMMRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)的量，以進(jìn)一步驗(yàn)證MENSCS是否向子宮內(nèi)膜方向分化及不同雌激素濃度對(duì)分化過程的影響。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)表明利用FICOLL離心法能從健康女性月經(jīng)血中分離并培養(yǎng)出干細(xì)胞，此原代細(xì)胞約15周達(dá)到8590融合，細(xì)胞多成梭形、漩渦狀、輻射狀。MTT法得出細(xì)胞倍增時(shí)間約為3032H。此細(xì)胞傳代后能穩(wěn)定生長(zhǎng)，可見細(xì)胞形態(tài)以纖維樣為主導(dǎo)。發(fā)現(xiàn)傳代中，在接種細(xì)胞12天，細(xì)胞增殖緩慢，第34天全量換液后細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，接著56天后細(xì)胞生長(zhǎng)較前緩慢，進(jìn)入平臺(tái)期，整個(gè)過程未出現(xiàn)抑制現(xiàn)象。用流式細(xì)胞儀術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，此類細(xì)胞表面標(biāo)記OCT4、STROL1、CD45、表達(dá)率分別為9513±081，180±092，093±042。細(xì)胞表現(xiàn)出OCT4強(qiáng)陽性，STROL1、CD45陰性。此說明培養(yǎng)的細(xì)胞具有胚胎干細(xì)胞性質(zhì)。誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明MENSCS成骨誘導(dǎo)前期誘導(dǎo)組細(xì)胞膠原表達(dá)量較后期升高M(jìn)ENSCS誘導(dǎo)兩周后經(jīng)茜素紅染色可見鈣結(jié)節(jié)明顯誘導(dǎo)組細(xì)胞ALPALKALINEPHOSPHATASE活性成骨細(xì)胞分化成熟的重要標(biāo)志隨著誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，強(qiáng)陽性，對(duì)照組陰性。經(jīng)成脂誘導(dǎo)3周有明顯的脂滴出現(xiàn)，油紅O染色呈陽性，對(duì)照組陰性。體外向子宮內(nèi)膜細(xì)胞方向分化結(jié)果表明各研究組CK、VIMMRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組（P結(jié)論通過FICOLL密度梯度離心法能獲得MENSCS，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)特定的細(xì)胞表面標(biāo)志物也證實(shí)了其為經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜干細(xì)胞，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)也表明其能在體外誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞方向分化。MENSCS在體外能夠誘導(dǎo)向子宮內(nèi)膜上皮和間質(zhì)細(xì)胞方向分化。生長(zhǎng)因子和雌激素在此過程中起重要作用，并且不同濃度雌激素分化的效果影響不同。其具有較高的增殖能力、較低免疫原性、來源廣泛、多向分化潛能等特性為經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞用于臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)，有望成為組織工程較為理想的種子細(xì)胞。

簡(jiǎn)介：科大學(xué)CALUNIVERSITY碩士學(xué)位論文TSPYL在Y染色體陽性肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)功能研究勞顯鈞導(dǎo)師姓名李山專業(yè)名稱臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)申請(qǐng)學(xué)位類型學(xué)術(shù)型學(xué)位答辯委員會(huì)主席顧國(guó)龍答辯委員會(huì)委員黃之虎朱旭秦雪莫武寧O一六年五月基本情況姓名勞顯鈞民族漢族籍貫廣西學(xué)習(xí)工作經(jīng)歷起止時(shí)間200809201306201309201606個(gè)人簡(jiǎn)歷所在院?；騿挝粡V西醫(yī)科大學(xué)廣西醫(yī)科大學(xué)研究生期間科研經(jīng)歷性別女出生年月1989年10月政治面貌中共黨員學(xué)歷學(xué)位本科碩士項(xiàng)目起止時(shí)間項(xiàng)目名稱項(xiàng)目來源201306201512TSPYL在Y染畢業(yè)課題色體陽性肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其生物學(xué)功能研究職稱學(xué)生學(xué)生本人承擔(dān)任務(wù)實(shí)驗(yàn)執(zhí)行、數(shù)據(jù)分析、論文撰寫

簡(jiǎn)介：運(yùn)動(dòng)損傷主要包括肌肉組織部位的拉傷、扭傷和挫傷，以及肌腱和韌帶損傷。這些損傷不僅會(huì)影響身體健康而且阻礙日常生活與工作，當(dāng)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中干細(xì)胞治療的出現(xiàn)使得治療相關(guān)疾病被寄予厚望。本研究旨在建立骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞與肌腱干細(xì)胞的體外擴(kuò)增培養(yǎng)體系，并探索其細(xì)胞增殖、分化等生物學(xué)特性及其在肌肉損傷模型與肌腱損傷模型移植后體內(nèi)遷移情況，得到結(jié)論如下1采用機(jī)械分離法與酶消化法，成功分離獲得肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和肌腱干細(xì)胞，分離后的兩種細(xì)胞傳代培養(yǎng)后增殖能力強(qiáng)，其中肌肉衛(wèi)星細(xì)胞傳至27代，肌腱干細(xì)胞傳至38代，此外經(jīng)凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞仍具有較高的活性。2通過RTPCR、免疫熒光以及流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞相關(guān)特異性基因和表面標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中DESMIN、PAX7、CMET、MYF5、MYOD，肌腱干細(xì)胞中COLLAGENI，COLLAGENIII，CD44，NUCLEOSTEMIN和TENINC等特異性基因及表面抗原均呈陽性表達(dá)，表明所分離的細(xì)胞分別具有肌肉衛(wèi)星細(xì)胞和肌腱干細(xì)胞的特性，此外對(duì)分離的兩種細(xì)胞進(jìn)行生長(zhǎng)曲線和克隆形成能力、核型分析等生物學(xué)特性鑒定，表明細(xì)胞具有較強(qiáng)的增值能力并且無染色體突變，以此保證本實(shí)驗(yàn)獲取兩種干細(xì)胞可用于細(xì)胞庫的構(gòu)建及日后相關(guān)研究的使用。3為鑒定肌肉衛(wèi)星細(xì)胞的多分化潛能特性，在體外將肌肉衛(wèi)星細(xì)胞分別向成肌細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞、和成骨細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，而肌腱干細(xì)胞則向成脂細(xì)胞、成骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)并對(duì)誘導(dǎo)結(jié)果進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明肌肉衛(wèi)星細(xì)胞在向成肌細(xì)胞誘導(dǎo)7天后形態(tài)明顯發(fā)生變化，通過免疫組化對(duì)FASTSKELETALMYOSIN抗體進(jìn)行染色結(jié)果呈陽性，RTPCR檢測(cè)成肌相關(guān)基因MYOG與FASTSKELETALMYOSIN均陽性表達(dá)；肌腱干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)軟骨球形態(tài)明顯，阿利新藍(lán)染色成陽性，RTPCR相關(guān)基因COLLAGENII，SOX9和ACAN均表達(dá)；此外兩種細(xì)胞在向成脂和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)時(shí)均獲得成功，利用脂肪誘導(dǎo)液對(duì)肌肉衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行成脂誘導(dǎo)，21天后油紅O染色可見到紅色脂滴，RTPCR檢測(cè)到脂肪細(xì)胞特異性分子標(biāo)記LPL和PPARΓ陽性表達(dá)；肌肉衛(wèi)星細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)液中誘導(dǎo)4周后進(jìn)行茜素紅染色呈陽性，RTPCR檢測(cè)到成骨細(xì)胞特異性分子標(biāo)記COLLAGENI，OPN，RUNX2和ALP陽性表達(dá)；以上研究表明肌肉衛(wèi)星細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中具有多分化潛能特性。4分別采用心臟毒素（CYTOTOXIN，CTX）和膠原酶構(gòu)建小鼠肌肉損傷模型與肌腱損傷模型，HE（HEMATOXYLINEOSINSTAINING，染色顯示肌肉和肌腱組織正常結(jié)構(gòu)均被破壞，血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CK均明顯超出正常范圍表明建模成功。對(duì)肌肉衛(wèi)星細(xì)胞進(jìn)行CMDIL細(xì)胞示蹤劑標(biāo)記，將標(biāo)記的細(xì)胞直接注射到小鼠肌肉損傷位點(diǎn)，熒光顯微鏡下可見組織中分布標(biāo)記的細(xì)胞，血清檢測(cè)顯示干細(xì)胞移植組CK值與損傷組和生理鹽水組相比有所降低，研究結(jié)果表明，對(duì)兩種模型進(jìn)行干細(xì)胞移植后可在三周內(nèi)穩(wěn)定的遷移到相應(yīng)組織中對(duì)損傷可能具有一定的作用。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)在體外成功分離培養(yǎng)了肌肉衛(wèi)星細(xì)胞與肌腱干細(xì)胞，并對(duì)其生物學(xué)特性和多分化潛能進(jìn)行了研究，通過體外小鼠肌肉損傷模型移植，肌肉衛(wèi)星細(xì)胞移植后可在三周內(nèi)穩(wěn)定的遷移到相應(yīng)組織中，對(duì)小鼠肌肉損傷具有一定的恢復(fù)作用，并初步為以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的細(xì)胞療法治療損傷、促進(jìn)組織再生修復(fù)的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

簡(jiǎn)介：目的血管內(nèi)皮細(xì)胞VULARENDOTHELIALCELL，VEC是一層覆蓋在血管內(nèi)壁上、參與組成血管管腔面的單層細(xì)胞，是血管壁的重要組成部分，可通過合成和分泌多種血管活性物質(zhì)參與血管活性物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)血管的收縮和舒張，從而在全身血管性疾病的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。近年來，人血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究對(duì)象以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUMANUMBILICALVEINENDOTHELIALCELL，HUVEC及人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞HUMANATICENDOTHELIALCELLS，HAEC為主，二者原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)均需取自一段血管內(nèi)皮，所以都存在著取材不方便的問題，而購買來的細(xì)胞株又在儲(chǔ)存解凍過程很容易導(dǎo)致細(xì)胞損傷，以及細(xì)胞免疫原性較高等方面的不足。內(nèi)皮祖細(xì)胞ENDOTHELIALPROGENITCELLS，EPC是成熟內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，在特定條件下可經(jīng)過誘導(dǎo)分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而具有新生血管和內(nèi)皮的作用。自ASAHARA等于1997年發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞以來，對(duì)其的研究逐漸深入，目前普遍認(rèn)為CD34、CD133及KDR是內(nèi)皮祖細(xì)胞的表面標(biāo)志。內(nèi)皮祖細(xì)胞的主要來源有臍靜脈血、骨髓以及外周血，目前人內(nèi)皮祖細(xì)胞主要以外周血為來源進(jìn)行分離及培養(yǎng)。同血管內(nèi)皮細(xì)胞一樣，內(nèi)皮祖細(xì)胞也可在MATRIGEL上形成毛細(xì)血管管腔結(jié)構(gòu)，在體外培養(yǎng)過程中也可以分泌一氧化氮N0這種重要的內(nèi)皮依賴性舒張因子。與血管內(nèi)皮細(xì)胞相比，人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞來源更加豐富，取材也更加方便，而且可以獲得細(xì)胞免疫原性比購買來的血管內(nèi)皮細(xì)胞更低的細(xì)胞，在實(shí)際應(yīng)用中可以更加符合人體情況。本研究通過分析人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力、血管生成能力、一氧化氮分泌能力等生物學(xué)特征，并對(duì)所得出的結(jié)果進(jìn)行比較，以求為血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究提供新的對(duì)象或思路。方法1、細(xì)胞的獲得與培養(yǎng)通過肝素抗凝管（紫頭管）采取20ML外周血后，使用密度梯度離心法分離出人外周血單個(gè)核細(xì)胞，然后以EGM2MV培養(yǎng)基將獲取的單個(gè)核細(xì)胞重懸，接種到已經(jīng)事先用人纖維連接蛋白FN包被好的培養(yǎng)瓶之中，在37℃5％CO2環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)，三天后換液，去除未貼壁的懸浮細(xì)胞，剩余的貼壁細(xì)胞則留下繼續(xù)培養(yǎng)，之后視細(xì)胞生長(zhǎng)情況，大約每3天換液一次，3周左右可見培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)出現(xiàn)鵝卵石樣細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其表面抗原進(jìn)行鑒定后，確認(rèn)其為內(nèi)皮組細(xì)胞EPC，并以此為實(shí)驗(yàn)組。購買來的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC解凍后，同樣以EGM2MV為培養(yǎng)基，在37℃5％CO2環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并以此為對(duì)照組。2、細(xì)胞增殖能力比較為比較內(nèi)皮祖細(xì)胞與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力，將分離培養(yǎng)獲得的內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞接種于6孔板，細(xì)胞每3天換液1次。在細(xì)胞培養(yǎng)至第2，4，6和8天時(shí)，首先通過錐蟲藍(lán)染色來區(qū)別并去除無活性的細(xì)胞，然后用胰酶消化細(xì)胞，消化下來的細(xì)胞用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后用SPSS210統(tǒng)計(jì)軟件分析比較人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力是否有差異。3、體外血管形成實(shí)驗(yàn)為了將內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外血管形成能力與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行比較，吸取300ΜLMATRIGEL凝膠鋪于24孔板內(nèi)，然后孵育30分鐘，孵育環(huán)境溫度為37℃，隨后將消化下來的原代內(nèi)皮祖細(xì)胞及臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分別以5104個(gè)同300ΜL的EGM2MV完全培養(yǎng)基混合重懸后加入到24孔板內(nèi)，孵育12H后，在倒置相差顯微鏡下觀察毛細(xì)血管管腔樣結(jié)構(gòu)的形成情況，拍照并使用WIMTUBE軟件分析后得到生成的管腔樣結(jié)構(gòu)的數(shù)目以及長(zhǎng)度，然后用SPSS210統(tǒng)計(jì)軟件分析比較人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的體外血管形成能力是否有差異。4、一氧化氮分泌功能測(cè)定為比較內(nèi)皮祖細(xì)胞與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮分泌功能是否有差別，分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，以5104個(gè)細(xì)胞種植于6孔板，培養(yǎng)至第三天后，取培養(yǎng)基上清，按照一氧化氮試劑盒說明書測(cè)定上清液中的一氧化氮濃度。然后用SPSS210統(tǒng)計(jì)軟件分析比較人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮分泌功能是否有差別，以及其差別是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果從外周血分離出的單個(gè)核細(xì)胞在體外經(jīng)特定的培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)后，于一周左右在顯微鏡下可見細(xì)胞形成紡錘樣細(xì)胞簇，并逐漸變小消失。大約三周左右，培養(yǎng)瓶中開始出現(xiàn)鵝卵石樣外觀的細(xì)胞，且細(xì)胞逐漸融合，呈外生性生長(zhǎng)，行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其細(xì)胞表面的特征性抗原，結(jié)果顯示所培養(yǎng)出的鵝卵石樣細(xì)胞表達(dá)CD34912％、CD133136％以及KDR955％，證實(shí)其為內(nèi)皮祖細(xì)胞EPC。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞解凍復(fù)蘇后，細(xì)胞于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)迅速貼壁，也表現(xiàn)為外生性生長(zhǎng)。二者在同等條件下培養(yǎng)至第2、4、6、8天時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)并比較其平均值為164±014150±012105、372±033309±048105、841±063641±039105、1290±041，1048±089105，其差異均具有顯著性意義P＜005，N8。體外血管形成實(shí)驗(yàn)，二者形成的毛細(xì)血管管腔平均數(shù)分別為100±12，86±10個(gè)，管道長(zhǎng)度平均數(shù)分別為699±054，557±079MMMM2，差異均具有顯著性差異P＜005，N8。細(xì)胞一氧化氮分泌功能測(cè)定結(jié)果顯示，培養(yǎng)三天后，人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基上清中一氧化氮濃度分別為181±040，253±028ΜMOLL，其差異具有顯著性意義P＜005，N8。結(jié)論人外周血分離培養(yǎng)獲得的內(nèi)皮祖細(xì)胞比人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有更好的增殖潛能及體外血管形成能力，可以作為臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在其相關(guān)研究中的替代品。

簡(jiǎn)介：原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明本人所呈交的學(xué)位論文，是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。學(xué)位論文中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點(diǎn)等，均已明確注明出處。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對(duì)本文的研究成果做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名日期關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬蘭州大學(xué)。本人完全了解蘭州大學(xué)有關(guān)保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保存或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的紙質(zhì)版和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)蘭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用任何復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為蘭州大學(xué)。本學(xué)位論文研究?jī)?nèi)容□可以公開□不宜公開，已在學(xué)位辦公室辦理保密申請(qǐng)，解密后適用本授權(quán)書。（請(qǐng)?jiān)谝陨线x項(xiàng)內(nèi)選擇其中一項(xiàng)打“√”）論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期日期關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞MIR3633P，胃癌，侵襲，遷移

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R73密級(jí)公開UDC610學(xué)校代碼10555碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（專業(yè)學(xué)位）（專業(yè)學(xué)位）模擬不同照射模式對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系模擬不同照射模式對(duì)鼻咽癌細(xì)胞系CNE2CNE2放射生物學(xué)效應(yīng)的影響放射生物學(xué)效應(yīng)的影響研究生姓名陳琛指導(dǎo)教師、職稱席許平主任醫(yī)師合作導(dǎo)師、職稱專業(yè)學(xué)位類別（領(lǐng)域）臨床醫(yī)學(xué)（腫瘤學(xué)）研究方向放射治療學(xué)所在學(xué)院湖南省腫瘤醫(yī)院二〇一五年五月一五年五月南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名年月日南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀（博碩）士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究?jī)?nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。同意學(xué)校將論文加入中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并按中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國(guó)科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。對(duì)于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簽名年月日導(dǎo)師簽名年月日