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    • 簡(jiǎn)介:目的比較來源于同一人退變椎間盤內(nèi)髓核干細(xì)胞NPSCS、纖維環(huán)干細(xì)胞AFSCS及軟骨終板干細(xì)胞CESCS的生物學(xué)特性。方法收集7例經(jīng)X線、MRI(核磁共振)確診為椎間盤突出癥患者,將取出的椎間盤仔細(xì)分離并進(jìn)行酶消化、濾網(wǎng)過濾后獲得NPSCS、AFSCS及CESCS。培養(yǎng)至第3代時(shí),采用CCK8(細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒)檢測(cè)三種干細(xì)胞的生長(zhǎng)活性,并進(jìn)行成脂、成骨及成軟骨誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)21D后分別應(yīng)用油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞成脂能力,茜素紅染色檢測(cè)細(xì)胞成骨能力,甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞成軟骨能力。提取第3代細(xì)胞總RNA,分別行RTPCR(實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng))檢測(cè)成脂、成骨及成軟骨相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果來自于同一患者的NPSCS、AFSCS與CESCS形態(tài)上相似,無明顯差異。生長(zhǎng)曲線顯示CESCS(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為035±001,052±002,064±008,080±019,079±02,106±011,137±009131±041)與AFSCS(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為038±001,050±003,072±006,082±013,087±008,087±009,120±005143±005)增殖能力要比NPSCS(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為032±002,042±004,059±001,064±017,065±019,068±021,067±012059±012)活躍。油紅O染色、茜素紅染色及甲苯胺藍(lán)染色分別證實(shí)三種干細(xì)胞均可向脂、骨及軟骨三系誘導(dǎo)分化。RTPCR檢測(cè)顯示AFSCS在成脂PPAR?;蛳鄬?duì)表達(dá)量685±032,LPL基因相對(duì)表達(dá)量1372±037、及成軟骨COII基因相對(duì)表達(dá)量1045±110,SOX9基因相對(duì)表達(dá)量1439±122基因表達(dá)方面比NPSCS(PPAR?;蛳鄬?duì)表達(dá)量663±050,LPL基因相對(duì)表達(dá)量841±042;COII基因相對(duì)表達(dá)量353±062,SOX9基因相對(duì)表達(dá)量766±068)與CESCS(PPAR?;蛳鄬?duì)表達(dá)量721±021,LPL基因相對(duì)表達(dá)量1062±037;COII基因相對(duì)表達(dá)量826±049,SOX9基因相對(duì)表達(dá)量1370±110)略強(qiáng);而成骨能力方面,CESCS最強(qiáng)(RUNX2基因相對(duì)表達(dá)量730±11,COI基因相對(duì)表達(dá)量822±084),AFSCS(RUNX2基因相對(duì)表達(dá)量620±092COI基因相對(duì)表達(dá)量494±090)與NPSCS相當(dāng)(RUNX2基因相對(duì)表達(dá)量261±006,COI基因相對(duì)表達(dá)量705±082;);NPSCS的成脂基因尤其脂蛋白脂肪酶LPL基因表達(dá)較低。結(jié)論NPSCS、AFSCS及CESCS在體外培養(yǎng)中細(xì)胞形態(tài)相似,但生物學(xué)特性方面存在著差異。體外誘導(dǎo)分化及RTPCR檢測(cè)均提示AFSCS比其他兩種干細(xì)胞在椎間盤組織工程領(lǐng)域中更加具有優(yōu)越性。
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      上傳時(shí)間:2024-03-07
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    • 簡(jiǎn)介:神經(jīng)因素在骨組織再生及重建過程中作用重要,而神經(jīng)肽正是神經(jīng)因素發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的主要物質(zhì)。P物質(zhì)SUBSTANCP,SP是廣泛分布于骨髓和骨膜的感覺神經(jīng)元分泌的一種神經(jīng)肽,其生物化學(xué)結(jié)構(gòu)由11種氨基酸構(gòu)成,參與調(diào)控骨組織細(xì)胞如骨髓基質(zhì)干細(xì)胞、成骨細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。不少體內(nèi)和體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)表明,SP可以通過促進(jìn)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞BMSCS增殖能力增強(qiáng)、成骨基因表達(dá)及礦化來促進(jìn)骨形成過程,調(diào)控骨折愈合生理過程。神經(jīng)肽SP的調(diào)控作用通常需要通過相關(guān)受體實(shí)現(xiàn),SP受體主要是神經(jīng)激肽1受體NK1受體,此受體可介導(dǎo)SP促進(jìn)骨形成的生物學(xué)效應(yīng)過程。已有研究證實(shí)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和成骨細(xì)胞MC3T3E1細(xì)胞能夠穩(wěn)定表達(dá)NK1受體的MRNA,且表達(dá)部位位于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜內(nèi),提示SP相關(guān)調(diào)控作用的可行性。NK1受體可介導(dǎo)某些抗凋亡反應(yīng),如NK1受體拮抗劑可誘導(dǎo)人類癌細(xì)胞株HEP2凋亡。因此NK11受體表達(dá)及SP調(diào)控凋亡機(jī)制的相關(guān)性可能是神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控骨折愈合生理過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的調(diào)控離不開細(xì)胞信號(hào)通路。已有研究證實(shí)經(jīng)典WNTΒCATENIN通路和MAPK信號(hào)通路等多種細(xì)胞信號(hào)通路參與了P物質(zhì)調(diào)控BMSCS增殖和礦化,但WNT信號(hào)通路是否參與SP抗骨髓基質(zhì)干細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡尚未證實(shí)。經(jīng)典WNTΒCATENIN信號(hào)通路是骨代謝生理的關(guān)鍵通路因素。經(jīng)典WNT通路可以概括為Β連環(huán)蛋白ΒCATENIN在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)增加,積累到一定程度時(shí)可進(jìn)入核內(nèi)引起下游WNT相關(guān)基因如CMYC等轉(zhuǎn)錄表達(dá)。研究表明,SP調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖效應(yīng)、促進(jìn)BMSCS和前成骨細(xì)胞MC3T3E1分化程度均與經(jīng)典WNT通路有關(guān),而WNT信號(hào)通路與細(xì)胞凋亡通路也具有相關(guān)性。因此SP的抗凋亡作用是否由經(jīng)典WNT信號(hào)通路介導(dǎo)有必要進(jìn)行研究。以上研究背景提示目前存在三個(gè)問題,即P物質(zhì)是否能夠調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的去血清誘導(dǎo)凋亡過程其調(diào)控效應(yīng)具有何種濃度及時(shí)間特點(diǎn)其調(diào)控機(jī)制涉及何種凋亡信號(hào)通路及WNT信號(hào)通路改變這些問題的解釋將進(jìn)一步加深目前對(duì)神經(jīng)因素通過神經(jīng)肽調(diào)控骨折愈合過程的分子機(jī)制的研究,以及骨折修復(fù)過程中的神經(jīng)保護(hù)作用的理解。本研究主要是研究神經(jīng)肽P物質(zhì)對(duì)大鼠BMSCS去血清誘導(dǎo)凋亡的調(diào)控效應(yīng)、凋亡蛋白3等凋亡信號(hào)改變及相關(guān)經(jīng)典WNTΒCATENIN通路機(jī)制,同時(shí)探討NK1受體表達(dá)水平在細(xì)胞凋亡過程中的變化情況。本實(shí)驗(yàn)主要的實(shí)驗(yàn)材料、方法、內(nèi)容和結(jié)論主要包括以下幾個(gè)部分研究目的1神經(jīng)肽P物質(zhì)對(duì)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞去血清凋亡的影響。2神經(jīng)肽P物質(zhì)作用下去血清誘導(dǎo)凋亡的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的凋亡通路相關(guān)信號(hào)改變情況。3神經(jīng)肽P物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凋亡與經(jīng)典WNTΒCATENIN通路的關(guān)系。第1部分大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的獲取鑒定及NK1受體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^全骨髓培養(yǎng)法獲取純度較高的大鼠BMSCS,并通過流式鑒定其純度,同時(shí)研究其NK1受體表達(dá)。實(shí)驗(yàn)方法1大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞獲取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇年齡一個(gè)月左右重量80100G大小的SD大鼠,按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)要求直接脫頸法處死,于清潔條件無菌器械輔助下,按層次切開大鼠解剖結(jié)構(gòu)后獲取大鼠的股骨及脛骨。使用針頭沖洗骨髓腔,加入DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)行全骨髓法分離培養(yǎng)BMSCS。2大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞4872H后,首次換液后及時(shí)清洗培養(yǎng)瓶,去除未貼壁細(xì)胞后傳代培養(yǎng),按照1∶2或1∶3的接種比例經(jīng)胰酶消化后傳代至培養(yǎng)瓶中,采用含胎牛血清10%及青霉素鏈霉素溶液1%的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體每23天進(jìn)行換液,細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿瓶底后傳三代,胰酶消化后按1∶2傳代,通過光鏡及倒置顯微鏡觀察大鼠BMSCS形態(tài)變化特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過全骨髓培養(yǎng)法于體外成功分離培養(yǎng)出可用于實(shí)驗(yàn)的較高純度大鼠BMSCS。流式細(xì)胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示FL1HEIGHT02%±17%、CD90997%±31%、IGG1(096%±13%)、CD34(106%±13%)、CD44998%±41%、CD4517%±21%、IGG2A035%±29%、CD11BC06%±17%、HAMSTER009%±07%、CD299988%±31%,符合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的免疫表型特征。同時(shí),NK1受體表達(dá)于骨髓基質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi),其蛋白表達(dá)量相對(duì)穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)論全骨髓培養(yǎng)法可獲得大量純度較高的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,且其表面穩(wěn)定表達(dá)NK1受體,為下一步研究提供了種子細(xì)胞和理論基礎(chǔ)。第2部分P物質(zhì)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞去血清誘導(dǎo)下細(xì)胞活性的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康某醪接^察P物質(zhì)作用于去血清誘導(dǎo)下的BMSCS后的細(xì)胞活性變化。實(shí)驗(yàn)方法1實(shí)驗(yàn)分組處理取三代骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,分為四組,即對(duì)照組(加入等量PBS做安慰劑)、SP108MOLL組、SP1010MOLL組、SP1012MOLL組,接種于96孔板內(nèi)于去學(xué)期誘導(dǎo)凋亡后12小時(shí)和24小時(shí)分別采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性。初步篩選出適宜濃度和適宜時(shí)間點(diǎn)后,使用DAPI熒光染色法和ANNEXINVFITCPI染色,熒光顯微鏡觀察和上機(jī)(流式細(xì)胞儀)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率改變。2MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性96孔板內(nèi)每孔加入15ΜL的MTT溶液(1∶10稀釋),于37℃環(huán)境下孵育4H后,每孔加入150Μ1的DMSO用于溶解產(chǎn)生的晶體,隨后利用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度495NM波長(zhǎng)讀數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT結(jié)果顯示24H去血清處理后,1010MOLLSP實(shí)驗(yàn)處理能夠提高細(xì)胞活性,進(jìn)一步的DAPI熒光染色顯示SP能夠保護(hù)細(xì)胞核形態(tài)皺縮形變等改變,且減少細(xì)胞凋亡率ANNEXINV熒光標(biāo)記法。實(shí)驗(yàn)結(jié)論P(yáng)物質(zhì)能夠提高骨髓基質(zhì)干細(xì)胞于去血清處理后的細(xì)胞活性,改善細(xì)胞核形態(tài)變化且減少細(xì)胞凋亡率。第3部分P物質(zhì)對(duì)骨髓間充質(zhì)于細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡影響及相關(guān)凋亡通路調(diào)控機(jī)制的初步探討實(shí)驗(yàn)?zāi)康某醪教接慞物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凋亡過程中的細(xì)胞凋亡通路信號(hào)改變。實(shí)驗(yàn)方法1實(shí)驗(yàn)分組處理首先將第三代大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞隨機(jī)分為四組,即對(duì)照組、SP108MOLL組、SP1010MOLL組、SP1012MOLL組,測(cè)定凋亡蛋白3表達(dá),探討P物質(zhì)抗凋亡效應(yīng)的濃度特異性。進(jìn)一步設(shè)置對(duì)照組、SP1010MOLL組、SP1010MOLLNK1受體拮抗劑SPANTIDE108MOLL組,探討SP抗凋亡效應(yīng)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果P物質(zhì)作用于去血清的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞后,凋亡蛋白3熒光染色陽性細(xì)胞數(shù)量減少,相關(guān)RNA和蛋白表達(dá)減少,以1010MOLL最為明顯。凋亡基因改變顯示P物質(zhì)在12小時(shí)和24小時(shí)可減少凋亡信號(hào)BAXBCL2比例,調(diào)控CASPASE8、CASPASE9和CASPASE3凋亡基因改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)論P(yáng)物質(zhì)可調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的內(nèi)源性凋亡通路信號(hào),減少凋亡蛋白3表達(dá),從而抑制細(xì)胞去血清凋亡過程。第4部分P物質(zhì)調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞去血清誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)經(jīng)典WNTΒCATENIN通路機(jī)制的探討實(shí)驗(yàn)?zāi)康某醪教接慞物質(zhì)調(diào)控骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凋亡的經(jīng)典WNT通路信號(hào)相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法1實(shí)驗(yàn)分組處理首先設(shè)置對(duì)照組、SP1010MOLL組、SP1010MOLLWNT通路拮抗劑DKK(001GL)組、SP1010MOLLNK1受體拮抗劑SPANTIDE108MOLL組,測(cè)定WNT通路和凋亡通路基因蛋白改變,并再次設(shè)置對(duì)照組、SP108MOLL組、SP(1010MOLL)組、SP1012MOLL組確認(rèn)WNT通路蛋白相關(guān)改變情況。2WESTERNBLOT、QPCR檢測(cè)WNT通路和凋亡通路基因、蛋白表達(dá)提取實(shí)驗(yàn)組總RNA后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),熒光定量測(cè)定BCL2、BAX、CASPASE3、CASPASE8、CASPASE9、ΒCATENIN、GSK3Β、CMYC和CYCLIND1含量。相關(guān)結(jié)果于12小時(shí)和24小時(shí)分別測(cè)定三次。3免疫細(xì)胞熒光法檢測(cè)ΒCATENIN蛋白定位取三代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)處理后,固定液處理15分鐘后,使用04%TRITON溶液破膜10分鐘,脫脂牛奶封閉抗體30分鐘,之后以1∶300稀釋的ΒCATENIN一抗PBST溶液孵育過夜。PBS沖洗三次后,以FITC綠色熒光二抗室溫下避光孵育30分鐘,吸出液體后再次已DAPI染色15分鐘,熒光顯微鏡下觀察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果P物質(zhì)作用于骨髓基質(zhì)干細(xì)胞,促進(jìn)經(jīng)典WNT通路ΒCATENIN、PGSK3Β、CMYC和CYCLIND1基因和蛋白表達(dá)增高以及ΒCATENIN轉(zhuǎn)移入核,阻斷WNT通路后P物質(zhì)抗凋亡效應(yīng)減弱且WNT通路表現(xiàn)水平減低。實(shí)驗(yàn)結(jié)論骨髓基質(zhì)干細(xì)胞可激活經(jīng)典WNT通路,從而調(diào)控去血清凋亡過程。
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    • 簡(jiǎn)介:目錄慢病毒介導(dǎo)RNAI沉默GTPBP4基因表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌RKO細(xì)胞生物學(xué)行為的影響??????????????????1中文摘要?????????????????????1英文摘要?????????????????????4前言???????????????????????8刖舌???????????????????????材料與方法????????????????????10結(jié)果???????????????????????23討論???????????????????????29結(jié)論??????????????????????。34參考文獻(xiàn)?????????????????????35英漢縮略詞對(duì)照表?????????????????37致謝???????????????????????38結(jié)直腸癌分子靶向治療的進(jìn)展綜述?????????????????????????弓912345678911111111112324H、48H、72H、96H、120H5個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)各組RKO細(xì)胞的增殖情況。⑤用PI.FACS細(xì)胞周期檢測(cè)來檢測(cè)GTPBP4基因與RKO細(xì)胞周期分布的相關(guān)性。⑥通過感染后細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)板上的克隆形成能力來提示慢病毒感染后細(xì)胞的成瘤能力。結(jié)果①用熒光顯微鏡在慢病毒感染3天后觀察,根據(jù)發(fā)綠色熒光的RKO細(xì)胞所占比率判斷慢病毒感染RKO細(xì)胞的效率達(dá)80%以上。REAL.TIMEPCR法檢測(cè)結(jié)果數(shù)值分析采用2△△CT分析法,實(shí)驗(yàn)組2AACT平均值為0.208,對(duì)照組的2AACT平均值為1.002,顯示實(shí)驗(yàn)組RKO細(xì)胞中GTPBP4的MRNA表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組P0.05。WESTERNBLOT結(jié)果X光顯影后,可見各組內(nèi)對(duì)照GAPDH蛋白灰度相似,而實(shí)驗(yàn)組GTPBP4蛋白灰度值明顯低于對(duì)照組,顯示SIRNA對(duì)目的基因的表達(dá)有敲減作用,根據(jù)灰度分析結(jié)果,敲減效率達(dá)到72.9%。④凋亡檢測(cè)顯示慢病毒感染后,對(duì)于凋亡峰值實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞明顯高于對(duì)照組,且峰值出現(xiàn)時(shí)間早于對(duì)照組,表明實(shí)驗(yàn)組RKO凋亡細(xì)胞增加。MTT法檢測(cè)結(jié)果在24H、48H、72H、96H、120H5個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組OD值均值分別為1.00、1.54、2.6L、4.15、8.09,實(shí)驗(yàn)組分別為1.00、1.49、2.23、3.12、6.33,顯示慢病毒感染后,實(shí)驗(yàn)組RKO細(xì)胞MTT值比值即增殖倍數(shù)減小,提示GTPBP4基因與RKO細(xì)胞的增殖能力顯著相關(guān)。⑥PIFACS細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果慢病毒感染后,處于G1期及G2/M期的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞顯著增多,而處于S期的明顯減少,提示GTPBP4基因與RKO細(xì)胞的周期分布相關(guān)。⑦細(xì)胞克隆形成檢測(cè)結(jié)果實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞集落數(shù)目平均值為63,對(duì)照組為106,顯示慢病毒感染后,實(shí)驗(yàn)組RKO細(xì)胞集落數(shù)目與對(duì)照組細(xì)胞集落數(shù)目相比減少,提示GTPBP4基因與RKO細(xì)胞的克隆形成能力相關(guān)。結(jié)論
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    • 簡(jiǎn)介:外周動(dòng)脈疾病(PERIPHERYARTERYDISEASEPAD包括一系列由供應(yīng)腦部、內(nèi)臟器官和肢體的動(dòng)脈結(jié)構(gòu)和功能改變而導(dǎo)致的非冠狀動(dòng)脈系統(tǒng)綜合征,即指除冠狀動(dòng)脈之外的主動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈的狹窄、閉塞或瘤樣擴(kuò)增疾病,以下肢動(dòng)脈硬化閉塞最為常見。目前手術(shù)和藥物均無法逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈壁本身的病變。治療PAD的關(guān)鍵為血管內(nèi)皮細(xì)胞(VULAENDOTHELIALCELLSVECS),其激活、增殖、遷移、管腔結(jié)構(gòu)的形成以及塑形,以出芽的方式形成新的血管并重建形成新生血管網(wǎng),可增加末梢循環(huán)血量或改善微循環(huán)血液灌注,同時(shí)可解決外科血管重建術(shù)后動(dòng)脈長(zhǎng)期通暢率的問題。然而,成熟的VECS的活性低,生長(zhǎng)速度及自我更新速度慢。VECS降解細(xì)胞外基質(zhì)和遷移能力弱,導(dǎo)致側(cè)枝循環(huán)建立不良,綜上獲得一種耐凋亡、促增殖,同時(shí)具備強(qiáng)大的遷移能力和降解細(xì)胞外基質(zhì)的理想VECS是治療PAD的關(guān)鍵所在。存活素(SURVIVIN,SVV)由142個(gè)氨基酸組成,為IAP(INHIBITOFAPOPTOSISPROTEIN家族中分子量最小的成員在腫瘤細(xì)胞中其強(qiáng)大的調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和抗凋亡能力得到了大量研究證實(shí)。SVV是目前已知最強(qiáng)的凋亡抑制因子1,可通過抑制CASPASE3CASPASE9CASPASE10等凋亡通路中的多個(gè)環(huán)節(jié)來抑制細(xì)胞的凋亡,同時(shí)參與不同細(xì)胞周期的調(diào)控,并與多種周期調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合,直接調(diào)節(jié)細(xì)胞的有絲分裂,包括CYCLINDCYCLINE等,近年來已有很多研究證實(shí)SVV也表達(dá)于非腫瘤細(xì)胞,如胃粘膜2、巨噬細(xì)胞3以及腎小管上皮細(xì)胞等4,且SVV并非腫瘤的特異基因,表達(dá)后細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生腫瘤樣轉(zhuǎn)化。因此本研究培養(yǎng)大鼠動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,上調(diào)其SURVIVIN基因的表達(dá),以獲得抗凋亡,促增殖的理想血管內(nèi)皮細(xì)胞,并從整體水平探討SURVIVIN基因促進(jìn)VECS增殖及抗凋亡的機(jī)制以及對(duì)體內(nèi)血管生成的影響,為PAD的治療提供一定的理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第一部分SURVIVIN在大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)目的探討SURVIVIN在大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)方法采用真核細(xì)胞裂解將正常長(zhǎng)至90%左右的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞裂解,并按照說明提取相應(yīng)蛋白質(zhì),通過WESTERNBLOT方法檢測(cè)正常大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中SURVIVIN表達(dá)狀況。結(jié)果在正常培養(yǎng)的原代大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中,SURVIVIN表達(dá)率高達(dá)100,WESTERNBLOT結(jié)果顯示,在幾組正常的RAEC中,條帶顯色較弱,灰度均值達(dá)1348。結(jié)論在正常大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞中SURVIVIN均有較低的表達(dá)。第二部分?jǐn)y帶針對(duì)大鼠SURVIVIN基因的腺病毒的轉(zhuǎn)染及對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生物特性的影響及其機(jī)制的研究目的研究SURVIVIN基因?qū)Υ笫笱軆?nèi)皮細(xì)胞增殖、凋亡、周期以及血管生成的影響。方法擴(kuò)增、純化過表達(dá)大鼠SURVIVIN基因重組腺病毒,利用RTQPCR、WESTERNBLOT檢測(cè)對(duì)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的感染及基因過表達(dá)效果。針對(duì)過表達(dá)SURVIVIN基因后的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞,采用流式細(xì)胞儀、CCK8等,檢測(cè)SURVIVIN基因在體外對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖、周期的影響。采用WESTERNBLOT檢測(cè)在凋亡和周期通路中與SURVIVIN相互作用的凋亡蛋白CASPASE3、BCL2和周期蛋白CYCLIND。將過表達(dá)SVV的RAEC采用肌肉注射的方法種植于裸鼠體內(nèi),采用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)CD31表達(dá)陽性的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行檢查。結(jié)果增殖型腺病毒在MOI為300時(shí),轉(zhuǎn)染率為95,并具有很明顯的基因過表達(dá)作用。SURVIVIN過表達(dá)后,上調(diào)了BCL2表達(dá)、下調(diào)了CASPASE3從而失活或抑制了其介導(dǎo)的凋亡通路,凋亡率明顯降低;同時(shí),SURVIVIN促進(jìn)了CYCLIND的表達(dá),說明SVV可能同時(shí)參與了大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞周期的調(diào)控,通過細(xì)胞周期蛋白CYCLIND等使細(xì)胞加速?gòu)腉1期到S期的轉(zhuǎn)化。細(xì)胞移植2周以后,肌肉種植處免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示有明顯的新生血管產(chǎn)生,說明SURVIVIN抗凋亡、促增殖能力促進(jìn)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞在體內(nèi)血管生成過程,并一定程度抵抗同種異體抑移植產(chǎn)生的排斥反應(yīng)。結(jié)論構(gòu)建的增殖型腺病毒具有很高的轉(zhuǎn)染率和基因過表達(dá)效果,SURVIVIN對(duì)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,抗凋亡,周期有明顯的影響。胞質(zhì)中的SURVIVIN參與細(xì)胞抗凋亡及細(xì)胞周期的調(diào)控。SURVIVIN基因過表達(dá)抗凋亡,促增殖有助于血管內(nèi)皮細(xì)胞體內(nèi)血管生成。
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    • 簡(jiǎn)介:分類號(hào)R735密級(jí)題單位代碼學(xué)號(hào)1031220131748南京醫(yī)斜犬掌碩士學(xué)位論文目G壘旦亟I壘二壘查膽笪痤主鮑塞達(dá)丞撾膽篁痤細(xì)胞生塹堂盈邊鮑整喧研究生王云完成時(shí)間三Q二盍生五月南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要2ABSTRACT4引言7第一部分CLAUDIN4在膽管癌組織中的表達(dá)情況及與臨床病理特征的關(guān)系9材料與方法9結(jié)果L3第二部分SIRNA干擾CLAUDIN4表達(dá)對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響18材料與方法18結(jié)果29討論。33結(jié)論36綜述41攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況56致射57
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    • 簡(jiǎn)介:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過SDF1ΑCXCR4軸調(diào)控胃癌軸調(diào)控胃癌KATOIII細(xì)胞生物學(xué)特性的研究細(xì)胞生物學(xué)特性的研究專業(yè)外科學(xué)(科學(xué)學(xué)位)碩士生王嘉研究方向胃腸腫瘤外科及基礎(chǔ)研究申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士導(dǎo)師姜波健教授培養(yǎng)單位上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院(北院)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第三人民醫(yī)院學(xué)號(hào)1127269603基金資助項(xiàng)目上海市衛(wèi)生局科研課題基金20134393;上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院科技基金13XJ0282015年4月上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期2015年4月28日
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    • 簡(jiǎn)介:博士學(xué)位論文APL新融合基因TBLRL.RARA的致白血病作用及其治療策略的研究西達(dá)本胺對(duì)急性早幼粒白血病細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及機(jī)制研究所院血液學(xué)研究所姓名李壽蕓指導(dǎo)教師王建祥教授導(dǎo)師小組王敏教授、饒青教授學(xué)科專業(yè)內(nèi)科學(xué)研究方向白血病發(fā)病機(jī)制完成時(shí)間2016年5月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院清華大學(xué)醫(yī)學(xué)部博士學(xué)位論文第一部分APL新融合基因TBLRL.RARA的致白血病作用及其治療策略的研究3
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    • 簡(jiǎn)介:第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文PEBP4表達(dá)對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)行為及化療藥物敏感性影響的初步研究PRELIMINARYSTUDYABOUTTHEIMPACTOFPEBP4EXPRESSIONONBIOLOGICALBEHAVIORANDCHEMOTHERAPYSENSITIVITYINBRAINGLIOMACELLSBRAINGLIOMAS博士研究生黃仁強(qiáng)學(xué)科、專業(yè)外科學(xué)神經(jīng)外科導(dǎo)師盧亦成教授第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院神經(jīng)外科導(dǎo)師組成員侯立軍教授第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院神經(jīng)外科胡國(guó)漢教授第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院神經(jīng)外科駱純教授第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院神經(jīng)外科陳菊祥教授第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院神經(jīng)外科培養(yǎng)單位第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院二零一六年五月一苓一/、年血月目錄摘要一1一ABSTRACT一5一中英文縮略詞對(duì)照表10前言11日Ⅱ舌一11一第一部分PEBP4在膠質(zhì)瘤臨床組織標(biāo)本中的表達(dá)研究15一、引言一15一二、材料和方法15三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果24四、討論29一第二部分PEBP4在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的功能及分子機(jī)制研究38一、引言一38一二、材料和方法38一二、結(jié)果一43一、;口歹代一斗J”四、討論49一第三部分PEBP4表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞替莫唑胺敏感性的影響58一、引言58一二、實(shí)驗(yàn)材料及方法一58一三、結(jié)果6L一四、討論65。全文總結(jié)75一綜J鲞76在校期間發(fā)表的論文99致射100
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    • 簡(jiǎn)介:近年來隨著胃癌相關(guān)診療技術(shù)的不斷進(jìn)步,胃癌患者的總體生存率得到了顯著提高,但其整體治療效果仍不十分理想。腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移是其重要的惡性生物學(xué)行為,從根本上尋找腫瘤發(fā)生、發(fā)展及惡性生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)機(jī)制,可以有效提高胃癌的治療效果。目的研究LIF在胃癌中的表達(dá)情況與病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性,評(píng)價(jià)其在胃癌診斷方面的價(jià)值,探索LIF對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響,并進(jìn)一步探討具體作用機(jī)制。方法1利用ELISA技術(shù)檢測(cè)208例胃癌患者、67例慢性萎縮性胃炎患者和70例正常人LIF因子外周血表達(dá)水平。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)128例胃癌石蠟切塊LIF和LIFR在組織中的表達(dá)。通過WESTERNBLOT和QRTPCR方法檢測(cè)40例胃癌新鮮組織樣本及配對(duì)的癌旁正常組織中LIF和LIFR蛋白和MRNA的表達(dá)情況,并與臨床病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后進(jìn)行相關(guān)性分析。2篩選LIF低表達(dá)、LIFR高表達(dá)的胃癌細(xì)胞株(WESTERNBLOT和QRTPCR方法)。利用RNA干擾技術(shù),借助質(zhì)粒為載體,敲低胃癌細(xì)胞株中LIFR的表達(dá)。通過CCK8、EDU和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)加入外源性LIF因子及沉默LIFR基因后,對(duì)胃癌細(xì)胞增殖能力的影響。采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)LIF及沉默LIFR對(duì)胃癌細(xì)胞的細(xì)胞周期分布和凋亡的影響。采用TRANSWELL實(shí)驗(yàn)觀察LIF及沉默LIFR對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。通過裸鼠體內(nèi)成瘤模型探討LIF及沉默LIFR后對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。3WESTERNBLOT法和細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)LIF對(duì)HIPPOYAP信號(hào)通路中核心元件的影響及相互關(guān)系。利用SIRNA沉默信號(hào)通路下游YAP蛋白表達(dá)后,通過CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LIF是否主要通過HIPPOYAP信號(hào)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響。結(jié)果1胃癌患者、慢性萎縮性胃炎患者、正常人外周血LIF水平分別為8650±6282PGML、4325±1824PGML、3344±1918PGML。胃癌患者LIF水平明顯高于慢性萎縮性胃炎患者P0003和正常人P<0001。LIF診斷胃癌的界值為5585PGML,診斷敏感度8814%,特異度8182%,準(zhǔn)確度8564%。免疫組化結(jié)果顯示LIF和LIFR在胃癌中的陽性表達(dá)率明顯高于正常粘膜P<0001,與腫瘤分化程度P0021、脈管浸潤(rùn)P0001、T分期P0001、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移P0001及PTNM分期P0012存在相關(guān)性。相同腫瘤組織中LIF與LIFR的蛋白表達(dá)量及MRNA含量呈正性相關(guān)P<0001,P<0001。利用COX回歸多因素生存模型分析患者的預(yù)后相關(guān)因素發(fā)現(xiàn)LIF及LIFR與預(yù)后緊密相關(guān),是獨(dú)立的預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)因素P0009,P0034。2MGC803細(xì)胞在幾種常見胃癌細(xì)胞系中LIF的表達(dá)量最低,LIFR的表達(dá)量最高。加入外源性LIF可以顯著增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移、抗凋亡能力和裸鼠體內(nèi)成瘤速度P<0001。沉默LIFR后,與陰性對(duì)照組相比,細(xì)胞的上述惡性生物學(xué)行為能力被明顯減弱,且在LIFR被沉默的細(xì)胞中再次加入LIF無法發(fā)揮上述LIF的腫瘤促進(jìn)作用。3LIF可以顯著降低HIPPOYAP信號(hào)通路中核心元件的磷酸化水平P<0001,并促進(jìn)YAP蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。另外,LIF無法促進(jìn)YAPSIRNA細(xì)胞的增殖。結(jié)論1LIF參與了胃癌內(nèi)在的發(fā)生過程,能夠用于胃癌的診斷,并且與胃癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后緊密相關(guān)。2LIF可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為,而沉默LIFR可以抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在LIFR表達(dá)被沉默后,再次加入LIF無法發(fā)揮其作用,提示LIF是與其受體LIFR結(jié)合,增強(qiáng)腫瘤的惡性生物學(xué)行為能力。3LIF可以有效降低細(xì)胞內(nèi)MST12、LATS1和YAP磷酸化蛋白的含量,從而抑制了HIPPOYAP通路中的核心元件,最終促進(jìn)YAP的核內(nèi)轉(zhuǎn)移。4LIF在胃癌的發(fā)生、進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起到了重要作用,能夠成為未來胃癌靶向治療的重要研究方向。運(yùn)用LIF抗體或沉默LIFR的表達(dá)可以成為一種新型的胃癌個(gè)體化治療手段。
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    • 簡(jiǎn)介:博士學(xué)位論文科學(xué)學(xué)位科學(xué)學(xué)位沉默沉默MUSASHI1基因?qū)Y(jié)腸癌基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性及放細(xì)胞生物學(xué)特性及放療敏感性的影響療敏感性的影響研究生高超高超導(dǎo)師張翼張翼教授專業(yè)生理學(xué)生理學(xué)二級(jí)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院研究起止日期2013年10月2016年1月提交日期2016年4月授予單位代碼10089學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?0131003授予單位代碼10089學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)栔袌D分類號(hào)20131003R73535HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要5英文縮寫11研究論文沉默MUSASHI1基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性及放療敏感性的影響引言13第一部分結(jié)腸癌組織和細(xì)胞中MUSASHI1蛋白表達(dá)及MUSASHI1穩(wěn)定低表達(dá)結(jié)腸癌細(xì)胞系構(gòu)建前言15材料與方法17結(jié)果36附圖38討論45小結(jié)49參考文獻(xiàn)50第二部分沉默MUSASHI1對(duì)結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞生物學(xué)特性的影響前言54材料與方法55結(jié)果61附圖63討論70小結(jié)75參考文獻(xiàn)76第三部分沉默MUSASHI1對(duì)結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的分子機(jī)制前言80材料與方法82結(jié)果92附圖93討論96
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    • 簡(jiǎn)介:2016年3月授予單位代碼授予單位代碼10089學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)枌W(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?0132070中國(guó)圖書分類號(hào)中國(guó)圖書分類號(hào)R73058細(xì)絲蛋白細(xì)絲蛋白A下調(diào)對(duì)下調(diào)對(duì)HER2HER2陽性乳腺癌細(xì)胞生物陽性乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響學(xué)行為的影響研究生生李怡導(dǎo)師師朱鐵年朱鐵年教授教授專業(yè)業(yè)腫瘤學(xué)腫瘤學(xué)二級(jí)學(xué)院二級(jí)學(xué)院白求恩國(guó)際和平醫(yī)院白求恩國(guó)際和平醫(yī)院HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要6英文縮寫10研究論文細(xì)絲蛋白A下調(diào)對(duì)HER2陽性乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響前言11材料與方法13結(jié)果28附圖30附表37討論40結(jié)論45參考文獻(xiàn)46綜述HER2陽性乳腺癌分子靶向治療的研究進(jìn)展50致謝63個(gè)人簡(jiǎn)歷64
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    • 簡(jiǎn)介:RBM8A與肝細(xì)胞癌發(fā)生的相關(guān)性及對(duì)肝細(xì)胞癌增殖及凋亡生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究2013級(jí)博士研究生年級(jí)2013級(jí)學(xué)號(hào)201310031廣西醫(yī)科大學(xué)廣西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文RBM8A與肝細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)肝細(xì)胞癌與肝細(xì)胞癌的相關(guān)性及對(duì)肝細(xì)胞癌增殖及凋亡生物學(xué)特性的影響增殖及凋亡生物學(xué)特性的影響葉甲舟指導(dǎo)教師姓名黎樂群指導(dǎo)教師姓名黎樂群教授教授專業(yè)名稱腫瘤外科學(xué)專業(yè)名稱腫瘤外科學(xué)申請(qǐng)學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位申請(qǐng)學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位二零一六年三月二零一六年三月RBM8A與肝細(xì)胞癌發(fā)生的相關(guān)性及對(duì)肝細(xì)胞癌增殖及凋亡生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究2013級(jí)博士研究生簽字日期年月日簽字日期年月日目錄主要縮略語英文對(duì)照表1摘要4ABSTRACT9一、RBM8A與人肝細(xì)胞癌相關(guān)性的臨床初步研究141前言142材料及方法1821標(biāo)本1822實(shí)驗(yàn)方法193結(jié)果334討論42參考文獻(xiàn)46二、RBM8A與肝癌細(xì)胞增殖及凋亡特性的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究521前言522材料與方法5321體外肝癌細(xì)胞株RBM8A表達(dá)的篩選檢測(cè)5322HUMANRBM8過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建與包裝53221階段1RBM8A過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建53222階段2慢病毒的包裝和病毒滴度的測(cè)定60
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    • 簡(jiǎn)介:隨著電力工業(yè)的快速發(fā)展與家用電器的日益普及,環(huán)境工頻磁場(chǎng)(在我國(guó)主要為50HZ磁場(chǎng))的暴露水平不斷增加,其可能的健康危害日益引起公眾的關(guān)注?;谟邢薜牧餍胁W(xué)研究證據(jù),世界衛(wèi)生組織下屬的國(guó)際癌癥研究中心將極低頻磁場(chǎng)0300HZ歸類為人類可疑致癌原。大量實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示工頻磁場(chǎng)暴露可能影響生物體或細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng),但研究結(jié)果不一致,其關(guān)鍵是低強(qiáng)度工頻磁場(chǎng)與生物體作用的生物學(xué)機(jī)制不清楚。已有研究顯示,靜磁場(chǎng)、脈沖電場(chǎng)暴露影響液體或溶液中生物大分子的物理特性,且受暴露的液體或生物大分子能作用于細(xì)胞或生物體產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。為此,我們假設(shè)工頻磁場(chǎng)暴露體外培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)可能是通過作用細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)而影響細(xì)胞功能實(shí)現(xiàn)的。為探索工頻磁場(chǎng)產(chǎn)生效應(yīng)的機(jī)制,本學(xué)位論文研究分析了50HZ磁場(chǎng)暴露對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液物理特性的影響及經(jīng)磁場(chǎng)暴露后的培養(yǎng)液對(duì)細(xì)胞功能的影響。首先,我們將ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液(含10%FBS)暴露于40MT的50HZ磁場(chǎng)不同時(shí)間0~60MIN,利用檢測(cè)表面等離子體共振SURFACEPLASMONRESONANCE,SPR的相位信號(hào)變化來分析培養(yǎng)液折射率的變化情況,并觀察了不同強(qiáng)度0~40MT50HZ磁場(chǎng)暴露對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液SPR相位信號(hào)的影響。結(jié)果顯示,50HZ磁場(chǎng)暴露引起ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液的SPR相位信號(hào)變化,且該效應(yīng)具有磁場(chǎng)暴露時(shí)間、暴露強(qiáng)度依賴性。同時(shí),我們將細(xì)胞培養(yǎng)液暴露于40MT的50HZ磁場(chǎng)暴露30MIN后停止磁場(chǎng)暴露,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液的SPR相位信號(hào)能夠恢復(fù)并接近本底水平,提示該效應(yīng)具有可逆性。進(jìn)一步,本研究利用受40MT的50HZ磁場(chǎng)暴露或假暴露1H后的細(xì)胞培養(yǎng)液來處理人羊膜上皮FL細(xì)胞,將細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)至48H,采用CCK8法分別檢測(cè)FL細(xì)胞的活力將50HZ磁場(chǎng)暴露組的細(xì)胞培養(yǎng)液孵育FL細(xì)胞5~60MIN,采用WESTERNBLOT法檢測(cè)MAPK信號(hào)通路ERK,P38和自噬信號(hào)通路P62,LC3相關(guān)蛋白的表達(dá)水平采用ΓH2AX焦點(diǎn)形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞DNA雙鏈斷裂情況,采用堿性彗星實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DNA片段化情況利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)胞內(nèi)活性氧自由基ROS的變化。結(jié)果顯示,受40MT的50HZ磁場(chǎng)暴露的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)FL細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞的活力、MAPK信號(hào)通路和自噬通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平、DNA損傷和胞內(nèi)ROS水平?jīng)]有顯著影響。另一方面,本研究采用相位SPR成像傳感技術(shù)分析50HZ磁場(chǎng)暴露對(duì)表皮生長(zhǎng)因子EGF溶液SPR信號(hào)的影響。結(jié)果顯示,相對(duì)于假暴露組,50HZ磁場(chǎng)暴露組的EGF溶液SPR相位值較初始值減小。以表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR連接金膜為固定相,以EGF溶液為流動(dòng)相,我們發(fā)現(xiàn)相位SPR成像傳感技術(shù)能檢測(cè)EGF和EGFR的相互作用,但經(jīng)50HZ磁場(chǎng)暴露的EGF未影響EGF和EGFR的相互作用。進(jìn)一步,我們分析了受50HZ磁場(chǎng)暴露的EGF作用細(xì)胞產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng),即將50HZ磁場(chǎng)暴露的EGF配制入含1%FBS的ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液并培養(yǎng)FL細(xì)胞,然后檢測(cè)細(xì)胞活力和EGFR聚簇。結(jié)果顯示,EGF能增強(qiáng)細(xì)胞活力和促進(jìn)EGFR聚簇但與假暴露組相比,50HZ磁場(chǎng)暴露組的EGF未能影響FL細(xì)胞的活力和EGFR聚簇?;谝陨涎芯拷Y(jié)果,我們認(rèn)為,在本實(shí)驗(yàn)條件下,50HZ磁場(chǎng)暴露引起含10%FBS的ΑMEM細(xì)胞培養(yǎng)液SPR相位信號(hào)的變化,但受50HZ磁場(chǎng)暴露的細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)FL細(xì)胞活力、MAPK信號(hào)通路和自噬通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平、DNA損傷和細(xì)胞內(nèi)ROS水平均沒有顯著影響。此外,50HZ磁場(chǎng)暴露影響生物大分子EGF的SPR相位信號(hào),但受50HZ磁場(chǎng)暴露的EGF末影響體外EGF和EGFR的相互作用和FL細(xì)胞活力、EGFR聚簇。我們的研究數(shù)據(jù)提示,與靜磁場(chǎng)、脈沖電場(chǎng)不同,50HZ磁場(chǎng)暴露引起的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)可能不是通過影響細(xì)胞培養(yǎng)液或培養(yǎng)液中生物大分子的物理特性實(shí)現(xiàn)的。
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    • 簡(jiǎn)介:BTK抑制劑對(duì)急性髓系細(xì)胞自血病細(xì)胞生物學(xué)的影響及其機(jī)制的研究THEINFLUENCEOFBTKINHIBITORTOWARDSBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFAMLCELLLINESANDMECHANISMRESEARCH導(dǎo)論文課題起止時(shí)間2Q壘生魚月2Q魚生3旦中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧2016年3月目錄一、摘要中文論著摘要1英文論著摘要3二、英文縮略語6三、論文前言與背景7材料與方法9結(jié)果11討論17結(jié)論19四、本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)20五、參考文獻(xiàn)2L六、附錄綜述24致謝32個(gè)人簡(jiǎn)介33
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