Btk抑制劑對急性髓系細胞白血病細胞生物學(xué)的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：
　　急性髓系細胞白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是成人最為常見的一類急性白血病，其異質(zhì)性較高[1]，目前，其治療上仍然首選聯(lián)合化療的方法，然而，除急性早幼粒細胞白血病(APL)之外，其余分型的AML在采用聯(lián)合化療治療一段時間后，患者便對治療具有一定程度的耐藥傾向，總體治療效果較差。Btk抑制劑，又名布魯頓酪氨酸激酶抑制劑。Ibrutinib（中文名為依魯替尼）為一種小分子Btk抑制劑，它作為目

2、前治療B細胞系血液腫瘤的新藥[2-3]，已經(jīng)應(yīng)用于套細胞及慢性淋巴細胞白血病的臨床治療，而在AML細胞中研究較少，其機制也不甚明確，本課題旨在研究Btk抑制劑Ibrutinib對AML細胞生物學(xué)特性的影響及部分機制的研究。
　　方法：
　　分別用不同濃度的Ibrutinib作用于AML細胞系U937、OCI-AML3后，采用CCK8的方法及流式細胞術(shù)分別來檢測Ibrutinib對AML細胞系的細胞增殖、細胞凋亡及細胞周期的影

3、響，用Western-Blot的方法分別檢測Ibrutinib對CleavedCaspase-3、P-Akt、NF-KB(p65)蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：
　　不同濃度的Ibrutinib（0，2.5，5，10，15，20，25，30，50 umol/L）作用于U937、OCI-AML3細胞系24h、48h、72h后，可見細胞活力下降，細胞增殖受到抑制，抑制作用的強度與藥物濃度-劑量、作用時間呈正相關(guān)。
　　根據(jù)細

4、胞增殖實驗的檢測結(jié)果，選取接近24h和48h時IC50對應(yīng)的Ibrutinib濃度作為兩個時間點(24h、48h)的實驗組濃度，以不加藥為對照組。進行細胞凋亡檢測，其結(jié)果如下:
　　(1)Ibrutinib作用24h:對照組、實驗組U937細胞凋亡率分別為:7.41％±1.08％，30.76±1.30％(P＜0.001);對照組、實驗組OCI-AML3細胞凋亡率分別為:12.08％±1.36％,23.54％±1.14％(P＜0.0

5、01)。
　　(2)Ibrutinib作用48h:對照組、實驗組U937細胞凋亡率分別為:23.74％±2.50％，44.21％±1.32％(P＜0.001);對照組、實驗組OCI-AML3細胞凋亡率分別為:28.62％±1.4％,57.63％±3.10％(P＜0.001)。
　　分別以不同濃度的（0、20、30um/L）Ibrutinib作用于U937、OCI-AML3細胞24h小時后，兩細胞系的G0/G1期細胞比例升高，

6、S期、G2/M期細胞比例下降。
　　Ibrutinib作用于U937細胞系24h，提取蛋白，用western-blot方法檢測蛋白表達情況，結(jié)果示:P-Akt、NF-KB(p65)此兩種蛋白在實驗組表達減少;與之相反，Cleaved Caspase-3蛋白在實驗組表達增多。
　　結(jié)論：
　　Ibrutinib對AML細胞系（U937、OCI-AML3）有抑制增殖的作用，且抑制作用的強度具有濃度-劑量依賴性和時間依賴性。

7、
　　Ibrutinib對AML細胞系(U937、OCI-AML3)有促進凋亡的作用。
　　Ibrutinib作用于AML細胞系(U937、OCI-AML3)，能使G0/G1期細胞比例增高，S期、G2/M期細胞比例降低，使細胞從G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變過程存在阻滯。
　　Ibrutinib作用后，P-Akt、NF-KB(p65)蛋白表達下調(diào); Cleaved Caspase-3蛋白表達上調(diào)，考慮Ibrutinib能抑制A